瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞功能和氧化产物的影响

【目的】 观察瘦素对缺氧复氧人肝脏细胞(L02)的肝功能保护和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。【方法】 将L02细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素(分别为100、200、400、800和1 600 μg/L)干预组,取细胞上清液检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、MDA的浓度和SOD活性;电镜检测细胞凋亡的形态学改变。 【结果】 ①与正常对照组相比,L02细胞经缺氧12 h复氧培养后,ALT和AST浓度明显升高(P < 0.01),加用不同浓度瘦素干预组ALT和AST浓度较单纯缺氧12 h复氧组下降(P < 0.01);②与正常对照组相比,L02细胞经缺氧12 h复氧培养后,MDA浓度明显升高(P < 0.05),SOD活性下降(P < 0.05),加用不同浓度瘦素干预组MDA浓度较单纯缺氧12 h复氧组下降(P < 0.05);SOD活性上升(P < 0.05);③电镜检测单纯缺氧复氧后细胞呈现明显凋亡形态学改变,加用瘦素100 μg/L处理细胞组细胞仅轻度改变。【结论】 瘦素对缺氧复氧培养导致L02肝细胞的细胞损伤有一定的保护作用;可能与瘦素抑制氧自由基生成,减少脂质过氧化有关。     

2％氧浓度下H9C2细胞缺氧/复氧模型的优化

目的 优化2％氧浓度下的H9C2细胞缺氧/复氧模型.方法 基于以往方法,将处于对数生长期的H9C2心肌细胞置于2％氧浓度的移动式三气培养箱中4、6、8、10、12 h,再分别复氧4h.用CCK-8法测定心肌细胞存活率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性.采用正交试验法优化细胞培养液条件(空白血清比例,含糖量),确定模...     

姜黄素对缺氧复氧损伤PC12细胞的影响

目的:观察姜黄素对缺氧复氧致PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的机制.方法:实验分为对照组、缺氧复氧组(IR组)和低、中、高剂量姜黄素组(C1、C2和C3组).C1、C2和C3组分别应用20、40、100μmol/L的姜黄素预处理.IR组、C1、C2和C3组均给予缺氧复氧损伤处理.通过MTT比色法检测细胞存活率,并应用Western blotting方法检测细胞内Bc1-2、Bax、Caspase-3蛋白含量的变化.结果:与对照组相比,IR组细胞存活率降低(P<0.05);与IR组比较,C2、C3组细胞存活率升高(P<0.05).姜黄素可促进缺氧复氧诱导的PC12细胞Bcl-2表达增加,抑制Bax和Caspasc-3蛋白的表达,其作用呈剂量依赖性.结论:姜黄素对缺氧复氧导致的PC12细胞损伤有保护作用,这一作用与其抗凋亡特性有关.     

TTC36蛋白在缺氧复氧诱导的肝脏缺血再灌注损伤中的表达

目的:通过缺氧复氧(H/R)致肝细胞损伤的细胞模型模拟肝缺血再灌注损伤,探索TTC36蛋白对缺氧复氧诱导的肝细胞损伤的动态表达,为临床上的肝脏缺血再灌注损伤提供新的监测指标.方法:选取人正常肝细胞LO2经过厌氧袋和无糖无血清培养基处理建立肝缺血再灌注损伤的细胞模型,检测LO2细胞在缺氧复氧过程中的细胞活力、肝损伤标志物谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)表达水平的差异,验证模型的可行性,同时利用蛋白印迹的方法检测TTC36蛋白在缺氧复氧诱导的肝细胞损伤中的差异表达.结果:LO2细胞构建的缺氧复氧模型中细胞活性降低,细胞外液中的ALT、AST活性增加,细胞中SOD、MDA、GSH活性降低,TTC36蛋白表达下调;且随着复氧时间延长,细胞活性、ALT、AST、SOD、MDA、GSH活性和TTC36蛋白的表达均恢复正常.结论:TTC36蛋白在缺氧复氧诱导的肝缺血再灌注损伤过程中表达明显差异,可能是监测缺血再灌注过程中肝功能损伤和修复的重要靶分子之一.     

