PEP-1-SOD1预处理对脑梗死后小鼠海马神经元的保护

目的 研究PEP-1-铜,锌超氧化物歧化酶(PEP-1-SOD1)预处理对脑梗死后小鼠海马神经元的保护作用.方法 健康雄性成年昆明小鼠随机分为假手术组、模型组以及PEP-1-SOD1预处理组.线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞(PMCAO)模型.假手术组以及模型组在手术前30 min腹腔注射生理盐水200 μL,PEP-1-SOD1预处理组手术前30 min注射PEP-1-SOD1 200 μg.手术后24 h分离梗死侧海马组织,TUNEL染色测定细胞凋亡,黄嘌呤氧化酶法测定SOD1活性,TBA法测定丙二醛(MDA)含量.结果 手术后24 h与模型组相比,PEP-1-SOD1预处理组凋亡细胞数量明显减少(P<0.01),SOD1活性升高,MDA含量下降(P<0.05).结论 PEP-1-SOD1预处理可以有效减轻小鼠脑梗死后海马神经元损伤.     

脂肪源性干细胞移植对颅脑损伤大鼠神经功能评分的影响

目的分析脂肪源性干细胞(ADSCs)移植对颅脑损伤大鼠神经功能评分的影响,探讨ADSCs对神经系统的保护作用。方法将20只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,各10只,均进行颅脑损伤模型制作,实验组移入ADSCs,对照组移入等量的培养基。比较两组大鼠神经功能改善情况。结果两组术后不同时间点大鼠神经功能评分都不断降低,差异有统计学意义(P<0.05);实验组术后不同时间点大鼠神经功能评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ADSCs对颅脑损伤后大鼠神经功能具有一定的改善作用。     

神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失的研究进展

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是指一类能够进行自我复制、自我更新,并能够通过对称或者不对称的分裂方式向神经元、星形胶质细胞以及少突胶质细胞等分化的具有多向分化潜能的母细胞。已有不少实验研究表明,神经干细胞移植可能作为颅脑损伤后遗症的治疗方法之一,移植入的神经干细胞不仅可以在脑内存活,而且能够促进神经功能恢复。作者对神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失方面的研究作一综述。     

人脐血干细胞移植促进大鼠脊髓损伤神经恢复

目的观察移植人脐血CD34 干细胞是否可以存活、分化、促进脊髓损伤的行为和功能恢复.方法26只Wister大鼠随机分成移植组和对照组.移植组行脊髓半切术并移植5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记的脐血CD34 细胞,对照组行脊髓半切术后注射PBS液.采用改良Tarlov评分标准对移植组和对照组所有大鼠在术前和术后24 h、1、2、3、4周进行运动功能评价.组织学和免疫组化分析移植细胞的定位和分化情况.结果移植后在脊髓病理切片中出现Brdu标记人脐血细胞,激光扫描共聚焦显微镜通过免疫荧光双标检测到7%Brdu阳性细胞表达神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP),2%Brdu阳性细胞表达神经元核抗原(NeuN).神经功能检测发现1周后移植组功能恢复较对照组具有显著性差异(P＜0.05).结论移植人脐血干细胞可以促进脊髓损伤的行为和功能恢复,为神经损伤治疗提供了有用的细胞源.     

NOV基因修饰神经干细胞移植对损伤大鼠脊髓功能恢复的影响

目的：观察NOV基因修饰神经干细胞（NSCs）移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。方法：40只Wistar大鼠随机分为对照组（A组）、损伤组（B组）、NSCs组（C组）和NOV／NSCs组（D组），每组10只；将NSCs悬液注入C组切断脊髓处，D组注入等量的NOV基因修饰NSCs悬液，B组注射等量的生理盐水。术后2个月，采用BBB评分和皮层体感诱发电位（CSEP）观察大鼠脊髓功能的恢复程度。结果：①术后2月BBB评分B、C、D组大鼠有所恢复，但都未达到正常水平；C组和D组的大鼠恢复较好，评分较高，与B组有显著性差异；其中D组比C组恢复要好。②脊髓损伤后，各组的CSEP波均消失，术后2月除B组外C组和D组的波形均有不同程度的恢复，但潜伏期延长，其中C组比D组更长，两者之间有显著性差异。结论：NOV基因修饰NSCs脊髓内移植比单纯NSCs移植能较好地促进损伤脊髓运动和传导功能的恢复。     

