阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin和CD2AP的表达及意义

【目的】动态观察nephrin、CD2相关蛋白（CD2AP）在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一次性注射等容积生理盐水,分别于注射后3、5、7、14、28、42d各杀检6只大鼠。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin、CD2AP的表达和分布变化。【结果】①模型组大鼠7d时nephrinmRNA表达增加,14d时其蛋白表达（9.44±0.49）亦显著增加;CD2AP表达增加时间较晚,28d时其mRNA和蛋白表达（7.88±1.01）才显著增加。②与对照组相比,模型组nephrin、CD2AP出现分布异常,从沿着毛细血管袢线样分布逐渐转变为不连续性颗粒样或斑片状分布。③肾小球nephrinmRNA、CD2APmRNA表达量与24h尿蛋白量均呈正相关关系（r=0.878,P〈0.01;r=0.945,P〈0.01）。【结论】①nephrin早期出现表达增加及分布异常,可能是导致蛋白尿的原因及判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。②CD2AP在后期出现表达增加,可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。     

阿霉素肾病大鼠模型动态变化及其足细胞数量 和nephrin的表达变化

 【目的】 探讨足细胞数量及nephrin在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义。【方法】 SD大鼠64只分为两组,模型组40只和对照组24只?模型组大鼠间隔2周两次尾静脉注射盐酸阿霉素,对照组大鼠相同时间尾静脉注射等容积生理盐水,各组分别于注射后1周、4周、8周、12周检测血、尿的生化指标,光镜、电镜观察肾脏病理学改变,免疫组化技术观察足细胞数量及nephrin的表达变化。【结果】 ①根据肾脏病理变化模型可分为两期:急性期(1 ~ 4周)和慢性期(5 ~ 12周)。光镜检查4周末可见肾小球足细胞肿胀,8周末出现球囊粘连,12周末部分肾小球节段性轻、中度硬化。②1周末足细胞nephrin表达减弱(P < 0.05),8周末足细胞数量减少(约是对照组的84 %,P < 0.05)。③nephrin、足细胞数量与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关关系;足细胞数量与nephrin呈正相关关系。【结论】 ①经改良间隔2周两次尾静脉注射阿霉素0.004 mg/g,可成功建立急性和慢性阿霉素肾病模型,急性模型病理学改变类似人的微小病变性肾病,慢性模型病理学改变类似人的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。②足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素。③FSGS发生时足细胞数量减少了约16%。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞 nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风+激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrin mRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强(P＜0.01);祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调(P＜0.01)。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病（AN）大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风＋激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrinmRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强（P〈0.01）;祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调（P〈0.01）。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

鲤鱼赤小豆汤对阿霉素肾病大鼠CD2AP及Nephrin表达影响

目的观察阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和CD2相关蛋白(CD2AP)的表达及鲤鱼赤小豆汤对其表达的影响。方法 SPF级Wistar雄性大鼠50只,随机分为正常组(N组)10只及造模组40只。造模组一次性尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg以制备肾病模型,造模成功后随机分为模型组(M组)、福辛普利组、鲤鱼赤小豆汤低剂量组、鲤鱼赤小豆汤高剂量组。实验干预7周。检测各组大鼠12h尿蛋白、血清总蛋白、清蛋白,免疫组织化学方法检测各组大鼠肾小球内Nephrin及CD2AP的阳性表达水平。结果与N组相比,其他各组12h尿蛋白含量均升高(t=2.38～4.77,P<0.05),尤以M组升高显著。与N组比较,其他各组肾小球中Nephrin与CD2AP的表达减弱(t=3.78～11.06,P<0.05);与M组相比,各干预组肾小球中Nephrin与CD2AP的表达都有所增强(t=2.11～3.48,P<0.05)。结论鲤鱼赤小豆汤可通过上调其肾小球足细胞Nephrin和CD2AP的表达,起到保护肾小球滤过屏障的作用。     