缺氧复氧对家兔不同部位血管反应性的影响

目的：观察缺氧复氧时家兔主、肺和肾的动脉血管反应性的变化。方法：用生物测定法观察缺氧复氧时家兔主、肺和肾动脉的舒缩反应,用张力传感器记录血管环张力变化。结果：缺氧后,有内皮的各动脉环均产生短暂的缺氧性收缩,以肾动脉单位重量的收缩力最大;具有一定张力的各动脉环复氧后立即舒张,随着明显收缩。有内皮的各动脉环复氧后的舒张反应无明显差异。而收缩反应仍以肾动脉最明显,肺动脉其次。去除内皮后,各动脉环缺氧性收     

缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧—复氧损伤的保护

观察缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧－复氧损伤的影响。     

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

摘要：目的探讨白藜芦醇苷（polydatin，PD）对缺氧复氧（hypoxia／re—oxygenation，H／R）肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法在缺氧仓中充人95％N2、5％CO2混合气体模拟缺氧环境，将人近曲肾小管上皮细胞（humankidneyproxi—realtubularepithelialcell，HK2）根据不同处理分为4组：正常对照组、H／R组、PDTC组和PD处理组，除对照组外每组均予以先缺氧24h后复氧6h处理；MTT法检测细胞成活数，免疫组化法检测NF—κBp65蛋白表达情况，RT—PCR检测ICAM—1mRNA转录，ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H／R组，统计学差异显著（P〈0．05）。PD处理组NF—KBp65蛋向阳性表达，ICAM-1mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组，有统计学差异（P〈0．05）。PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异（P〉0．05）。结论PD对H／R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用。     

缺氧-复氧诱导人肥大心肌细胞凋亡信号的变化

目的:研究缺氧-复氧诱导人肥大心肌细胞凋亡信号的变化. 方法:通过胶原酶/胰酶联合消化法获取成人肥大心肌细胞,采用缺氧-复氧诱导细胞凋亡,改良TUNEL法检测细胞凋亡率,并用免疫细胞化学法检测bcl-2、bax、caspase3、细胞色素C和磷酸酪氨酸蛋白的变化,用原位杂交法检测bcl-2 mRNA、caspase3 mRNA和Akt1 mRNA表达的变化. 结果:缺氧24 h-复氧4 h后细胞凋亡率为(17.50±0.67)%,对照组为(2.88±0.27)%;凋亡信号的平均吸光度(A)值:bcl-2为0.189±0.006,对照组为0.238±0.004;bax为0.240±0.002,对照组为0.218±0.004;caspase-3为0.230±0.002,对照组为0.202±0.004;细胞色素C为0.225±0.003,对照组为0.191±0.009;磷酸酪氨酸蛋白为0.186±0.005,对照组为0.154±0.003;bcl-2 mRNA为0.300±0.003,对照组为0.360±0.001;caspase 3 mRNA为0.307±0.004,对照组为0.271±0.002;Akt1 mRNA为0.274±0.007,对照组为0.301±0.008,差异均有统计学意义(P<0.01). 结论:缺氧-复氧可造成人肥大心肌细胞凋亡,bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA和Akt1 mRNA表达降低,bax、caspase3、细胞色素C和磷酸酪氨酸蛋白及caspase3 mRNA表达增加.     

缺氧后不同复氧时间对心肌细胞自噬的影响

［摘要］目的　探讨大鼠心肌细胞（H9C2）不同缺氧复氧（hypoxia reoxygenation,HR）时间对自噬（Autophagy）及细胞活力的影响．方法　体外培养的H9C2细胞按照不同复氧时间随机分为5组,正常对照组（A 组）、缺氧组（B 组）、复氧2 h组（C组）、复氧12 h组（D组）、复氧24 h组（E组）．Western Blot检测各组细胞中LC3 II/LC3 I的表达量,MTT法检测各组心肌细胞的活力．结果　HR模型组心肌细胞活力明显低于正常对照组（P＜0.05）;缺氧组及各复氧组细胞的LC3 II/LC3 I的比值明显高于对照组（P＜0.05）,其中以12 h组比值最高（P＜0.05）;缺氧组及各复氧组的细胞活力明显低于对照组（P＜0.05）,其中以12 h组细胞活力最低（P＜0.05）．结论　利用三气培养箱可以造成H9C2细胞HR损伤;细胞缺氧可以激活细胞自噬,复氧后自噬进一步激活,以12 h自噬激活最明显,24 h下降至缺氧组水平,同时细胞缺氧造成细胞损伤,复氧后细胞损伤进一步加重,在复氧12 h时细胞活力最低,复氧24 h细胞活力得到改善．     

