环氧化酶-2在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的表达

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用.方法 新生7日龄大鼠制成HIBD模型,缺氧时间为2h,RT-PCR半定量分析COX-2mRNA,免疫组化方法测定COX-2蛋白表达,光镜下观察神经元坏死情况.结果 HIBD后6、24、48h,5d COX-2mRNA表达出现不同程度的表达增强,分别为(0.461±0.052),(0.887±0.0816),(0.660±0.119),(0.474±0.104),与对照组(0.321±0.175)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),其中HIBD 24 hCOX-2mRNA表达为最高峰,同其余各组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01),免疫组化结果与之一致.结论 COX-2在新生儿HIBD形成中发挥一定的作用.     

环氧化酶-2在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的表达

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用。方法新生7日龄大鼠制成HIBD模型,缺氧时间为2h,RT-PCR半定量分析COX-2mRNA,免疫组化方法测定COX-2蛋白表达,光镜下观察神经元坏死情况。结果HIBD后6、24、48h,5dCOX-2mRNA表达出现不同程度的表达增强,分别为(0·461±0·052),(0·887±0·0816),(0·660±0·119),(0·474±0·104),与对照组(0·321±0·175)比较,差异有统计学意义(P<0·01),其中HIBD24hCOX-2mRNA表达为最高峰,同其余各组相比,差异均有统计学意义(P<0·01),免疫组化结果与之一致。结论COX-2在新生儿HIBD形成中发挥一定的作用。     

缺氧缺血后新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达变化及其意义

目的　观察新生大鼠缺氧缺血后脑组织caspase 3mRNA表达动态变化 ,进一步探讨缺氧缺血诱导新生鼠神经元凋亡的机制及意义。方法　制备新生鼠HIBD模型 ,随机分为假手术对照组、HIBD 6h、2 4h、3d、5d组 ,每组 5只动物。应用RT PCR方法测定了大鼠脑组织caspase 3mRNA的表达。结果　 7日龄Wistar大鼠假手术对照组即有一定水平caspase 3mRNA表达 ,HIBD 6h组表达增加(与对照组比较有显著性差异 ,P <0 0 5 ) ,HIBD 2 4h其表达呈高峰 ,此后逐渐下降 ,HIBD 5d仍维持较高水平 (与HIBD 6h相比有显著性差异 ,P <0 0 1)。结论　缺氧缺血可诱导新生鼠脑组织caspase 3mRNA表达 ,其过度表达在HIBD后神经元凋亡的调控中起一定作用 ,针对caspase 3的治疗对策为围生期缺氧缺血脑损伤打开了新视窗     

脐血单个核细胞侧脑室移植对HIBD新生大鼠脑神经元凋亡及Bax、Bcl-2蛋白的影响

目的 探讨脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤 （HIBD）新生大鼠脑神经元凋亡及Bax、Bcl-2蛋白的影响。方法 7日龄Sprague-Dawley新生大鼠制备缺氧缺血性脑损伤 （HIBD）模型,随机分为正常对照 （N）+生理盐水 （NS）、HIBD+NS、N+脐血单个核细胞 （UCBMC）及HIBD+UCBMC组。N+UCBMC与HIBD+UCBMC组侧脑室注入3×106个UCBMC,N+NS与HIBD+NS组注入等体积NS。移植后7 d采用NeuN/活性Caspase-3免疫荧光双标染色法、TUNEL法观察大脑皮层神经元凋亡,Western blot观察脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 HIBD+NS组的NeuN+活性Caspase-3+DAPI+细胞及TUNEL+DAPI+细胞均多于N+NS和N+UCBMC组 （P < 0.01）;HIBD+UCBMC组的NeuN+活性Caspase-3+DAPI+细胞及TUNEL+DAPI+细胞均少于HIBD+NS组 （P < 0.01）。HIBD+NS组的Bax蛋白表达高于N+NS与N+UCBMC组,Bcl-2蛋白低于N+NS与N+UCBMC组 （P < 0.01）;而HIBD+UCBMC组的Bax蛋白较HIBD+NS组降低 （P < 0.01）,Bcl-2蛋白则高于HIBD+NS组、N+NS和N+UCBMC组 （P < 0.05）。结论 HIBD新生大鼠侧脑室移植UCBMC可以减轻神经元凋亡,其机制可能与Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调有关。     