地塞米松抑制肾小球上皮间质转化

目的观察地塞米松对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞标志蛋白nephrin、间质转化调节因子ILK、间质标志蛋白α-SMA表达的影响,探讨其减轻蛋白尿的机制。方法 SD大鼠尾静脉1次性注射阿霉素制作肾病模型,24只诱导成功的模型鼠随机分为两组:(1)肾病组(NE组,n=12);(2)肾病+地塞米松治疗组(DE组,n=12),腹腔注射地塞米松0.3mg/kg,每周2次。另以10只SD大鼠作为对照组(NC组,n=10)。第8周测定血清C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、肌酐(Cr)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、清蛋白(A);尿液中24h尿白蛋白(24h AU)及尿足细胞(UPC)排泄水平;RT-PCR和Western boltting检测肾小球nephrin、ILK、α-SMA mRNA和蛋白质的表达。结果 NE组CRP、PCT、Cr、Cys C、24h AU较NC组明显升高,A水平较NC组明显降低,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01),两组UPC的排泄无明显差异。NE组肾小球nephrin mRNA和蛋白质的表达较NC组明显降低,ILK、α-SMA mRNA和蛋白质的表达较NC组显著升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。地塞米松明显改善ADR肾病鼠CRP、PCT、Cr、Cys C的升高和A的降低;恢复肾小球nephrin mRNA和蛋白质的表达,并抑制ILK、α-SMA mRNA和蛋白质的表达。结论地塞米松可减轻炎症反应;维持nephrin的表达,减轻尿白蛋白的排泄;抑制细胞表型转化的标记因子ILK、α-SMA的表达,抑制EMT。     

小鼠肾脏足细胞GPSD核心蛋白在高糖环境下表达的变化

目的通过观察高糖环境培养的肾小球足细胞裂孔隔膜（GPSD）核心蛋白nephrin、podocin和CD2AP的表达,探讨糖尿病肾病蛋白尿的发生机制。方法以RT—PCR方法检测不同浓度（5、10、20和40mmol／L）葡萄糖培养液培养小鼠足细胞24h后nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达水平。结果足细胞nephrin mRNA的表达在5mmol／L葡萄糖培养液培养24h后即显著减弱（P〈0.05）,在其它浓度葡萄糖培养液培养24h后几乎无表达（均P〈0.01）;podocin和CD2AP mRNA的表达在10mmol／L葡萄糖培养液培养24h后显著下降（P〈0．01）。但随着培养液的葡萄糖浓度增加,podocin和CD2AP mRNA的表达却逐渐上调。结论口糖环境抑制足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,可能是糖尿病肾病蛋白尿发生、发展机制之一。     

肾复康Ⅵ号治疗肾病综合征大鼠模型疗效及分子通道选择性效应

目的:研究肾复康Ⅵ号对阿霉素大鼠模型的肾小球滤过膜中构成裂孔隔膜骨架的其中两种蛋白nephrin、podocin的变化,探讨肾复康Ⅵ号、激素泼尼松及其二者联合使用对阿霉素大鼠模型的疗效及影响。方法:大鼠60只分为5组:正常组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组,每组各12只。除正常组,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素,正常组大鼠尾静脉一次性注射等剂量生理盐水,在造模成功后给予中药组肾复康Ⅵ号、西药组泼尼松、中西医结合组泼尼松和肾复康Ⅵ号灌胃干预4周,各组大鼠每周检测24 h尿蛋白定量。于给药4周结束后检测大鼠血生化指标,采集肾脏标本,采取免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin、podocin的变化和分布改变,对大鼠肾脏标本于光镜下观察病理改变。结果:与正常组比较,其它各组尿蛋白升高明显(P0.05),血白蛋白含量降低明显(P0.05);与模型组比较,各治疗组尿蛋白下降明显(P0.05);血白蛋白含量部分用药组升高(P0.05);光镜下观察各组肾小球结构无明显差异。免疫组化结果:与正常组相比其他各组nephrin、podocin表达数量有所减少(P0.05),与模型组相比,各治疗组中nephrin表达除中药组外其它两组高于模型组(P0.05),各治疗组中podocin表达西药组高于模型组(P0.05),其他两组与模型组相比无统计学意义(P0.05);与正常组比较,nephrin、podocin沿肾小球毛细血管袢呈线性分布,其他各组中nephrin、podocin呈片状、不连续性颗粒样分布;与模型组比较,各治疗组nephrin、podocin蛋白分布情况无明显差别。结论:肾复康Ⅵ方能够减少阿霉素大鼠24 h尿蛋白定量;肾复康Ⅵ号使阿霉素大鼠减少的nephrin蛋白表达得以部分恢复,减少的podocin蛋白表达得以部分升高,其在肾小球滤过膜中的分布异常改善不明显。     