缺氧-复氧对培养的大鼠心肌细胞损伤与细胞凋亡的影响

目的:探讨体外培养的大鼠心肌细胞在缺氧(缺血)和缺氧-复氧(再灌注)状态下心肌细胞损伤和细胞凋亡情况。方法:常规方式培养SD大鼠心肌细胞。给予模拟缺血(缺氧)溶液、模拟复氧(再灌注)液以及终浓度为200U/mL的超氧化无歧化酶(SOD)干预处理,制备缺氧-复氧损伤组(H/R组)、SOD+缺氧-复氧损伤组(SOD+H/R组)和缺氧预处理组(HP组)模型,未经处理的为正常对照组(control组)。结果:屹H/R组的细胞存活率较对照组明显降低(P<0.01);H/R+SOD组和HP组的细胞存活率虽然较正常对照组明显降低(P<0.05),但比H/R组为高(P<0.05);亿H/R组培养液中培养液中心肌酶活性显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。役H/R组心肌细胞内的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量也明显增高,与HP组和H/R+SOD组的心肌细胞内MDA含量比较有显著性差异(P<0.05);而HP组、H/R组与对照组间比较,无明显差异(P>0.05);均提示了缺氧-复氧过程中心肌细胞损伤严重,也说明了缺氧(血)预处理或SOD均有细胞保护作用。臆H/R组心肌细胞内游离钙含量增加,显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01);逸流式细胞仪测定出H/R组心肌细胞凋亡率也明显高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。心肌细胞凋亡的数量与细胞内钙的增加呈正相关(P<0.01)。肄电镜下所见H/R组的许多细胞表现为胞浆减少,核深染、固缩状态,异染色质不均匀,部分线粒体呈空泡变性,或是肌浆网囊泡变等凋亡期或凋亡前期样改变,少数呈凋亡向坏死方面改变;而其他组则少见此些变化。结论:体外培养的心肌细胞在缺氧-复氧情况下同样可加重心肌细胞损伤,可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的。     

心肌细胞缺氧/复氧模型的构建及研究进展

心肌细胞缺氧/复氧模型是模拟心肌缺血再灌注损伤及相关疾病的经典细胞模型,具有操作便捷、直观形象、稳定性好等优势,可准确反映疾病细胞水平的病理改变,广泛应用于药物与疾病的分子机制研究。缺氧/复氧是导致多种心血管疾病的主要机制之一,构建理想的心肌细胞缺氧/复氧模型是深入研究心血管疾病机制的基础,目前该模型的构建方法较多,主要包括物理法(混合气体培养法、厌氧袋/罐法、液体石蜡封闭法)、化学法(氧耗法、超氧法、酶抑法和缺氧液法)和联合法等,其中混合气体培养法和氧耗法最常用。     

Cu/Zn-SOD对肾小管上皮HK-2细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:观察脂质体包裹Cu/Zn-SOD蛋白对肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧损伤的影响。方法:制备脂质体包裹Cu/Zn-SOD,采用液体石蜡覆盖法构建HK-2细胞缺氧复氧模型,细胞随机分为5组(n=8):对照组、模型组、Cu/Zn-SOD组、脂质体组、SOD+脂质体组。用荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡,化学发光法检测线粒体膜电位。结果:SOD+脂质体组细胞增殖率和凋亡率均明显低于缺氧复氧模型组(P<0.05);Cu/Zn-SOD组和脂质体组线粒体膜电位高于其它3组(P<0.05)。结论:脂质体包裹Cu/Zn-SOD蛋白对HK-2细胞的抗凋亡作用可能与膜电位调控有关。     