新生大鼠缺氧缺血晚期Caspase-3表达及bFGF对其的影响

目的：观察凋亡相关基因Caspase-3在新生大鼠HIBD晚期的蛋 白表达情况以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其影响。方法：采用新 生大鼠HIBD模型,新生7 d龄Wistar大鼠,随机分成4组：HIBD组、假手术组、对照组(生理 盐水治疗)及bFGF治疗组。分别于缺氧缺血(HI)后2周、3周或4周处死大鼠,用免疫组织化学 染色方法观察脑组织Caspase-3的表达情况,用TUNEL法观察神经细胞DNA断裂情况。 结果：①HI后2周和3周时左脑凋亡细胞数高于假手术组(P<0.05);②HI后 2周和3周时脑组织Caspase-3平均光密度值(0.39±0.04, 0.38±0.04)明 显高于相应假手术组(0.36±0.01, 0.36±0.02),差异有显著性(P< 0.05);③bFGF组于治疗3周后Caspase-3平均光密度值(0.36±0.09)低于对照 组(0.37±0.04)和HIBD组(0.38±0.04),差异有显著性(P<0.05) ;④bFGF治疗3周后TUNEL阳性细胞数(4.20±1.30)亦明显少于对照组(9.80± 1.92)和HIBD组(8.00±1.00),差异有显著性(P<0.05)。结论：Caspase-3参与了新生大鼠HIBD过程,并持续活化;bFGF可能通过下调HIBD模型 鼠脑组织中Caspase-3的表达及阻止其随后的DNA断裂,从而发挥其神经保护作用。     

胱硫醚β合成酶/硫化氢体系在缺氧缺血性脑损伤中表达及锌原卟啉对其的影响

目的研究胱硫醚-β-合成酶(CBS)/硫化氢(H2S)体系与新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的关系,以及血红素氧合酶(HO-1)抑制剂锌原卟啉-Ⅸ(Znpp-Ⅸ)对H2S含量及CBS mRNA表达的影响及其机制;探索外源性Znpp-Ⅸ干预新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)的理论依据与临床前景。方法将7日龄的实验大鼠随机分为假手术对照组(35只)、HIBD组(38只)和HIBD+Znpp组(37只)。HIBD+Znpp组于缺氧缺血造模前30 min腹腔注射Znpp-Ⅸ45μmol/kg。各组动物于缺氧缺血造模后3、6、12、18、24 h处死,用分光光度计法测定大鼠血浆中H2S含量,用原位杂交和免疫组化方法分别观察脑组织CBS mRNA和bcl-2蛋白的表达。结果 HIBD组和HIBD+Znpp组大鼠缺氧缺血造模后3 h血浆H2S浓度及CBS mRNA表达增高,12 h达高峰之后下降,与假手术对照组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD+Znpp组大鼠各时间点的血浆H2S浓度及CBS mRNA表达均较HIBD组显著升高(P<0.01)。HIBD组大鼠造模后3 h,bcl-2蛋白表达增高,12 ...     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤COX-2 mRNA表达变化

研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达变化,应用、制备新生大鼠左脑HIBD的模型.用逆转录多聚酶链反应(RT-PRC)检测HIBD后6 h、24h、48 h、5 d不同时点脑皮层COX-2 mRNA的表达情况.经凝胶成像及分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量分析COX-2 mRNA的动态变化.结果显示七日龄Wistar大鼠对照组即有COX-2 mRNA的低表达,HIBD 6 h表达开始升高,HIBD 24～48 h为表达高峰(与对照组相比有显著性差异,P＜0.01),HIBD 5 d表达下降.结论新生大鼠HIBD可诱导COX-2基因表达,其可能参与HIBD后的神经毒性损伤.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤COX-2mRNA表达变化

研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达变化,应用、制备新生大鼠左脑HIBD的模型。用逆转录多聚酶链反应(RT-PRC)检测HIBD后6 h、24h、48h、5d不同时点脑皮层COX-2 mRNA的表达情况。经凝胶成像及分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量分析COX-2 mRNA的动态变化。结果显示:七日龄Wistar大鼠对照组即有COX-2 mRNA的低表达,HIBD 6h表达开始升高,HIBD 24～48h为表达高峰(与对照组相比有显著性差异,P<0.01),HIBD 5d表达下降。结论:新生大鼠HIBD可诱导COX-2基因表达,其可能参与HIBD后的神经毒性损伤。     

