嵌合抗体技术研究进展

综述基因工程抗体中的重要组成部分———嵌合抗体的研究进展。基因工程抗体是第三代抗体,其应用日益受到重视,但是在临床治疗中人抗鼠抗体(HAMA)反应导致鼠源性抗体的应用受到了极大的限制。利用基因工程技术对鼠源性抗体进行改造,保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性、减少鼠源成分,从而克服鼠源性单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。     

输血前检测不规则抗体的临床意义

目的输血前检测不规则抗体的临床意义。方法66例协助配血患者,抗体由筛选细胞采用凝聚胺技术检测,抗体类型由谱细胞鉴定,交叉配血采用coombs实验。结果①抗体筛选结果阳性结果59例,其中男13例,女46例。女性30例有妊娠史,66例患者均有输血史。阴性7例。②抗体类型鉴定发现冷抗体18例,抗-D抗体29例,抗-c抗体5例,抗-E抗体4例,抗-c、抗-e抗体3例。⑤输血效果coombs实验选择相合血液,输注后效果良好。结论输血前做抗体筛查试验,检测有临床意义的不规则抗体,选择相合血液输注,避免迟发性输血相关性溶血反应发生,提高输血安全性和有效性。     

食管癌人源噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选

目的构建全人源化食管癌噬菌体单链抗体库,从中筛选Eca-109细胞特异性单链抗体。方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将后者组装成scFv,再引入酶切位点SfiI和NotI。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E后电转入EcoliTG1,经抗体表达的辅助噬菌体M13KO7超感染,构建单链抗体库。PCR鉴定阳性重组菌EcoliTG1中scFv的插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果。从该抗体库中筛选特异性识别Eca109细胞的单链抗体,将阳性克隆菌转化EcoliHB2151进行可溶性表达。抗体亲和层析纯化后经SDS-PAGE、West-ern blot鉴定,通过ELISA法、免疫组化法、免疫细胞化学鉴定其与人食管癌细胞的结合的特异性。结果食管癌周围淋巴结总RNA的提取琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp。用pUC18标准质粒测定转化效率达到108cfu.μg-1。scFv的阳性插入率为91.7%(22/24)。在筛选过程中,食管癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第4轮为第1轮的141倍;SDS-PAGE与Western blot结果显示抗体分子量为30ku左右,在Ecoli HB2151中实现了单链抗体的可溶性表达。免疫组织化学结果提示可溶性抗体仅食管癌组织着色,而肝癌、胃癌组织不染色。免疫细胞化学结果表明此可溶性抗体可使食管癌细胞Eca109染色。细胞ELISA测定结果显示可溶性抗体具有较高的特异性,能与Eca109细胞结合,而不与胃癌BGC-823和NHEEC结合。结论从食管癌病人癌肿周围淋巴结成功地构建人源食管癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选到食管癌特异性抗体。     

纳米抗体偶联药物的研究进展

抗体偶联药物(antibody-drug conjugate, ADC)因其具有靶点清晰、特异性强等优点已成为临床上治疗多种疾病尤其是癌症的有效手段。但传统ADC中的单克隆抗体组织渗透能力差,存在免疫原性和免疫毒性等风险,且改造成本高。由驼科动物血液中提取的纳米抗体(nanobody, Nb)是目前已知具有完整抗原结合能力的最小抗体片段,具有组织渗透能力强、免疫原性低、特异性强、稳定性高等优势,可以代替传统单克隆抗体参与构建纳米抗体偶联药物(nanobody-drug conjugate, NDC)。本文从纳米抗体结构优势、NDC的构建、纳米抗体偶联物的应用三个方面进行综述与讨论,以期为NDC的研究与发展提供思路。     

甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体及过氧化物酶抗体检测在诊断甲状腺疾病中的价值浅析

目的浅析甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体及过氧化物酶抗体检测在诊断甲状腺疾病中的作用,探求其临床价值。方法建立甲状腺疾病组和非甲状腺疾病组,运用电化学发光法和间接免疫荧光法分别对两组患者血清中TPO-Ab浓度、以及TG-Ab、TM-Ab阳性率进行检测。结果 TPO-Ab浓度、TG-Ab及TM-Ab阳性率在甲状腺疾病组和对照组之间差异具有统计学意义,P<0.01。结论三者在甲状腺疾病的诊断中具有一定的临床意义,其中后二者联合检测在由自身免疫系统引起的甲状腺疾病中更为有效。     

单克隆抗体研究进展

随着人们对抗体结构与功能的认识不断深入,抗体不仅在抵抗外来生物物质方面有着重要作用,而且利用它本身来防治疾病更是研究热点。单克隆抗体技术的问世,使得研究和生产单抗药物成为现实。本文就单抗药物的历史、现状、存在的问题及展望做一简要综述。     

RIA测定TMAb和TGAb830例分析

本文分析了正常人和甲状腺疾病患者血清甲状腺微粒体抗体(TMAb)和甲状腺球蛋白抗体(TGAb) 830例测定数据。结果表明,血清TMAb和TGAb含量近似对数正态分布,正常值范围上限分别为29.59和31.39。桥本氏甲状腺炎(桥本甲炎)、原发性甲状腺机能减退(原发甲减)、原发性甲状腺机能亢进(甲亢)等自身免疫性患者中二种抗体显著升高,尤以桥本甲炎为最。亚急性甲状腺炎(亚甲炎)二种抗体亦显著增高,提示自身免疫在本病发病机理中的重要意义。     

催化抗体的研究进展

催化抗体的研究进展杨日芳，恽榴红，丁振闿（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）免疫化学历来是集中于抗原性和抗体。抗原之间相互作用的研究。但近年来，借助于机理化学与合成化学的工作，免疫体系细胞能够产生具有新功能的抗体──催化抗体或称抗体酶（...     

以乙肝病毒核心抗原HBcAg为载体的utrophin抗体的制备

目的构建以乙肝病毒HBc为载体的带有utrophin的两个B细胞表位多肽的融合表达质粒pHBc-2UB,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫新西兰大白兔获得抗utrophin的抗体。方法通过DNAstarⅡ模拟出utrophin的两个显著优势的B表位。用PCR法合成片段插入HBcAg序列的78位,将该合成片段克隆至pET28a载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白HBc-2UB,纯化后免疫新西兰白兔。再将该合成片段克隆至pGEX4T-2载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白GST-2UB,用于检测两个表位的抗体。结果测序结果表明重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体。结论以HBc呈现utrophin的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与两个B表位结合的抗体,为utrophin检测和DMD治疗药物研究打下了基础。     

自身抗体检测体会

自身免疫性疾病,对人体的危害很大,有时可累及人体多个系统。目前开展检测此病的方法较多,其中用间接荧光方法较为方便。一、抗核抗体(ANA),是自身免疫性疾病中常出现的一种抗体,它能与所有的有核细胞起抗原抗体反应。用大白鼠的肝冰冻切片4～6μm效果最佳。肝印片也可,但荧光强度高于冰冻切片一个血清稀释倍数。因为肝印片细胞分布不均匀,看到细胞数量少,细胞染色膜型不如冰冻切片清楚。ANA     

泉州地区部分人群EB病毒感染状况调查分析

目的调查泉州地区部分人群EB病毒的感染情况。方法对本院体检组2 187例、鼻咽癌组18例和健康对照组20例采用酶联免疫吸附法(ELISA)对EBV-EA-IgA与EBV-VCA-IgA抗体水平进行检测,分析鼻咽癌高危人群中EB病毒感染情况。结果健康体检组中EA-IgA阳性60例,占2.74%(60/2 187);VCA-IgA阳性255例,占11.66%(255/2 187);两种抗体同时阳性为51例,占2.33%(51/2 187)。鼻咽癌患组EA-IgA阳性14例,占77.7%(14/18);VCA-IgA阳性17例,占94.4%(17/18)。健康对照组EA-IgA与VCA-IgA抗体皆阴性。VCA-IgA阳性率随年龄增长而增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论泉州地区鼻咽癌高危人群的EA-IgA抗体与VCA-IgA抗体水平在鼻咽癌患者中高于健康体检者,早期筛查EB病毒EA-IgA与VCA-IgA抗体水平对进行早期诊断鼻咽癌具有重要价值。     

