金钗石斛的位点特异性PCR鉴别研究

目的建立一种简便、实用的金钗石斛的DNA分子鉴别方法。方法根据金钗石斛及其他黄草类、枫斗类石斛的rDNA ITS序列数据库,寻找金钗石斛特异性的序列位点,设计专用于金钗石斛鉴别的PCR引物,用该引物在不同条件下扩增石斛属植物的模板DNA,建立只有金钗石斛具有阳性扩增的PCR鉴别条件。结果在66℃、40 s的复性条件下进行鉴别PCR,金钗石斛的模板DNA扩增出约300 bp的阳性扩增带,而其他39种石斛的模板DNA在同样条件下无扩增产物。结论运用位点特异性PCR能有效地从其他石斛属植物中鉴别出金钗石斛,该方法具有高效、准确、简便、省时的特点,应用前景广泛。     

双阻滞位点特异性PCR鉴别铁皮石斛及其近缘物种

建立一种快速、准确鉴别铁皮石斛加工制品的方法。该研究通过对Gen Bank数据库收录的铁皮石斛及其同属近缘物种的ITS序列进行对比分析,根据变异位点设计双阻滞位点特异性鉴别引物,并优化PCR条件,对铁皮石斛及其69种近缘种共362个样品进行扩增和检测。结果显示,在退火温度为60℃的同一PCR反应中,铁皮石斛均扩增出397 bp条带,而其他69种近缘物种均无条带,且该方法灵敏度高,检出限可达0.03 mg·L~(-1)。该文所建立的位点特异性PCR方法可实现铁皮石斛的准确鉴别,具有操作简便、稳定可靠、应用范围广的优点。     

位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究

目的:针对正品鹿茸与近源种鹿茸药材饮片鉴别的难点,建立一种简便、快速、准确的近源种鹿茸药材分子鉴别方法.方法:根据鹿科鹿属种动物cytb全序列比对分析,设计1对能准确鉴别正品鹿茸(包括梅花鹿和马鹿)和其他近源种鹿茸的引物,在此基础上建立鹿茸药材位点特异性PCR鉴别方法,并对影响PCR结果的主要因素退火温度、Taq用量、循环次数以及模板用量和重复性等进行方法学考察和优化.结果:在方法学考察的基础上,在μL PCR反应体系,退火温度为65℃的条件下,能准确扩增出约323 bp大小的阳性DNA条带,经测序验证结果表明,系正品鹿茸原动物的Cytb基因序列片段,而伪品鹿茸未扩增出条带.结论:所建立的位点特异性PCR方法,能将正品鹿茸与其他近源种鹿茸药材鉴别开来,具有较高的特异性、重复性,可广泛应用于鹿类药材的鉴别.     

中药材鳖甲的位点特异性PCR鉴定研究

目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲DNA分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动物的125rRNA基因片段的序列数据库,找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点,设计1对能特异性鉴别中华鳖的引物,然后利用鳖甲中残存的DNA,通过PCR拉增,即可准确鉴别鳖甲。结果 用这对引物对不同来源的10块鳖甲进行鉴定结果表明,其中有3块为伪品,结果与DNA序列分析鉴定一致。还测定了斑龟和鳖甲一伪品12SrRNA基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试盒可在鳖甲类药材鉴定使用。     

金银花配方颗粒的位点特异性PCR鉴别研究

中药配方颗粒已失去所有形态学辨识特征,传统鉴定方法无法有效鉴定其真伪。该文使用位点特异性PCR鉴别技术,根据金银花trnL-trnF的一个SNP位点设计特异性鉴别引物,对金银花基原植物及配方颗粒进行鉴定。经过优化DNA提取方法后,药材与配方颗粒均成功提取到DNA,金银花基原植物及配方颗粒均可扩增获得约110 bp的条带,混伪品无条带。且BLAST结果比对证明PCR产物序列为金银花trnL-trnF序列。该文研究结果表明,DNA分子鉴定方法可弥补性状、显微鉴别局限性,对中药配方颗粒真实性进行快速准确的鉴定,为其生产、流通、用药安全提供科学依据和保障。     

鼓槌石斛特异性PCR分子鉴定

目的 研究能够特异性鉴别鼓槌石斛的PCR引物,并优化PCR检测体系,确立一种快速、准确鉴别鼓槌石斛的方法.方法 从GenBank数据库中下载石斛属rDNA ITS序列170余条,运用MEGA 5.0对所有序列进行同源性比较,找出各变异位点,在非保守区设计1对特异性引物.对35份石斛属植物DNA模板进行特异性引物PCR扩增,显示阳性者为鼓槌石斛.结果 将退火温度升至58℃时,鼓槌石斛能被该引物特异性地扩增出来,而其他石斛属植物均为阴性,且该引物的灵敏度可达到0.69 ng/μL.结论 建立一种特异性鉴别鼓槌石斛的方法,运用该特异性引物可实现从同源物种中快速、准确地鉴定出鼓槌石斛,具有特异性好,操作简便、高效、准确等优点.     