雄激素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织芳香化酶和神经生长因子表达的影响

目的：观察雄激素对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠皮质及海马区芳香化酶细胞色素P450（AROM）与神经生长因子（NGF）表达及脑组织超微结构的影响，探讨雄激素的神经保护作用机制。方法：96只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HIBD组和雄激素组，每组32只。雄激素组和HIBD组制作HIBD模型。缺氧缺血（HI）后两组动物分别给予腹腔注射丙酸睾丸酮(25 mg/kg)和等量的花生油。于HI后24 h、72 h、7 d、10 d观察各组海马和皮层神经元超微结构变化及AROM和NGF表达的变化。结果：电镜下可见HIBD组神经细胞水肿，细胞器减少，核肿胀，染色质凝集成块状，线粒体减少、肿胀，可见大量凋亡细胞。与HIBD组相比，雄激素干预组神经细胞排列较整齐，神经元核膜完整，染色质均匀, 细胞凋亡少见，神经元轴突再生明显。HIBD组HI后24 h NGF与AROM表达出现阳性反应，HI后72 h 明显增多，7 d达高峰，10 d后开始下降，但仍高于假手术组。雄激素组皮层和海马NGF与AROM的表达在HI后72 h、7 d 和10 d 明显高于HIBD组和假手术组，均有统计学意义（P<0.01）。结论：雄激素干预可增加脑组织NGF和AROM的表达，促进神经细胞形态的恢复及神经元轴突再生，减少细胞凋亡，具有明显的神经保护作用。     

雄激素对HIBD新生鼠phosphacan和NG2蛋白聚糖表达与轴突再生的影响研究

目的：了解雄激素对缺氧缺血脑损伤（HIBD）新生鼠脑组织磷酸蛋白聚糖（phosphacan,PC）及NG2蛋白聚糖（NG2）表达变化及其与缺血缺氧脑损伤后轴突再生的关系，探讨其神经保护作用机制。方法：制作新生鼠HIBD模型，随机分为假手术组、HIBD组、雄激素干预组（于模型制成后即刻注射丙酸睾丸酮25 mg/kg）。于缺氧缺血（HI）后24 h、72 h、7 d、10 d取脑组织制作石蜡切片和电镜切片，用免疫组化法观察PC和NG2蛋白聚糖在各组大鼠皮质和海马表达的动态变化，应用透射电镜对比观察各组海马和皮层神经元超微结构变化、细胞凋亡、神经元轴突再生及胶质细胞增生情况。结果：①HI后脑组织超微结构变化：假手术组于术后24 h细胞表面见较小的突起，72 h、7 d及10 d细胞表面可见大小不等的突起，未见凋亡细胞；HIBD组HI 24 h、72 h、7 d和10 d时细胞表面无突起或仅有较小突起；雄激素干预组的神经元轴突较HIBD组后增长明显，但较假手术组弱。②HI后脑组织PC和NG2的表达：假手术组海马和皮层均存在少量PC和NG2的表达，海马的表达高于皮层。HIBD组在HI后24 h 表达开始呈阳性反应，HI后72 h明显增多，7 d达高峰，10 d后开始下降，但仍高于正常对照组；雄激素干预组，PC和NG2的表达时程和分布与HIBD组相似，HI后24 h、72 h、7 d和10 d在皮层和海马的表达水平明显低于HIBD组，均有统计学意义（P<0.01）。结论：PC和NG2可能是HIBD后抑制神经元轴突再生的重要因子之一，雄激素可能通过调节胶质细胞形态结构和功能抑制PC和NG2表达促进神经元轴突再生，从而发挥神经保护作用。     

地塞米松对脑缺氧缺血大鼠bid基因表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后bid基因表达及细胞凋亡的变化，地塞米松（DEX）对其的调控作用，从而阐明DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。方法 7d龄SD大鼠24只。随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX和NS组在缺血缺氧前12h腹腔内分别注射DEX、等量NS。通过建立新生大鼠HIBD动物模型，取实验侧大脑半球，采用RT-PCR技术检测脑bid基因表达，采用Tunel法检测凋亡细胞。结果 正常组无bid基因表达，HIBD组bid基因表达明显上调，凋亡细胞数明显增加（P〈0．01）；与HIBD组比较，DEX组bid基因表达明显下调，而凋亡细胞数明显减少（P〈0．01）。结论 脑缺氧缺血引起神经细胞凋亡可能与bid基因表达明显上调有关。DEX能通过下调bid基因表达，从而抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡影响

目的研究参附注射液对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠海马神经元凋亡的影响。方法实验分成两部分：1.流式细胞术检测缺氧缺血（HI）前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元凋亡率;2.免疫组织化学测HI前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bcl-2、Bax蛋白表达。建立新生大鼠HIBD模型。每组实验随机分为4组：假手术组（S）,9 g/L盐水对照组（C）,参附预处理组（P）,参附治疗组（SF）。结果SF和P组海马神经元凋亡情况明显低于C组（P〈0.01,〈0.05）,且Bcl-2表达显著增多（P〈0.05,〈0.01）,而Bax表达明显下调（P〈0.05,〈0.01）。结论参附注射液可明显上调新生大鼠HIBD后海马神经元Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少HIBD新生大鼠海马神经元凋亡发生。     

