三氧化二砷对肝癌HepG2细胞铁死亡影响的研究

目的 探究三氧化二砷是否会诱导肝癌细胞铁死亡,并比较Alamar blue 法和MTT法在肝癌细胞铁死亡中检测细胞活力的差异。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,分为对照组、三氧化二砷处理组、公认的铁死亡诱导剂Erastin处理组以及联合铁死亡抑制剂Ferrostatin-1处理组,分别采用倒置生物显微镜观察各组细胞形态及存活情况,采用MTT法和Alamar blue 法检测各组细胞活力,探索三氧化二砷是否可以诱导铁死亡。结果 不同浓度三氧化二砷或Erastin处理后,HepG2细胞出现不同程度的死亡;铁死亡抑制剂Ferrostatin-1可以抑制Erastin诱导的细胞铁死亡,但不能抑制三氧化二砷诱导的细胞死亡;与MTT法相比,Alamar blue 法在检测细胞铁死亡时与显微镜观察结果一致,且各浓度组内检测值标准差较小。结论 三氧化二砷可能不会诱导肝癌细胞铁死亡;Alamar blue 法较MTT法在肝癌HepG2细胞铁死亡后活力检测中有更高的灵敏性,是细胞铁死亡研究中活力检测的首选方法。     

三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株，分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理，用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况；采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化，细胞DNA含量的分布，测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3，组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加，Bcl-2基因的表达明显降低；在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰，使S期细胞减少，将细胞生长周期阻滞于G2/M期，联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡，其主要机制与增强Bax、Fas的表达，下调Bcl-2的表达，将细胞生长周期阻滞于G2/M期，阻止细胞的有丝分裂，抑制端粒酶活性有关。     

三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株,分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理,用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况;采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化,细胞DNA含量的分布,测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加,Bcl-2基因的表达明显降低;在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰,使S期细胞减少,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡,其主要机制与增强Bax、Fas的表达,下调Bcl-2的表达,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,阻止细胞的有丝分裂,抑制端粒酶活性有关。     

应用基因芯片技术筛选转染NOR1基因后HepG2细胞差异表达基因

目的研究转染NOR1基因后肝癌细胞系HepG2基因表达谱的改变。方法应用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1( )/NOR1真核表达载体和pcDNA3.1( )空白载体分别转染入肝癌细胞系HepG2,再分别提取转染pcD-NA3.1( )/NOR1和空载体pcDNA3.1( )的HepG2细胞总RNA,应用基因芯片技术进行芯片分析。结果芯片分析结果显示差异表达基因中上调的基因有59个,下调的基因有103个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论应用基因芯片技术成功筛选了NOR1基因转染细胞后差异表达基因,为阐明NOR1基因与肝癌发生发展的关系提供了实验依据。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3 )对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响.方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达.结果 0.25μmol/ L As2O3 (24～72 h) 可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应.结论 As2O3可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性.     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响。方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果0.25μmol/LAs2O3(24~72h)可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应。结论AsO可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性。     

检测TRAF-2在骨肉瘤细胞中的表达及三氧化二砷、VEGF对其表达的影响

目的通过检测肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF-2)在骨肉瘤细胞表达的变化及三氧化二砷(As2O3)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对其表达的影响,探讨TRAF-2在骨肉瘤发病机制中的作用。方法人骨肉瘤Sa OS-2细胞经分别加入不同浓度的As2O3和(或)VEGF培养48 h后,采用实时荧光定量PCR法测定TRAF-2 mRNA的表达水平。结果 100 ng/ml浓度的VEGF能显著上调TRAF-2 mRNA的表达水平,差异有统计学意义(P0.01),50 ng/ml以下浓度的VEGF对TRAF-2 mRNA的表达水平没有影响,差异无统计学意义(P0.05);2μmol/L以上浓度的As2O3能显著下调TRAF-2 mRNA的表达水平,并能显著降低100 ng/ml浓度的VEGF对TRAF-2 mRNA表达水平的上调功能,差异有统计学意义(P0.01);而1μmol/L浓度的As2O3对TRAF-2 mRNA的表达水平没有影响,并不影响100 ng/ml浓度的VEGF对TRAF-2 mRNA表达水平的诱导作用,差异无统计学意义(P0.05)。结论 TRAF-2在骨肉瘤的发病机制中可能起重要作用,VEGF具有上调TRAF-2 mRNA表达水平的作用,而As2O3则起相反作用,两者具有一定的量-效关系。     

三氧化二砷与肿瘤的细胞凋亡

砷是一种与机体有密切关系的微量元素 ,三氧化二砷能诱导多种细胞产生细胞凋亡。细胞凋亡是多细胞生物体的重要的自稳机制之一 ,它的异常在肿瘤的发病上具有重要作用。相应地 ,干预细胞凋亡的手段可望成为肿瘤治疗的新策略。阐述近年来三氧化二硒对肿瘤的细胞凋亡调控的研究结果。     