Caco-2细胞缺氧复氧损伤后二肽载体表达及生物学功能的改变

目的：探讨Caco-2细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation,A/R)损伤后二肽载体表达及生物学功能的变化。方法：采用Caco-2细胞A／R方法,模拟临床缺血再灌注（ischemia/reperfusion injury,I/R)。Caco-2细胞正常培养和A／R后（缺氧90min,复氧30min)后,测定二肽载体对头孢氨苄的摄取功能;采用流式细胞术观察损伤后Caco-2细胞的凋亡情况;员时比较两种培养情况下二肽载体的mRNA水平。结果：A／R后二肽载体对头孢氨苄的摄取能力下降;损伤后Caco-2细胞凋亡水平较正常细胞明显提高;Northern blotting显示损伤后二肽载体mRNA水平下调。结论：A／R后Caco-2细胞二肽载体mRNA下降从基因水平下调了二肽载体对头孢氨苄的摄取功能。提示Caco-2细胞A／R或临床I／R后肠上皮细胞刷状缘二肽载体对二肽的摄取功能下降。     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达的影响。方法:取新生2~3 dW istar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组。分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达变化。结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bc l-2蛋白24 h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点最高,Bc l-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6。与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bc l-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bc l-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bc l-2/Bax蛋白比值保持在1.6~1.8之间。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bc l-2和Bax蛋白的动态变化,使Bc l-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用。     

缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡

目的探讨缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡效应。方法应用血管紧张素Ⅱ诱导培养的新生小鼠心肌细胞肥大,并给予缺氧、缺氧/复氧刺激,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果肥大心肌细胞在缺氧8h时即出现显著的细胞凋亡。缺氧时间延长至12h时其凋亡率较8h时显著增加(P<0.05)。肥大心肌细胞在缺氧后/复氧4h,细胞凋亡率比单纯缺氧时进一步增加(P<0.05)。缺氧或缺氧/复氧时,肥大的心肌细胞组的凋亡率均较正常心肌细胞组显著增高(P<0.05)。结论缺氧可诱导肥大的心肌细胞凋亡,且在缺氧后复氧可加重肥大心肌细胞凋亡的程度;与正常心肌细胞相比,缺氧及缺氧/复氧刺激更易引起肥大的心肌细胞凋亡。     

缺氧再复氧对大鼠离体胰腺细胞损伤的机制

目的：对缺氧再复氧引起胰腺腺泡细胞损伤的机制进行研究。方法：通过对离体胰腺腺泡细胞给予缺氧再复氧处理,观察不同阶段胰腺腺泡细胞的存活率,脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）的变化。同时应用显微荧光分光光度计和图象分析系统检测被荧光标记物标记的细胞内游离钙离子（（Ｃａ＾２＋）ｉ）浓度的变化。结果：对照组４ｈ细胞存活率为７８．０９％,缺氧组４ｈ细胞存活率５４．５０％（Ｐ＜０．０５）,缺氧３ｈ再复氧１ｈ细胞存     

缺氧预处理对人心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及其机制

目的：探讨缺氧预处理（ＰＣ）对于人类心肌细胞缺氧复氧（Ｈ／Ｒ）损伤的影响及其机制。方法：在体外分离的人心房和心室肌细胞的Ｈ／Ｒ模型上观察缺氧ＰＣ的作用，及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与蛋白磷酸酶激动剂和抑制剂对ＰＣ现象的影响。结果：缺氧ＰＣ明显减轻Ｈ／Ｒ造成的心肌细胞损伤，ＰＫＣ抑制剂Ｈ７和蛋白磷酸酶激动剂ＢＤＭ分别完全消除ＰＣ的细胞保护，而蛋白磷酸酶抑制剂ＯＡ则能模拟ＰＣ的上述保护效应。结论：人类     

Src 激酶抑制剂PP2对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨Src激酶抑制剂PP2对大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组,缺氧/复氧组
（H/R;缺氧8 h/复氧24 h）,PP2 +缺氧/复氧组（PP2+H/R;缺氧前给予10 μmol/L PP2作用24 h）。MTT法检测各组星形胶质细胞
存活率,流式细胞术测定各组星形胶质细胞凋亡率,Western blotting法检测各组星形胶质细胞中Src激酶、Bax及Bcl-2的蛋白
表达。结果MTT检测结果显示H/R 损伤后细胞存活率降低,而在使用PP2预处理后细胞存活率增加（P<0.01）;流式细胞术实
验结果显示H/R 损伤后细胞凋亡增加,而在使用PP2预处理后细胞凋亡显著减少（P<0.01）;Western blotting法检测结果显示H/
R 损伤后Src激酶表达增加,用PP2预处理后Src激酶表达降低。H/R 损伤后凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值增加,在用PP2预
处理后Bax/Bcl-2的比值显著降低（P<0.01）。结论PP2可对星形胶质细胞H/R损伤起保护作用,其机制可能与抑制Src激酶的
蛋白表达和激活抗凋亡机制有关。