基质金属蛋白酶活性测定的改良底物胶电泳法

基于ＳＤＳ－聚丙烯酸胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）的原理和技术方法，介绍一种改良的明胶－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法（Ｇｃｌａｔｉｎ－ＰＡＧＥ），简称底物胶电泳法，用于测定能够水解明胶的基质金属蛋白酶类（ＭＭＰｓ）的水解活性。该方法简便实用，将底物胶中明胶浓度从 １０ ｇ／Ｌ降至 ２ ｇ／Ｌ，并将分子质量标准浓度提高至≤４０μｇ／孔，较好地解决了实验过程中所遇到的有关分子质量鉴定的难题。     

绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６     

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究,根据聚丙烯酰胺胶电泳（ＰＡＧＥ）谱带的位置和数目进行品种鉴别;用改进的十二烷酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定其主要蛋白质成分分子量;用等电聚焦电泳（ＩＦＥ）测定其主要蛋白质成分的等电点（ＰＩ）。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。     

两步超速离心法快速分离大量血浆极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆只需超速离心５ｈ。所得极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）经琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳（ＰＡＧＥ）及载脂蛋白ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定纯度良好。本文为超速离心分离制备大量血浆ＶＬＤＬ、ＬＤＬ提供了一种快速、经济的新方法。     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯，可用于其结构与功能的研究     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＵＳ－ＰＡＧＥ）显示小分子多肽的方法。方法 观察不同方法处理的样品，上样量对电流晰影响及对分子量标准（Ｍ，２５１２＝１６９４９）进行直线回归分析，结果 样品和不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔５～１０μｇ较佳；分子量标准直线回归系数ｒ＝－０．９６２。结论 样品处理方便，上样量少，在１６０ｇ．Ｌ＾－１Ｔ，６０ｇ．ｋｇ＾－１Ｃ较低的丙烯酰胺     

针刺对小白鼠脑染色质非组蛋白质影响的实验研究

本研究以快速老化痴呆模型小白鼠（ＳＡＭ－Ｐ／１０）为材料,分离纯化了其脑染色质非组蛋白质（ＮＨＣＰ）,采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）,观察了釜刺地ＳＡＭ－Ｐ／１０脑染南非组蛋白质增龄性变化的影响,结果表明,针刺人中、内关穴可以拮抗ＳＡＭ－Ｐ／１０脑染色质非线蛋白中部分功能蛋白脑迁移率非组蛋白质随增龄再现的快速减少,而６月龄蛋白电泳谱带受调节能力,明显优于１２月龄。     

癌症患者血清蛋白SDS－PAGE的分离

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）的方法分离恶性肿瘤患者外周血清蛋白，分离胶为１０％，浓缩胶为４％，血清样品１∶６稀释，得到条带清晰、重复性好的电泳图谱。     

基因工程人生长激素的纯化及鉴定

将在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中基因克隆表达的人生长激素（ｈＧＨ）培养物经Ｏｃｔｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ５２离子交换层析，得到了较纯的ｈＧＨ。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），Ｎ－末端氨基酸分析及放免分析，证明基因工程ｈＧＨ与天然ｈＧＨ性质相符。     

重组人血管抑素的纯化和生物活性鉴定

目的：纯化大肠杆菌表达的重组人血管抑素（ｒｈＡＧＮ）并鉴定其抗血管生成生物活性。方法：通过超声破碎、包涵体洗涤、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶过滤层析等步骤初步纯化ｒｈＡＧＮ,Ｌｏｗｒｙ法测定蛋白浓度,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析观察其纯度;应用 ＭＴＴ法观察在终浓度为 ０．１～３．０ ｍｇ／Ｌ范围内 ｒｈＡＧＮ对 １０ μｇ／Ｌ ＥＧＦ刺激的人真皮微血管内皮细胞系ＨＤＭＥＣ的增殖抑制活性;以ＰＢＳ为对照（ｎ＝５）,应用原位鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）技术观察１００ μｇ／只（ｎ＝５）和２００ μｇ／只（ｎ＝５）ｒｈＡＧＮ作用７２ ｈ对３０ｎｇ ｂＦＧＦ 诱导的鸡胚ＣＡＭ毛细血管生成的抑制作用。结果：①ｒｈＡＧＮ电泳纯度达到 ９６％,总回收率为 ６１．７％;②ｒｈＡＧＮ对 ＨＤＭＥＣ细胞增殖的最大抑制剂量约为 ２．０ ｍｇ／Ｌ,抑制率约９２．３％．半数最大抑制剂量在１．０ ｍｇ／Ｌ附近;③１００ μｇ／只和２００ μｇ／只ｒｈＡＧＮ组鸡胚ＣＡＭ 载样滤纸片下毛细血管数目分别为７９±２３条和３７±１１条,两组间比较差异显著（Ｐ＜０．０５）;与对照组（１４５±３６条）相比,均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：ｒｈＡＧＮ达到了较高的电泳纯度,     

低分子肝素对肾病综合征患者血浆组织纤溶酶原激活剂与D—二聚 …

目的 探讨低分子肝素（ＬＭＷＨ）的溶栓作用。方法 用底物显色法和ＥＬＩＳＡ法测定肾病综合征（ＮＳ）患者应用ＬＭＷＨ前后血浆组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）与Ｄ－二聚体（Ｄ－Ｄ）的水平。结果 皮下注射ＬＭＷＨ组血浆ｔ－ＰＡ与Ｄ－Ｄ水平明显增高，而静脉滴注ＬＭＷＨ组血浆ｔ－ＰＡ与Ｄ－Ｄ水平无明显变化。结论 皮下注射ＬＭＷＨ有明显溶栓作用。     