足细胞分子分布和表达与足突形态变化和蛋白尿发生的关系

目的:探讨裂孔隔膜分子nephrin、podocin和足细胞骨架蛋白α-actinin及足突形态变化与蛋白尿发生的关系.方法:建立嘌呤霉素(PAN)大鼠肾病模型,用体视学方法检测足突形态改变;用免疫荧光染色、图像分析和实时定量PCR方法动态观察PAN注射后不同时间点各分子蛋白及mRNA表达量及分布变化.结果:蛋白尿出现前,PAN注射2 d时,足突肿胀、nephrin和podocin分布改变、podocin蛋白减低;5 d时,上述改变进一步加重、nephnn 蛋白及mRNA表达量下降.第10天尿蛋白显著升高[(130.8±30.7)mg/d,P=0.02],足突弥漫融合、nephrin和podocin分布明显异常、蛋白表达量显著减低、mRNA表达量回复至对照组水平.蛋白尿恢复时,足突形态学指标明显恢复、podocin蛋白水平回复至对照组水平、nephrin蛋白水平仍低于对照组、α-actinin蛋白水平显著增加伴分布异常.nephrin和podocin蛋白表达量与足突体积密度呈负相关(rnephrin=-0.78,P=0.000 1;rpodocin=-0.76,P=0.000 1).结论:足突肿胀、足细胞分子nephrin、podocin分布异常及podocin蛋白表达量减低发生在蛋白尿发生前,提示nephrin和podocin的分布及表达量变化和足突形态变化与蛋白尿的发生密切相关.     

霉酚酸酯对微小病变肾病治疗作用研究

目的以阿霉素肾病大鼠建立微小病变肾病模型,以霉酚酸酯(MMF)进行干预,检测nephrin的表达,研究霉酚酸酯对微小病变肾病的治疗作用及其机制。方法SD大鼠18只,分为肾病模型组、MMF治疗组、对照组。模型组、治疗组大鼠尾静脉一次性注入阿霉素7.5mg/kg,治疗组大鼠于注药次日开始使用MMF20mg/(kg·d)灌胃。对照组大鼠尾静脉一次性注入等量生理盐水。每组于第28天各取大鼠6只,检测尿蛋白、血生化指标;并用免疫组化、Westernblot方法,检测肾组织内nephrin蛋白水平。结果肾病组尿蛋白第28天达高峰;血清清蛋白明显降低(P<0.01);治疗组第28天尿蛋白、血清甘油三酯、胆固醇较肾病组减少(P<0.01),血清清蛋白较肾病组增加(P<0.01)。免疫组化、Westernblot结果提示肾病组较对照组第28天nephrin蛋白表达升高(P<0.01);治疗组第28天nephrin蛋白表达较肾病组下调(P<0.01)。结论阿霉素诱发的微小病变肾病发生与nephrin表达异常有关,霉酚酸酯可以减少蛋白尿,延缓微小病变型大鼠肾损伤,其作用与影响nephrin的表达有关。     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。