基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示的β-HCG 抗体制备及鉴定

摘要：目的 通过纳米抗体CDR3区展示β-HCG C端表位的方式,验证纳米抗体在抗原表位展示中的作用。方法 采用基因合成的方法,将β-HCG C端表位（氨基序列151~165）插入到纳米抗体CDR3区,酶切、连接原核表达载体pET24a,IPTG诱导表达。将His标签填料纯化得到的高纯度目的蛋白免疫新西兰大耳白兔,经5次免疫后,间接ELISA检测效价,抗原偶联纯化介质进行免疫多抗纯化,Western blot进行多抗特异性检测。结果 成功构建原核表达重组载体,并获得高表达菌株,IPTG诱导后,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,亲和层析获得纯度大于98%的目的蛋白,包涵体经复性后免疫,效价可达1∶512 000,Western blot特异性检测显示免疫多抗能够特异性结合β-HCG。结论 纳米抗体CDR3区β-HCG抗原C端表位展示的方法,可用于抗β-HCG抗体的制备,并为今后纳米抗体表位展示相关研究奠定基础。     

高通量DNA测序技术在抗体新药研发中的应用

自2005年首次报道了一种基于微乳液PCR技术的高通量DNA测序技术 (high-throughput DNA sequencing technology) 以来, 高通量DNA测序平台已经发展为基因组和各种基因文库序列检测的强大工具。大容量的抗体基因库是目前获得抗体新药的基础, 高通量DNA测序技术为从海量的抗体基因库中快速发现功能抗体分子提供了可能。本文就近几年高通量DNA测序技术在抗体基因库的多样性分析, 抗体CDR3区的高通量测序、频率分析、功能基因发现及各种展示技术与高通量DNA测序技术的对接应用等方面进行了综述, 以期为抗体新药的研发提供一条新的技术路线。     

人血丙种球蛋白中三种抗体的考察

用RIA法,PHA法和HI法分别测定人血丙种球蛋白中的抗-HBs、白喉抗体和麻疹抗体。结果显示抗-HBs含量均值为2.36IU/ml或25.17 IU/g蛋白质,白喉抗体和麻疹抗体几何均值分别为2.26 HAU/ml、9.19 IU/ml,如按蛋白质浓度16％计算,则分别为3.88 HAU/ml、19.40 IU/ml。所有结果均达到《中国生物制品规程》要求。     

抗鸡法氏囊病和新城疫高免蛋黄液的研制与应用

本文报道了用鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和新城疫病毒(NDV)经多次、高度免疫的健康蛋鸡,从其所生产的蛋中,提取蛋黄,制成抗IBDV和NDV二联高免蛋黄液。其抗NDV的HI抗体和抗IBDV的中和抗体、沉淀抗体均达到较高的水平。经室内人工发病治疗试验及大田生产应用证明:鸡只注射二联高免蛋黄液之后,在短时间内对IBD及ND有预防作用;对刚发病的鸡群,及时用其注射治疗,效果显著。     

乳胶试验检测Sm抗体

1966年Tan等首先报告了Sim抗体,见于75％的活动性SLE患者。被认为是SLE的标记抗体,对SLE的诊断有重要参考价值。兹将我们建立的用乳胶试验检测Sm抗体的方法,介绍如下。材料和方法 1.血清:70份疑为炎症性风湿病患者的血清,获自联邦德国奥格斯堡中心医院实验医学研究所,为送检Sm,,RNP,SS·A,SS·B抗体的标本。通过免疫扩散确定其中4份标本RNP抗体阳性;1份SS·A和RNP抗体阳性;     