三氧化二砷对黄鳝外周血红细胞微核的影响

目的观察不同浓度的三氧化二砷对黄鳝外周血红细胞微核和核异常的影响.方法采用鱼类致突变实验方法,以0.25,0.50,0.75,1.00,1.50mg/kg不同剂量三氧化二砷处理黄鳝,测定黄鳝外周血红细胞微核率和核异常率、过氧化氢酶活性.结果 0.50mg/kg剂量组的微核率与核异常率均高于0.25mg/kg剂量组.0.75mg/kg剂量组的微核率与核异常率均下降,且低于阴性对照组,但无显著性差异(P＞0.05).剂量继续增加到1.00,1.50mg/kg时,其核异常率又显著回升,而微核率回升却并不显著.0.25～1.00mg/kg 4个剂量均使过氧化氢酶(CAT)活性增加.结论三氧化二砷对黄鳝外周血红细胞的作用具有双向性,且对CAT具有激活作用.     

常用柠檬酸钠抗凝血浆对HepG2细胞的损伤观察

目的观察常用柠檬酸钠抗凝血浆(scP)对HepG2细胞的损伤,为大量输注或置换血浆治疗晚期重型肝炎病人研究提供实验依据。方法复苏培养HepG2细胞。四甲基偶氮唑盐法测细胞活力,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,检测细胞LDH漏出量和总蛋白、谷胱甘肽含量,观察培养过程中细胞形态变化,系统了解scP对体外培养HepG2细胞生长、损伤、功能和形态方面的影响。结果⑴各浓度scP培养第1d HepG2细胞活力下降(F=37.108,P=0.001);第2天除10%scP组外,50%、100%scP组细胞绝大部分死亡。⑵细胞生长周期测定50%scP培养1 d HepG2细胞S期所占比例较对照组增高,凋亡率10%scP和50%scP组都远高于对照组。⑶scP作用HepG2细胞5 h,LDH漏出量都高于RPM I-1640对照组(P值均<0.05),这种差异随浓度升高加大。⑷scP培养HepG2细胞24 h总蛋白合成下降,GSH含量升高。⑸光镜下100%scP培养24 h,HepG2细胞大部分死亡,10%scP组生长相对较好;100%hP组与对照组比较差异无统计学意义。结论scP对体外培养HepG2细胞有毒性作用,原因主要与血液保养液中所含的柠檬酸和柠檬酸钠有关。     

三氧化二砷反式激活基因1的克隆化

目的 克隆三氧化二砷反式激活靶基因1（AsTP1）。方法 从构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞、T淋巴细胞cDNA消减文库筛选，利用RT-PCR和生物信息学分析相结合的方法获得新基因AsTP1的编码序列，对其氨基酸序列进行分析比较，并对其进行克隆化研究。结果 AsTP1基因编码区为243个核苷酸（nt），编码产物为80个氨基酸残基（aa）。经核苷酸序列数据库（GenBank）和蛋白质一级结构序列数据库（SwissProt）同源序列的搜寻，与已知基因序列之间没有显著同源性，说明克隆的AsTP1基因属于未知功能新基因。结论 发现三氧化二砷反式激活靶基因AsTP1，为进一步研究三氧化二砷的反式激活作用和揭示慢性砷中毒的分子机制提供新线索。     

三氧化二砷抗肿瘤机制的研究进展

近年来,三氧化二砷在白血病等各种恶性肿瘤治疗的基础研究和临床实践方面已取得了长足的进步。本文从其诱导肿瘤细胞凋亡、对癌细胞的靶向作用、对抑癌基因的去甲基化作用以及抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成等方面对三氧化二砷抗癌作用机制的研究进展进行综述。     

As2O3对NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对急性粒细胞白血病细胞株NB4（APLM3）凋亡及细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测As2O3对NB4的细胞毒活性，流式细胞仪AnnexinVFITC-PI检测细胞凋亡率，溴化丙碇（PI）染色法检测细胞周期。结果1～8μmol／LAs2O3能显著抑制NB4细胞增殖，且这些变化呈明显的时间和浓度依赖关系（时间一剂量效应）。2～8μmol／LAs2O3能显著诱导NIM细胞凋亡，处理时间为12h，其早期凋亡率和总凋亡率均与剂量呈线性正相关；处理时间为24h，其早期凋亡率、中晚期凋亡率和总凋亡率与剂量呈线性正相关；As2O3处理时间为36h和48hNB4细胞以中晚期调亡为主。流式细胞检测表明，不同浓度的As2O3均使NB4细胞周期阻滞在G2／M期。结论As2O3能抑制人白血病NB4细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖使细胞受阻于G2／M期。其诱导凋亡作用具有时间和浓度依赖关系。     