脑源性神经营养因子和神经干细胞联合移植治疗大鼠重度颅脑损伤的研究

目的研究重度颅脑损伤大鼠采用脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞联合移植与神经干细胞单独移植治疗后神经功能的恢复及神经干细胞分化为神经元的比例,并探讨其可能的机制.方法将实验大鼠随机分为4组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为BDNF和神经干细胞联合移植组(实验组),Ⅳ组为单独神经干细胞移植组(对照组),均制成大鼠重度颅脑损伤模型,分别行BDNF和神经干细胞联合移植或单独神经干细胞移植,对实验大鼠进行行为学观察,于伤后第2、5、8、11、14天抽取大鼠股静脉血测定一氧化氮(NO)含量,伤后2周处死大鼠后取脑组织行免疫组化染色观察.结果各实验组大鼠均较对照组神经功能恢复好(P<0.05或0.01),分化为神经元的比例较对照组高(P<0.05),NO的含量比对照组明显降低(P<0.01).结论BDNF可能是通过降低损伤后NO的形成从而有利于移植的神经干细胞向神经元分化,BDNF和神经干细胞联合移植较单独神经干细胞移植对神经系统损伤有更好的治疗效果.     

丙戊酸对颅脑损伤大鼠海马成体神经干细胞原位激活的作用

目的观察丙戊酸(VPA)对颅脑损伤后大鼠海马成体神经干细胞(NSC)原位激活的作用。方法将成年健康Sprague-Dawley雄性大鼠66只随机分为正常对照组(n=6)、单纯损伤组(n=30)和VPA治疗组(n=30),正常对照组大鼠不做任何处理,单纯损伤组及VPA治疗组大鼠建立闭合性颅脑损伤模型;VPA治疗组大鼠按每天300 mg·kg-1的剂量经腹腔注射给药进行干预,单纯损伤组大鼠给予腹腔注射等量的生理盐水进行干预,分别于颅脑损伤后3、7、14、21、28 d断头取脑标本,采用免疫荧光技术检测各组大鼠不同时间点海马齿状回内5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)阳性细胞数及大鼠海马齿状回内巢蛋白(Nestin)阳性细胞数的变化。结果单纯损伤组和VPA治疗组大鼠海马齿状回内Edu阳性细胞数及Nestin阳性细胞数于造模后第3天开始增高,于造模后第21天达高峰,在同一时间点单纯损伤组和VPA治疗组大鼠Edu阳性细胞数及Nestin阳性细胞数均高于正常对照组(P<0.01),而VPA治疗组各时间点Edu阳性细胞数及Nestin阳性细胞数较单纯损伤组明显增加(P<0.01)。结论丙戊酸对颅脑损伤大鼠海马成体NSC有原位激活作用。     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的：探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的新方法，为治疗脊髓功能障碍性疾病打下基础，方法：制作脊髓横断大鼠模型，造成大鼠下肢瘫痪，分别在损伤急性期和损伤3周后移植胎鼠组织神经干细胞，观察移植后的动物行为变化，脊髓神经电生理变化和脊髓组织形态学变化，结果：细胞移植后第8d即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复，2－3周后可出现爬行，4周后后肢活动沃跃；对照组瘫痪的肢体无任何恢复。脊髓诱发电位部分出现，动作电位波幅较高，对照组未出现诱发电位，且动作电位波幅明显减低，脊髓移植肉眼可见有增生的组织充填，镜下有大量新生的细胞，表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色，结论：神经干细胞移植可使脊髓横断大鼠运动功能恢复，有望成为治疗脊髓损的有效手段。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后腓肠肌的影响

