结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析

目的 阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法 对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区（RRDR）81个碱基在内的286bp片段进行聚合酶链反应．单链构象多态性（PCR．SSCP）分析，并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定。其中利福平耐药株73株，非利福平耐药株11株，敏感株26株。结果 PCR—SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在，经直接测序分析其中76．6％的菌株存在rpoB基因的单位点突变，主要集中在531位（61．1％）和526位（25．0％）；联合突变发生率为23．4％。此外，经PCR—SSCP检测，11株非利福平耐药株中2株有突变存在，26株敏感株中1株有突变存在。经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位。结论 rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因，其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

双向培养基快速分离培养结核分支杆菌

目的建立一种快速、经济、准确培养分离结核分支杆菌的方法。方法用双向培养基培养不同稀释度标准结核分支杆菌H37Rv,记录出现阳性结果的时间,并与改良罗氏培养基配对比较;将200份肺结核患者痰液标本直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种于双向培养基和改良罗氏培养基上,比较其阳性率。结果标准结核分支杆菌H37Rv在双向培养基上（10．3±5．2）d出现阳性,而改良罗氏培养基（26．0±11．5）d出现阳性,两者差异有显著性（P〈0．01）;在双向培养基、改良罗氏培养基上结核分支杆菌总阳性率分别为37．5％和36．0％,涂阳标本在双向培养基、改良罗氏培养基上阳性率分别为97．14％和95．71％,涂阴标本在2种培养基上阳性率分别为5．38％和3．84％,组组各自比较差异均无显著性（P〉0．05）。结论双向培养基能快速分离培养出结核分支杆菌,结果可靠,操作简单,价格低廉,适合广大基层医疗单位推广应用。     

双向培养基快速分离培养结核分支杆菌研究

[目的]建立一种快速、经济、准确培养分离结核分支杆菌的方法. [方法]用双向培养基培养不同稀释度标准结核分支杆菌H37Rv,记录出现阳性结果的时间,并与改良罗氏培养基配对比较;将200份肺结核患者痰液标本直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种在双向培养基和改良罗氏培养基,比较两种培养基的阳性率. [结果]标准结核分支杆菌H37Rv在双向培养基上平均(10.3±5.2)d出现阳性结果,而改良罗氏培养基平均(26.0±11.5)d出现阳性结果,两者差异有统计学意义(P<0.01);在双向培养基和改良罗氏培养基上结核分支杆菌总阳性率分别为37.5%、36.0%.涂阳标本在双向培养基和改良罗氏培养基上阳性率分别为97.14%、95.71%,涂阴标本在两种培养基上阳性率分别为5.38%、3.84%,组组各自比较差异均无统计学意义(P>0.05). [结论]双向培养基能快速分离培养出结核分支杆菌,结果可靠,操作简单,价格低廉,适合广大基层医疗单位推广应用.     

矽肺结核聚合酶链反应-单链构象多态性分析菌种鉴定的研究

矽肺结核诊断困难 ,治疗也较棘手 ,甚至可能合并非结核分支杆菌感染 ,使诊断和治疗更加复杂化。为了进一步了解矽肺结核的病原学情况 ,我们采用Ｂａｃｔｅｃ- 96 0快速培养结合聚合酶链反应—单链构象多态性分析 (ＰＣＲ -ＳＳＣＰ)对 98例痰抗酸染色阳性矽肺结核患者的痰标本进行菌种鉴定。现将结果报告如下。1　材料和方法1·1　标本来源　 98例临床痰标本来自于北京市矿务局医院的住院矽肺结核病患者 ,全部病人痰涂片抗酸染色阳性。1·2　试剂　⑴ 16ＳｒＤＮＡＰＣＲ诊断试剂盒由解放军第30 9医院结核病研究室提供。⑵ 7Ｈ9培养基由美国…     

结核分支杆菌耐药性检测方法研究进展

结核病至今仍是世界上一个严重的公共卫生问题,结核分支杆菌(MTB)的高耐药问题是结核病疫情恶化的重要原因。结核分支杆菌耐药性的快速检测,对于其防治具有重要意义,目前临床正在使用和研究的耐药性检测方法归纳起来,有表型检测和基因检测两大类。1表型检测1·1常规药敏试验方法用L-J或Middlebrook7H10培养基做直接或间接药敏试验。此方法由于受结核菌缓慢的生长速度的影响而费力费时(需6~8周甚至更长时间),不能满足临床之急需。1·2BACTECTB-460放射性液体培养基法是目前最常用的结核菌快速药敏试验方法。其原理为利用细菌生长需要代…     

建立5种结核分枝杆菌耐药基因的检测方法

本文通过PCR -SSCP技术 ,以期建立敏感、快速、特异的M .T菌 5种耐药基因的检测方法 ,分析 134例临床耐药株的基因突变情况 ,探讨M .T菌耐药基因突变是否有内在的变化规律。1　材料与方法1·1　标本来源　本研究中所用的M .T标准株由卫生部生物制品鉴定所提供 ,134例临床耐多药株源于我院住院患者痰标本。1·2　试剂　M .T耐药基因检测试剂由本院结核病分子生物学实验室提供。 7H9培养基由美国BD公司提供。1·3　方法　我院住院患者痰标本经Bacter - 96 0培养、药敏后 ,提取DNA ,至 - 2 0℃保存备用。聚合酶链(PCR)扩增 :利用我院…     