不孕不育患者血清中相关抗体检测临床研究

目的探讨自身免疫抗体血清学检测的意义及与不孕不育的相关性。方法将70例不孕不育患者作为观察组,另选健康体检者50例作为对照组。使用胶体金法检测2组患者血清中的抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(EmAb)、抗心磷脂抗体(ACAb)、抗卵巢抗体(AoAb)。结果观察组AsAb、EmAb、ACAb、AoAb阳性率高于对照组;观察组男性AsAb阳性率为16.7%,低于女性的22.4%,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论自身免疫抗体在不孕不育人群中有较高的阳性率。     

血清GAD-Ab、ICA、IAA联合检测对糖尿病诊断及分型中的运用研究

目的探讨糖尿病自身抗体在糖尿病诊断及分型中的价值。方法分别设定3组。1型糖尿病(T1DM)组,2型糖尿病(T2DM)组,正常对照组。采用免疫印迹试剂检测糖尿病GADA、ICA、IAA、IA-2A自身抗体后进行分析。结果 T1DM和T2DM自身抗体的阳性率高于正常对照组,与正常对照组相比较均有显著性差异P<0.05;T1DM与T2DM比较,T1DM其阳性率明显高于T2DM,比较有显著性差异P<0.05,GADA检出率最高。结论 GADA、ICA、IAA、IA-2A的测定对糖尿病的诊断和分型有重要的指导作用,联合检测能提高准确性。     

糖尿病自身抗体的检测及临床意义

目的探讨糖尿病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)的变化及联合检测的临床意义。方法用免疫印迹技术检测67例1型糖尿病(T1DM)患者、133例2型糖尿病(T2DM)患者血清中的GADA、ICA、IAA阳性率,并进行对比分析。结果 T1DM组中GADA、ICA、IAA的阳性率分别为66%、40%、24%,至少一种抗体呈现阳性的比例为92%,T2DM组中3种抗体的阳性率分别为9%、16%、11%,至少一种抗体呈现阳性的比例为30%。T1DM患者的GADA、ICA、IAA阳性率明显高于T2DM患者(P<0.05),三种抗体联合检测优于单一抗体。结论血清GADA、ICA和IAA的联合检测对早期、准确诊断1型糖尿病,及时规范治疗、预测B细胞功能衰竭、预测疗效及在高危人群中筛查1型糖尿病有重要临床意义。     

生殖免疫检测在不孕不育中的临床应用分析

目的探讨生殖免疫自身抗体检测在妇科不孕不育诊断中的临床价值。方法选取2014年2月~2015年7月期间我院不孕不育门诊接诊的520例不孕不育患者作为研究对象,检测其抗精子抗体(As Ab)、抗子宫内膜抗体(Em Ab)、抗心磷脂抗体(ACAb)、抗卵巢抗体(AOAb)四项生殖免疫抗体。比较分析三组患者免疫抗体阳性检出率。结果原发性不孕组As Ab、Em Ab、Ac Ab的阳性率均明显低于继发不孕和习惯性流产组,差异有统计学意义(P0.05),而继发性不孕和习惯性流产组之间差异无统计学意义(P0.05)。对比三组患者AOAb患者阳性,差异有统计学意义(x2=8.09,P0.05)。原发性不孕组免疫抗体阳性率明显低于继发性不孕组和习惯性流产组,差异有统计学意义(P0.05);继发性不孕和习惯性流产组免疫抗体率差异无统计学意义(P0.05)。结论 As Ab、Em Ab、Ac Ab、AOAb是引起不孕不育的重要因素,临床检测As Ab、Em Ab、Ac Ab、AOAb对不同类型的不孕不育的诊断具有重要的意义。