目的：探讨神经干细胞（NSCs）移植对脊髓损伤后腓肠肌的影响。方法：30只Wistar大鼠随机分为正常组（A组）、损伤组（B组）和NSCs移植组（C组），每组10只；将培养的大鼠神经干细胞悬液注入C组切断脊髓处，B组注射等量的生理盐水。术后2个月，进行腓肠肌肌电位、肌湿重测定，观察腓肠肌运动终板的变化。结果：①与A组比较，B组和C组腓肠肌肌电位的峰值下降，时限延长（P＜0．01），C组电位有所恢复。②与A组比较，B组的腓肠肌肉湿重下降近70％，C组肌肉湿重有所恢复，但仍未达到正常水平（P＜0．01）。③B组和C组的运动终板形状变得单一，运动终板的总数量减少，其中C组比B组减少数目为主。结论：神经干细胞移植入脊髓损伤的横断处，能延缓肌肉的萎缩，有助于其功能的恢复。     

神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响

目的探讨神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响。方法分离培养新生大鼠海马神经干细胞,BrdU进行标记。采用大脑中动脉阻塞法复制脑缺血模型,动物于造模3d后侧脑室注射标记细胞,分别于1、7、14和28d处死动物,观察动物神经功能和移植细胞存活情况。结果神经干细胞能移行至缺血部位并存活,移植后缺血大鼠神经功能明显得到恢复,在14、28d与模型组差异有显著性。结论神经干细胞移植能促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复,是中风治疗的有效方法。     

神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠脑组织中连接蛋白43表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法将6～7周龄雄性SD大鼠36只随机分为对照组和NSCs移植组,每组18只。从15只E14大鼠胚胎分离NSCs,进行原代培养及传代培养;用含体积分数10%胎牛血清的培养基对NSCs进行诱导分化;采用免疫细胞化学技术对培养的NSCs及其分化为神经元的表型进行鉴定;采用改良的Feeney法制备TBI模型;利用脑立体定位仪和微量注射泵进行NSCs脑内移植;采用免疫组织化学技术、免疫印迹技术和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测在移植后不同时间脑组织损伤区Cx43的表达。结果在培养基中,NSCs呈球团状悬浮生长,神经上皮干细胞巢蛋白表达阳性。NSCs体外诱导分化第2天,多数细胞伸出突起,以后突起逐渐延长,分支增加;分化后第5天,部分细胞βⅢ-微管蛋白阳性。免疫组织化学结果显示,无论有无NSCs移植,在移植后第1、2和4周受损脑组织中,均可见Cx43在细胞膜上、膜旁的细胞质及突起中呈棕黄色表达。NSCs移植大鼠的Cx43染色在各个时间点均显著强于对照组(P<0.05)。在移植后的4周内,NSCs移植组移植点及其周围脑组织中Cx43 mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P<0.01)。结论移植NSCs至TBI大鼠损伤脑组织,在移植点周围脑组织中Cx43的表达显著增加。     

锰增强磁共振示踪移植神经干细胞在大脑内的功能

背景：在前期研究中,我们已成功用SPIO标记成人神经干细胞（NSCs）,移植到开放性脑外伤患者脑内,并用MRI观察到其在脑内的迁徙和分布,实现了无创性观察移植NSCs在体内的分布。但是这一方法无法评估移植NSCs是否参与大脑功能活动。在本实验中,我们利用锰增强磁共振（ME-MRI）技术在体观察移植NSCs在动物脑损伤区的功能活动。 方法：40只脑损伤SD大鼠随机分为四组,每组10只大鼠。第1组大鼠脑损伤后不行NSCs移植,然后行ME-MRI扫描。静脉输注MnCl2.4H2O,甘露醇开放一侧血脑屏障,电刺激其对侧前肢,采用3D-SPGR序列ME-MRI扫描。第2组大鼠脑损伤一周后行SPIO标记NSCs立体定向移植,两周后行ME-MRI扫描,方法同前。第3组大鼠脑损伤一周后行SPIO标记NSCs立体定向移植,两周后行ME-MRI扫描,方法同前,但在电刺激阶段静脉注射钙通道阻滞剂地尔硫卓。第4组脑损伤大鼠局部注射PBS,然后行ME-MRI扫描,方法同前。 结果：第2组脑损伤大鼠ME-MRI扫描后发现相应的皮层有高信号,表明局部存在神经细胞电活动,并为ME-MRI所反映。第3组脑损伤大鼠加入地尔硫卓后其相应位置的高信号消失,表明这一电活动是钙通道依赖性的。而第1组和第4组脑损伤大鼠脑损伤区无高信号出现。 结论：我们利用ME-MRI可初步检测到移植NSCs在大脑局部的电活动,为今后进一步研究NSCs在宿主脑内的功能奠定了基础。     