结核分枝杆菌耐RFP快速检测的方法研究

目的应用PCR—SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变，评价此方法用于结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药性的意义。方法采用PCR—SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果50例耐RFP菌株中有45例PCR—SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别，与药敏试验结果做对比，PCR—SSCP检测敏感性为90％，特异性为100％；12例敏感菌株与H37Rv条带一致，35份肺结核病人痰标本，21份痰PCR扩增阳性，15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别，而且PCR—SSCP28份图谱与H37Rv有差别，阳性率为80％。结论PCR—SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行，有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定，并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。     

比例法和绝对浓度法对结核分支杆菌药物敏感性测定的对比研究

目的　对比研究比例法和绝对浓度法测定结核分支杆菌的药物敏感性。方法　按照中国防痨协会《结核病诊断细菌学检验规程》 ,对 10 4株结核分支杆菌分别采用比例法和绝对浓度法检测药物敏感性。结果　比例法及绝对浓度法对耐药病例检出率及耐多药结核 (MDR -TB)检出率分别为 84.6 %、5 0 .0 %及 5 3.8%、40 .4% ,(P <0 .0 1)。比例法对链霉素 (SM)、异菸肼(INH)、利福平 (RFP)、乙胺丁醇 (EMB)、对氨基水杨酸钠 (PAS)等敏感与绝对浓度法符合率分别为 88.2 %、10 0 .0 %、10 0 .0 %、95 .0 %、96 .8%。两种检测方法对SM、INH、RFP、EMB、PAS各药的符合率分别为 88.5 %、84.6 %、80 .8%、6 3.5 %、73.1%。结论比例法结果精确 ,具有可比性。     

应用聚合酶反应-反向斑点杂交法检测利福平结核分支杆菌rpoB基因突变

本研究应用聚合酶链反应一反向斑点杂交法采集广西龙谭医院28株结核分支杆菌进行药敏测定,结果对利福平耐药的标准浓度为大于50μg／ml。结核菌传统药敏试验：28株分离株中,6株为敏感株,22株对RFP抗结核药物耐药。     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测

目的 评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平（RFP）耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR0－SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株）和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR－SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89．7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,1株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰酝标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H37RV株有差异,rPOB突变率为76．7％。结论 PCR－SSCP 以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

结核分支杆菌耐药性快速检测的研究进展

近年来,全球结核病的发病率呈上升趋势。迄今为止,有5000万人感染的是耐药的结核分支杆菌,而在过去30年中未开发出有效的新型抗结核药。出现这种情况的根本原因在于结核分支杆菌产生了耐药性。在结核控制中,建立快速、敏感和特异的检测耐药性结核分支杆菌的方法,可以指导制定合理的治疗方案,判断治疗是否失败并产生耐药性,也便于进行较大规模的结核分支杆菌耐药性调查。     

1126株结核分支杆菌对10种抗结核药物耐药趋势研究

目的：了解住院结核病人常用10种抗结核药物的耐药趋势。方法：根据WHO耐药指南要求，使用WHO推荐的比例法进行药敏试验，我院1999年至2002年的涂阳病例为本次研究对象。并对全部培养阳性的菌株用比例法做INH、SM、RFP、EMB、TH1321、PAS、AMK、KM、OFLX、CPM10种药物的药敏试验。结果：共入选涂阳病人1250例，其中培养阳性1126例，培养阴性108例，污染6例，耐药菌株858例，总耐药率69．4％，初始耐药率为65．2%，获得性耐药率为82．8％，耐多药率为45．5％。结论：结核分支杆菌对多种药物的耐药性有差异。耐药性流行趋势为初复治耐药率呈逐年上升趋势。我院结核分支杆菌耐药性流行水平有上升趋势，建立WHO／IUATLD结核病耐药监测系统，获得了我院耐药性水平资料，对临床用药具有重要的必要性和指导性。     

PCR-SSCP技术在检测煤工尘肺并发肺结核患者感染的结核分枝杆菌耐药基因突变中的应用

目的探索尘肺结核患者感染的结核分枝杆菌(M.tuberculosis)耐药基因突变与耐药性的关系,及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)的临床应用价值。方法在102例淮南矿区煤工尘肺并发结核患者中分离出M.tuberculosis菌株32株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。结果采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为43.75%(14/32),53.13%(17/32)和31.25%(10/32);采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为53.13%(17/32),65.63%(21/32)和40.63%(13/32),其中多耐药株19例(59.38%),包括耐3种药物的11例(42.31%),耐2种药的8例(30.77%),单耐药株7例(26.92%),敏感株6例,耐药率81.25%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变的有7株(7/26,26.92%),与AST法的符合率为63.64%(7/11);2个基因突变的6株(6/26,23.08%),符合率为50.00%(4/8);单基因突变的8株(8/26,30.77%),符合率为57.14%(4/7)。结论PCR-SSCP技术适用于淮南矿区煤工尘肺并发结核患者感染的M.tuberculosis katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,将其与AST法联合应用,在指导临床用药方面具有着重要的意义。     

用聚合酶链反应单链构象多态性分析技术检测结核分枝杆菌L型的rpoB基因突变

目的：探索结核分枝杆菌L型的耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系，以及聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR-SSCP）技术的临床应用价值。方法：收集结核分枝杆菌L型菌株52株，采用PCR-SSCP方法检测rpoB基因，与采用常规药敏试验法检测利福平耐药的结果进行对比分析。结果：采用常规法检测，52株临床分离株中有38株利福平耐药，耐药率为73.08%（38/52）；PCR-SSCP方法对52株临床耐药株rpoB基因突变的检出率为65.38%（32/52），两种方法检测耐利福平的符合率为84.21%。结论：PCR-SSCP对利福平耐药的结核分枝杆菌L型菌株检出率较高，将其与常规药敏试验联合应用，是一种指导临床用药的好方法。