地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后细胞凋亡抑制蛋白1（cIAP1）基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松（DEX）对其影响，阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制。方法：7日龄SD大鼠24只，随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型。DEX和NS组在缺氧缺血前12h腹腔内分别注射DEX、等量9g／L盐水。取HIBD动物模型实验侧大脑半球，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测cIAP1基因表达，比色法测定Caspase-3活性。结果：与健康对照组比较，HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降（P〈O．01），Caspase-3活性明显上升（P〈0．01）。与HIBD组比较，DEX组cIAP1基因表达明显上升，而Caspase-3活性明显下降。结论：脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调，Caspaes-3活性升高。DEX能通过上调cIAP基因表达，抑制Caspase-3活性，抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的 研究Rho GDP解离抑制因子(Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)mRNA 及Bcl-2 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制.方法 30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD 6 h和48 h组,每组10只.采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real-time RT-PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2) HIBD6 h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(1.40±0.12)％.HIBD 48 h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到( 15.86±0.98)％.缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平较高(4.12±0.74、2.55±0.65),在HIBD 6 h后二者表达开始下降(3.19±0.77、1.96±0.36),48 h降低更加明显(1.04±0.18、1.06±0.17),与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2 mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)缺氧缺m后各时间点RhoGDI2 mRNA的表达和Bcl-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.831,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平降低,提示Rh0GDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生.     

外源性端粒酶逆转录酶基因转染对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨端粒酶逆转录酶（TERT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后细胞凋亡的影响。方法 将72只新生大鼠分为假手术组、空质粒组、HIBD组和TERT组。用改良Rice法制备新生大鼠HIBD模型。采用苏木精-伊红染色法观察脑组织病理改变。空质粒组和TERT组分别于术后0.5 h,经侧脑室注射pcDNA3.1空质粒或TERT真核表达质粒pcDNA3.1-TERT。采用Western blot法检测各组大鼠脑组织TERT、凋亡诱导因子（AIF）和活化型半胱氨酸蛋白酶3（CC3）的蛋白表达水平;采用TUNEL法检测各组神经细胞凋亡情况。结果 与假手术组相比,HIBD组、空质粒组和TERT组大脑皮层中TERT蛋白表达增加（P < 0.01）;与空质粒组和HIBD组相比,TERT组TERT蛋白表达明显增加（P < 0.01）。与假手术组相比,空质粒组和HIBD组AIF和CC3蛋白表达、细胞凋亡指数均显著增加（P < 0.01）;与空质粒组和HIBD组相比,TERT组AIF和CC3蛋白表达、细胞凋亡指数均明显减少（P < 0.01）。结论 TERT可抑制缺氧缺血诱导的神经细胞凋亡,在新生大鼠HIBD中具有一定的神经保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血红素氧化酶-1表达与脑细胞凋亡的关系

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后海马区血红素氧化酶 1(HO 1)的表达 ,以及与细胞凋亡的关系。方法　 7日龄SD仔鼠 72只 ,随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交和免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO 1mRNA及蛋白阳性细胞数量变化 ;用原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测凋亡的脑细胞。结果　 1.HIBD组右侧海马HO 1mRNA表达 4h开始升高 (P <0 .0 5 ) ,12h达高峰 ,4 8h开始略有下降 ,72h后仍高于对照组 (P <0 .0 1)。 2 .HO 1蛋白表达与HO 1mRNA表达变化规律相一致。 3.凋亡检测发现 ,HIBD组右侧海马 12h凋亡细胞数增加 ,2 4h已有明显细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,72h凋亡细胞减少 ,仍高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　新生大鼠HIBD后HO 1mRNA及其蛋白表达增加 ,可能参与神经细胞凋亡     

HIBD新生大鼠活性Caspase-3表达的动态变化

目的：了解缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后24h内脑组织活性Caspase-3表达的动态变化。方法：7d龄SD大鼠随机分为正常对照组和HIBD组 ,HIBD组分别观察到缺血缺氧后3h,6h,12h,24h。以免疫组化及Western Blot方法观察各组活性Caspase-3的表达。结果：随时间推移缺血缺氧后24h内活性Caspase-3阳性染色由细胞质性转向细胞核性,活性Caspase-3阳性染色细胞明显皱缩。HIBD组受损侧枕部皮质区活性Caspase-3阳性细胞数于缺血缺氧3h增多,6h有所下降,12h再次增多,并于24h达高峰,均高于正常对照组(P<0.05 或 0.01);海马回CA1区 活性Caspase-3阳性细胞数则随时间延长而增多,并于24h达高峰,均高于正常对照组(P <0.01 或 0.05)。Western Blot方法亦示HI后3h开始损伤侧脑组织中出现Caspase-3表达,6h时表达减弱、12h再次增高。结论：以活性Caspase-3作为HIBD导致脑细胞凋亡的指标,可观察到HIBD后24h内凋亡二次增多的动态变化现象,为掌握 抗凋亡制剂治疗HIE 的时机提供了一定的依据。