Detection of neural stem cells function in rats with traumatic brain injury by manganese-enhanced magnetic resonance imaging

Background  Previously we had successfully tracked adult human neural stem cells (NSCs) labeled with superparamagnetic iron oxide particles (SPIOs) in host human brain after transplantation in vivo non-invasively by magnetic resonance imaging (MRI). However, the function of the transplanted NSCs could not be evaluated by the method. In the study, we applied manganese-enhanced MRI (ME-MRI) to detect NSCs function after implantation in brain of rats with traumatic brain injury (TBI) in vivo.

Methods  Totally 40 TBI rats were randomly divided into 4 groups with 10 rats in each group. In group 1, the TBI rats did not receive NSCs transplantation. MnCl₂∙4H₂O was intravenously injected, hyperosmolar mannitol was delivered to disrupt rightside blood brain barrier, and its contralateral forepaw was electrically stimulated. In group 2, the TBI rats received NSCs (labeled with SPIO) transplantation, and the ME-MRI procedure was same to group 1. In group 3, the TBI rats received NSCs (labeled with SPIO) transplantation, and the ME-MRI procedure was same to group 1, but diltiazem was introduced during the electrical stimulation period. In group 4, the TBI rats received phosphate buffered saline (PBS) injection, and the ME-MRI procedure was same to group 1.

Results  Hyperintense signals were detected by ME-MRI in the cortex areas associated with somatosensory in TBI rats of group 2. These signals, which could not be induced in TBI rats of groups 1 and 4, disappeared when diltiazem was introduced in TBI rats of group 3.

Conclusion  In this initial study, we mapped implanted NSCs activity and its functional participation within local brain area in TBI rats by ME-MRI technique, paving the way for further pre-clinical research.

     

人神经干细胞移植治疗大鼠脑创伤观察

目的:探讨人神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑创伤的可行性.方法:取孕14周流产胎儿脑组织,进行NSCs培养及鉴定,并应用Hoechest33258标记细胞.54只大鼠随机等分为假损伤组(A组)、治疗对照组(B组)及NSCs移植组(C组).采用自由落体撞击法制作大鼠脑创伤模型后,C组给予NSCs移植,B组给予生理盐水,A组不打击脑组织.3组分别于移植术后2 d及7 d进行大鼠行为学评分,分别于植术后2周和4周行Y迷宫试验测学习和记忆评分.移植后3 d、7 d脑组织切片荧光显微镜下观察移植细胞存活情况,移植后2周、4周行GFAP、NSE免疫组织化学染色.结果:NSCs移植后2 d行为学评分3组之间差异有统计学意义(P=0.00),B、C组间差异无统计学意义(P=0.09);移植后7 d行为学评分3组间差异有统计学意义(P=0.00),A、C组间差异无统计学意义(P=0.10);移植后2周学习评分和4周记忆评分3组间差异均有统计学意义(P=0.00),B、C组间差异均有统计学意义(P=0.00);C组脑组织GFAP、NSE染色阳性,可见标记的NSCs.结论:人NSCs植入大鼠创伤脑内后,可存活并和宿主组织融合在一起,促进大鼠行为学恢复,提高学习和记忆能力,并分化为神经元和神经胶质细胞.NSCs移植为治疗脑创伤提供了新的方法.     