多重位点特异性PCR鉴别海龙及其混伪品

目的:建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴别方法。方法:通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序列差异,根据变异位点设计刁海龙、尖海龙及拟海龙的特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上,将3对特异性引物组合,构建多重PCR体系。结果:在多重PCR体系中,刁海龙能扩增出485 bp片段,尖海龙可扩增出120 bp片段,拟海龙可以扩增出240 bp片段,其他混伪品均无条带。所设计的特异性鉴别引物具有高度的特异性。结论:该文所建立的位点特异性PCR鉴别方法可实现海龙的准确鉴别。     

基于ITS序列位点特异性PCR鉴别桃仁与苦杏仁

目的:对桃仁和苦杏仁进行分子鉴定研究,建立基于ITS序列位点特异性的PCR鉴定方法。方法:收集桃仁、苦杏仁样品,提取基因组总DNA,用ITS通用引物进行测序,通过Bio Edit软件进行序列比对,根据特异位点设计鉴别引物进行特异性PCR反应,并对PCR反应条件进行了优化。结果:基于ITS序列设计的特异性鉴别引物G4-7可以用于桃仁和苦杏仁的鉴别研究,在位点特异性PCR反应条件考察中,25μL反应体系DNA模板用量适宜范围为0.05~1 ng,退火温度在59℃时特异性最佳,实验建立的方法对不同DNA聚合酶和PCR仪均具有普适性。结论:该研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,桃仁能够扩增出333 bp清晰条带,而苦杏仁没有该条带,从而实现了桃仁与苦杏仁的快速、准确鉴别。     

多重位点特异性PCR同时鉴别酸枣仁及其掺伪品

目的：优化并建立多重位点聚合酶链式反应（PCR）体系同时鉴别酸枣仁、枳椇子和理枣仁及不同掺伪量,解决酸枣仁药材商品及其制剂的掺伪难题。方法：通过分析比对酸枣仁及其伪品的内部转录间隔区（ITS）序列差异找到特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,设计特异性鉴别引物,通过优化退火温度、循环次数及引物浓度,评估不同聚合酶种类和不同PCR仪等扩增条件对不同来源的酸枣仁、枳椇子及理枣仁样品进行特异性扩增,根据特异性扩增条带大小进行鉴别,并对最低检测限和掺伪检出限进行研究。结果：在退火温度为63℃,循环次数为23次时,酸枣仁、枳椇子和理枣仁分别扩增出549、169、389 bp的特异性条带。该方法对酸枣仁和理枣仁的最低检测限为0.24 ng,枳椇子为1.2 ng,对酸枣仁、枳椇子和理枣仁的掺伪检出限分别为0.5%、2%和2%。结论：该文建立的多重位点特异性PCR鉴别方法能同时准确鉴别酸枣仁、枳椇子和理枣仁,对解决酸枣仁药材掺伪问题提供基础研究,为控制酸枣仁药材质量安全及临床应用提供参考。     

多基原九里香药材的多重位点特异性PCR鉴别

目的 建立一种同时鉴别九里香药材两基原九里香Murraya exotica和千里香M. paniculata的DNA分子鉴别方法。方法 通过比较九里香、千里香的叶绿体基因组序列差异,根据叶绿体基因组上的单核苷酸多态性（SNP）变异位点分别设计九里香和千里香的特异性鉴别引物P03和P04,对影响聚合酶链式反应（PCR）结果的退火温度、循环次数、引物浓度比进行优化,建立了九里香和千里香的多重位点特异性PCR鉴别方法,并对影响该方法重复性的Taq酶种类、PCR仪型号进行耐受性考察和适用性考察。结果 在该多重位点特异性PCR鉴别方法中,当PCR反应循环数为31次,退火温度为60 ℃,九里香P03和千里香P04引物比为1∶2时,九里香可获得约330 bp的特异性条带,千里香可得到约230 bp的特异性条带,不同来源的九里香和千里香样品使用建立的多重位点特异性PCR鉴别方法均可获得一致结果。结论 该文建立一种快速、准确鉴别九里香药材基原的多重位点特异性PCR鉴别方法,可在单次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别九里香和千里香。     

HPLC法测定丹参中丹酚酸B

丹参是唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bunge的根，为常用中药，性微寒、味苦，归心、肝经；具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功能。我国应用丹参已有近2000年的悠久历史，始载于东汉《神农本草经》，列为上品。丹参有效成分主要有水溶性的酚酸类，包括丹参素、丹酚酸B等；脂溶性的二萜醌类，包括丹参酮ⅡA等。其中，主要水溶性成分丹酚酸B（salvianolic acid B）为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，对其的测定方法已有文献探讨，但对丹参药材中丹酚酸B量的集中范围进行大规模考察还未见报道。本实验对80个丹参样品进行测定，并对数据进行归纳总结。     