三氧化二砷抗肿瘤作用的研究进展

为了解三氧化二砷抗肿瘤作用的药理作用研究的近况,本文总结其在治疗血液肿瘤和实体瘤方面的机理和应用研究进展,以期为三氧化二砷在抗肿瘤方面的研究提供新的思路。     

不同温度热疗对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨不同温度热疗对体外培养肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响. 方法 采用水浴对肝癌HepG2细胞行43℃、46℃、48℃、50℃实验组和37℃对照组热疗,用倒置显微镜观察热疗后24 h的细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖水平,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏死率. 结果 46℃、48℃、50℃与43℃、37℃比较,细胞增殖明显受抑制,24、48、72、96 h分别为54.9%、78.0%、82.0%、65.2%、80.3%、87.7%、72.3%、87.5%、91.0%、82.7%、91.3%、92.8%(P<0.05).而43℃细胞增殖抑制不明显(P>0.05).46℃组的细胞凋亡率最高为34.17%±1.75%,与其它各组之间差异有统计学意义(P<0.01),50℃组的细胞坏死率最高为57.36%±4.07%,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 46℃及以上的热疗能够明显抑制HepG2细胞的增殖,引起明显的细胞凋亡与坏死.     

砷诱导Jurkat T淋巴细胞铁蛋白重链的表达

目的了解三氧化二砷诱导人Juikat T淋巴细胞的差异表达基因，探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法在体外用三氧化二砷(5μmol／L．24h)处理人Jurkat T淋巴细胞后．应用抑制性消减杂交技术(ssH)和基因克隆技术构建差异表达的cDNA文库，用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的人Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析结果显示，铁蛋白重链在正向消减cDNA文库中有2个阳性克隆。结论三氧化二砷可诱导铁蛋白重链的表达，铁蛋白重链在淋巴细胞抗砷损伤机制中可能起着一定的作用。     

极低频磁场对HepG2细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究极低频电磁场是否影响细胞内钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)。方法　Fura 2负载HepG2细胞分别在 1.5 5mT(均值 )、16Hz脉冲磁场处理 6 0min ,30 0mT、2Hz旋转磁场处理 5min后 ,用荧光光度计检测 [Ca2 +]i;实时检测 0 .9mT(有效值 )、16Hz正弦磁场对 [Ca2 +]i的影响。结果　在 1.5 5mT、16Hz脉冲磁场处理后 ,对照组和处理组R值 (F34 0nm　　 F380nm　　 )分别为 2 .4 5 19± 0 .2 378、2 .5 2 6 6± 0 .2 915 ,30 0mT、2Hz旋转磁场处理后R值分别为 1.36 5 0± 0 .0 6 2 6、1.36 0 2± 0 .0 771。 0 .9mT、16Hz正弦磁场处理下R值数据点拟合趋势线斜率比 [r(50 1～ 1 0 0 0 )　　　 r(0～ 50 0 )　　 ]分别为 1.12 13± 0 .4 5 5 9、1.0 72 7± 0 .1971,截距之比 [b(50 1～ 1 0 0 0 )　　　 b(0～ 50 0 )　　 ]分别为 0 .9912± 0 .0 0 98、0 .9979± 0 .0 0 6 0 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在本实验条件以及所采用的分析方法下未发现磁场对HepG2的 [Ca2 +]i产生影响     

三氧化二砷联合全反式维甲酸对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的:探讨三氧化二砷(AS2O3)联合全反式维甲酸(ATRA)对人浆液性卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用及其机制。方法;四甲基偶氮唑蓝光吸收法(MTT)、流式细胞术及免疫荧光法检测体外培养的SKOV3细胞在AS2O3单独作用及联合ATRA作用下对卵巢癌细胞生长的抑制及促凋亡作用。结果:单用ATRA对SKOV3细胞的生长无影响;单用AS2O3可以抑制SKOV3细胞的生长;联合使用AS2O3和ATRA较单用AS2O3对SKOV3细胞的抑制作用强(P<0.05);流式细胞术证实:5.0μmol/LAS2O3联合1.0μmol/LATRA作用48h时,SKOV3细胞出现G2/M期阻滞增强、S期减低(P<0.05);AnnffxinV染色检测到早期凋亡细胞增多,晚期凋亡及继发性坏死细胞减低(P<0.05)。结论:AS2O3能上调SKOV3细胞中细胞周期抑制蛋白P27的表达,ATRA联合AS2O3可以增强上述效应。故ATRA对诱导SKOV3细胞凋亡有增敏效应,该效应过程可能依赖于细胞周期负性调控因子P27蛋白的过度表达。