胚胎神经干细胞移植对大鼠脑创伤后认知功能障碍的影响

目的 探讨脑创伤后胚胎神经干细胞移植对大鼠认知功能障碍的影响。 方法 成年雄性SD大鼠80只,随机平均分成4组:对照组、脑创伤组、脑创伤神经干细胞移植组和脑创伤PBS移植组。应用免疫组织化学方法 观察伤后移植细胞在体内的分布和迁移,同时检测海马局部脑组织中神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)的表达;采用Morris水迷宫实验评价大鼠伤后的空间学习记忆能力。结果 神经干细胞移植后7、14、21和28 d,移植区可检测到BrdU标记的阳性细胞。移植后7、14 d时神经干细胞移植组伤后海马及周边局部脑组织中NGF的光密度(IOD)值分别为0.495 4±0.013 4、0.576 7±0.021 1,BDNF的IOD值分别为0.474 5±0.042 5、0.556 3±0.032 1,较其他组增高(P<0.05);神经干细胞移植组各时间点搜索安全岛逃避潜伏期较脑创伤组和PBS移植组有改善 (P<0.05)。 结论 胚胎神经干细胞移植后海马局部脑组织中神经营养因子表达发生改变,对伤后认知功能障碍的恢复有着重要作用。     

骨髓间质干细胞对大鼠脑损伤后血管再生的影响

目的：探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对大鼠颅脑损伤后血管再生的影响。方法：自由落体法建立大鼠脑撞击伤模型,50只Sprague-Dawley大鼠随机分为移植组和对照组,每组25只。移植组大鼠手术后12 h侧脑室注射法移植BM-MSCs,对照组仅注射生理盐水。术后第 1,3,7,14和21天行改良大鼠神经功能缺损评分(modified neurological deficit scores of rats,mNSS)。于术前,术后3,6,12,24 h和3,7 d采用流式细胞仪检测大鼠外周血CD34和CD133抗体双标记细胞。免疫组织化学SP法检测损伤周围脑组织CD31和神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)的表达。结果：两组间mNSS分值差异有统计学意义(F=5.997,P<0.05),组内不同时间点间差异也有统计学意义(F=37.106,P<0.01)。术后第7,14,21天对照组较移植组 mNSS评分高,差异有统计学意义(均P<0.05)。大鼠外周血中存在CD34和CDl33双阳性细胞表达。对照组大鼠外周血中CD34和CDl33双阳性细胞数伤后3 h为下降状态,后升高,伤后6 h达最高点,此后逐渐下降,伤后24 h降至正常水平。移植组有同样的趋势,CD34和CDl33双阳性细胞升高持续到伤后24 h,其数量明显高于对照组(P<0.05)。术前两组NSE均有阳性表达,术后7,14 d时移植组的NSE表达显著高于对照组(P<0.05)。术前两组CD31的阳性表达很少,术后3,7 d时移植组的CD31表达显著高于对照组(均P<0.05)。结论：BM-MSCs移植可以增加脑创伤后大鼠外周血中内皮祖细胞数量并持续约24 h,可以调高大鼠脑创伤后损伤周围区的血管生成标志物的表达和神经元标志物的表达。BM-MSCs移植组大鼠脑损伤后神经功能较对照组改善明显。     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

脑外伤后不同时间移植神经干细胞的疗效对比研究

目的通过观察脑外伤后不同时间移植神经干细胞的疗效，探讨脑外伤后进行神经干细胞移植的最佳时机。方法将成年大鼠制成脑外伤模型，分别在伤后即时、24h、48h三个时点进行神经干细胞移植，治疗后比较其行为学、流式细胞仪计数、免疫组化染色、电镜观察等指标。结果移植组较对照组各项指标均有改善，24h移植组在流式细胞仪计数、免疫组化染色、电镜观察等指标上较其他各组改善更加明显（P〈0．05），而行为学改善与其他实验组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论脑外伤后24h是进行神经干细胞移植的适宜时间。