不同薯蓣皂苷元的盾叶薯蓣遗传关系的RAPD分析

目的从DNA水平分析鉴定不同薯蓣皂苷元盾叶薯蓣的遗传关系。方法从40个10 bp随机引物中筛选出12个引物,进行RAPD分析,应用POPGENE 1.31软件对扩增结果进行聚类分析。结果共扩增出73条DNA片段,其中多态性片段64条,占87.67%,盾叶薯蓣类型间具有明显的多态性差异。结论DNA分子多样性差异与薯蓣皂苷元量差异具有相关性,说明盾叶薯蓣的遗传基础可能对薯蓣皂苷元的形成和积累有显著的影响。     

继代周期对霍山石斛试管苗生长及培养基成分的影响

目的研究继代周期对霍山石斛试管苗长势及培养基成分的影响,确定最佳的继代周期时间。方法测定不同继代周期试管苗的株高、分蘖数、鲜质量、叶绿素量及培养基pH、含水量、含糖量的变化,并计算石斛试管苗生长所需的培养基和其他的成本。结果继代周期为40d,试管苗的株高比继代前增加了282.86%,分蘖数比继代前增加了3.5倍,试管苗的鲜质量最大,叶绿素的量趋于最大值;培养基的含水量、可溶性糖的量最低;pH<4.75,已不适合石斛试管苗的生长,石斛苗生长所需成本较低。结论40d为霍山石斛试管苗生长的最佳继代周期。     

霍山石斛生理生化性质的研究进展

石斛属(D end robium Sw.)为兰科植物,约有1 500种。我国有80种,其中药用石斛有51种。在我国传统医学中,石斛为常用药材,现代药理研究证明石斛具有抗肿瘤、抗衰老、降血糖等作用。霍山石斛是安徽省特产的药用石斛,为石斛中的上品。综述了霍山石斛的生理生化、生物学特性、有效成分等方面的研究现状。     

霍山石斛的生化特征及光合过程的研究进展

考察安徽特产的珍稀中药霍山石斛的生态环境特征,从不同生化因子对其光合过程的影响,霍山石斛的药效品质特性,以及其对光照和温度的需求规律等方面进行系统综述。提出其光合过程智能光声检测的研究思路,以及霍山石斛生化特征及光合过程最适化检测的研究重点和发展方向。     

霍山石斛种内遗传稳定性的RAPD初探

目的 研究霍山石斛荚果内遗传稳定性及荚果间的差异大小。方法 利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对来自5个不同荚果的霍山石斛种群进行RAPD检测。结果 5个荚果内遗传相似系数较大,在92.5926%-100.00%,其中H1、H9、H10、H14存在一定程度的变异,H23是一个较为稳定的群体;5个荚果间H1、H9、H10、H23的遗传距离较小,H14与其他4个荚果的遗传距离则较大。结论 建立霍山石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的,同时说明霍山石斛种内存在一定的变异,H14与其他荚果的差异最大。     

HPAEC-PAD法测定霍山石斛中6种单糖

目的建立HPAEC-PAD法测定霍山石斛Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng中甘露糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖的含有量。方法依次采用超声处理、水解和氮气吹干法制备供试品溶液。氢氧化钠/醋酸钠溶液梯度洗脱;温度30℃;电极材料Au;参比电极pH-Ag/AgCl;电位波形糖四电位;体积流量0.45 mL/min。结果甘露糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖在各自范围内线性关系良好(r>0.990 0),平均加样回收率分别为93.4%、92.3%、93.7%、106.1%、94.1%、103.7%,RSD分别为2.1%、1.7%、3.3%、1.2%、4.5%、1.7%。结论该方法稳定性好,灵敏度高,可用于霍山石斛的质量控制。     

霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化

目的利用细胞悬浮培养技术生产霍山石斛单细胞,解决石斛药用植物资源短缺问题。方法以霍山石斛叶片等外植体为实验材料,通过不同的制备方法获得霍山石斛单细胞,研究霍山石斛细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化霍山石斛细胞悬浮培养的条件。结果在蔗糖35 g/L,NH4NO3 1.3 g/L,pH 5.6,激素IAA 0.4 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,培养时间14～18 d,在此条件下培养的霍山石斛细胞数为9.42×105个/mL。结论经过4次继代培养后石斛细胞多为圆状或椭圆状,细胞碎片减少。应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的霍山石斛细胞。     

霍山县3种石斛叶片光合特性及其对光强的响应

目的研究石斛的光合特性,了解其适宜栽种的光强。方法测定霍山县3种石斛(霍山石斛Dendrobiumhuoshanens,铁皮石斛D.candium,铜皮石斛D.moniliforme)的光合速率对光强响应曲线,不同光强处理时叶绿素荧光参数的变化及3.0×104lx瞬时光强下叶片荧光猝灭诱导。结果霍山县3种石斛属于阴生植物对光强的响应,光饱和点、光补偿点较低,净光合速率和表观量子效率都较低;大于4.0×104lx强光下石斛叶片受光抑制严重。结论霍山县3种石斛生长光强,一般为(0.2～2.0)×104lx;可以在(2.5～3.0)×104lx光强的环境中生长;不适宜在大于4.0×104lx光强的环境中生长。