纤维蛋白原、极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1mRNA含量的影响

目的　拟建立逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法,探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）、Ｉ型纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－ｌ）ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　（ｌ）用异硫氰酸胍一步法（ＴＲＩｚｏｌ试剂）提取细胞总ＲＮＡ,用单管ＲＴ－ＰＣＲ 法、三对引物分别逆转录、扩增ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１ 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的特异性片段,扩增产物经２．０％ 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖａｌｕｅ,ＩＤＶ）,ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ的ＩＤＶ 用ＧＡＰＤＨ ｍ ＲＮＡ 的ＩＤＶ 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。（２）以ＥＬＩＳＡ 法测定内皮细胞（ＥＣ）培养上清液（ＣＭ）中ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１总抗原的含量。（３）ＥＣ与不同浓度Ｆｇ（２,２０,２００,２０００ μｇ／ｍ ｌ）或ＶＬＤＬ（５,１０,２０,３０,４０ μｇ／ｍ ｌ）共同孵育１２ ｈ 或２４ ｈ 后,观察ＥＣｔ－ＰＡ 和ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ 水平及ＣＭ 中抗原含量的变化。（４     

乳酸脱氢酶同工酶C4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），以免疫荧光，ＢＡ－ＥＬＩＳＡ及聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）等方法，测定了１１０例正常及各种不育症患者精子及精浆中ＬＤＨ－Ｃ４的含量。结果表明：不明原因性不育症，少精症及无精症患者精液中ＬＤＨ－Ｃ４的含量明显低于正常对照组，与正常组比较Ｐ值均〈０．００１，有极显著性差异；免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。ＬＤＨ－Ｃ４含…     

大鼠睾丸乳酸脱氢酶同工酶－C_4的分离纯化研究

采用加热、硫酸铵分段盐析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从大鼠睾丸中分离纯化了ＬＤＨ－Ｃ４。比活性提高７８４倍，活性回收率为１２．３％，纯化的ＬＤＨ－Ｃ４经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）鉴定均为一条酶带，位于ＬＤＨ３和ＬＤＨ４之间。     

酶联免疫印迹法对弓形虫速殖子功能性抗原分析

研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫病诊断试剂及疫苗提供理论基础。方法：采用十二烷基硫 酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和 弓形虫抗体阳性人血清起特异性反应的抗原组分进行分析。结果：弓形虫速殖子抗原的蛋白组分在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中 用１２５ ｇ／Ｌ的分离胶可产生较好的分辨率,分离出 ３０多条区带。免疫印迹分析表明 ２种抗血清均能特异地识别弓 形虫速殖子抗原,共同识别的抗原组分相对分子质量为 ４３ ０００、３３ ０００、２７ ０００、１４ ０００。结论：这些抗原组分是诱导 宿主产生对弓形虫感染免疫应答的功能性抗原。     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱纯化，比活性达１０５ＩＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＩＵ／ｍｇ，活性回收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ的一条带。对－茴香酸－对－脒基ｒ－ＳＫ和ｐｌｇ的混合物经苯酯盐酸盐（ＡＰＡＮ）修饰后制备茴香酰纤溶酶原链激酶激活剂复合物（ＡＰＳＡＣ），产物经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ和１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ两条带，其拟一级水解速率常数为１．２６×１０－４ｓｅｃ－１。体外溶栓实验证明其有溶栓活性。     

双胸蚓纤溶酶Ⅲ的分离纯化及其性质研究

用硫酸铵分段盐析，ＤＥＡＥ－纤维素，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析的方法，从双胸蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示一条区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量为２２．１ＫＤ     

中国眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解血小板膜糖蛋白Ib和抑？…

目的：观察从中国眼镜蛇（Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）毒中纯化的蛋白酶ｎａｔｒａｈａｇｉｎ水解血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｂ，ＧＰＩｂ）和抑制血小板聚集的作用。方法：通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测以及凝胶图像光密度分析系统ｎａｔｒａｈａｇｉｎ对血小板膜糖蛋白的水解作用。比浊法测定血小板聚集率。结果：Ｎａｔｒａｈａｇｉｎ     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心，盐析及ＤＥＡＥ－纤维素，羟基磷灰石，葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻长有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索，结果；纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲ，Ｍｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛；ＤＬ－甘油醛，Ｄ     

CLONING AND EXPRESSION OF THE GENE CODING FOR IL－2（60）－PE40，A MOLECULAR TARGETED PROTEIN

ＣＬＯＮＩＮＧＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＨＥＧＥＮＥＣＯＤＩＮＧＦＯＲＩＬ－２（６０）－ＰＥ４０，ＡＭＯＬＥＣＵＬＡＲＴＡＲＧＥＴＥＤＰＲＯＴＥＩＮＺｈａｎｇＭｅｎｇ（张萌）ＺｈａｏＸｕｅ（赵雪）ＬｉＨｕａｎｌｏｕ（李焕娄）ａｎｄＬｕＳｈｅｎｇ...