白术挥发油对LNCaP与DU145细胞表达性激素和PSA等指标的影响及意义

目的 研究白术挥发油对人前列腺癌细胞株的体外抗肿瘤作用. 方法 常规培养LNCaP和DU145细胞株.设4个对照组:不含血清的空白培养液(A组),含血清的培养液(B组),含血清培养LNCaP细胞(C组),含血清培养DU145细胞(D组).设6个实验组,C组加入白术挥发油浓度分别50 μg/ml(C1组)、250 μg/ml(C2组)及500 μg/ml(C3组),D组分别加入上述3种浓度的白术挥发油(D1组、D2组、D3组).10组细胞铺24孔板,每组均设3个复孔,两种细胞均分别按每孔2×106铺板.常规培养48 h后,6个实验组加入各自浓度的白术挥发油,4个对照组以等量培养液替代.电镜观察各组细胞凋亡现象,取各组培养液上清并冷离心收集标本,分别检测睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、tPSA和fPSA浓度.实验数据行多样本比较的统计学分析. 结果 C1和D2组生长抑制效应较好,LNCaP细胞呈时间效应正比关系,但DU145细胞仅在药物作用24 h后达到一次抑制率最大化(60.96％).与对照组相比,C、D组T浓度均为0,E2分别为269 pg/ml和239.81 pg/ml,呈高表达(P＜0.05);P组间变化差异不显著;VEGF、b-FGF和fPSA均呈高表达,2组分别为102.96 pg/ml、0.26 ng/ml、0.16 ng/ml和1763.40 pg/ml、6.41 ng/ml、0.44 ng/ml,以D组更明显(P ＜0.05);tPSA分别为0.36 ng/ml和0.发生凋亡的C1、C2、C3和D3组中,T最高由0升至0.37 ng/ml; E2最高由239.81 pg/ml升至649.90 pg/ml(P＜0.05);P最高由0.98 ng/ml升至9.83 ng/ml(P＜ 0.01).VEGF、b-FGF和fPSA呈总体下降趋势.C2和D2组fPSA分别由0和0.04 ng/ml升至1.78 ng/ml和0.23 ng/ml. 结论 白术挥发油对人前列腺癌细胞具有一定的凋亡诱导作用.雄激素非依赖性DU145细胞在性激素、细胞因子和PSA等表达方面与雄激素依赖性LNCaP细胞有不同的特点.     

膜联蛋白A2和葡萄糖调节蛋白78表达与前列腺癌的关系

目的 分析膜联蛋白A2(Annexin A2)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)分别在人前列腺增生细胞系(BPH-1)、雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(LNCaP)和雄激素依赖性前列腺癌细胞系(PC-3)中的差异表达. 方法 利用双向凝胶电泳结合质谱的蛋白质组学技术,分析Annexin A2和GRP78在三种细胞系的表达;分别采用免疫印迹法和免疫荧光染色法对其进行半定量和定位验证. 结果 Annexin A2在BPH-1和LNCaP中低表达,在PC-3细胞中高表达;GRP78在PC-3、BPH-1及LNCaP中表达量逐渐升高(P＜0.05). 结论 Annexin A2和GRP78的差异表达可能与前列腺癌发展的不同阶段激素依赖性有关,有望作为前列腺癌诊断和治疗的重要指标.     

苦参碱对雄激素依赖性前列腺癌细胞的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine）对雄激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCaP）凋亡及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）表达的影响。方法：分别用0.5g／L、1.0g／L、1.5g／L、2.0g／L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12h、24h、36h后MTT法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞凋亡的变化;24h后Western印迹法检测细胞内Bel-2和Bax的表达;12h、24h、36h后化学发光法检测LNCaP细胞培养液中PSA的变化。结果：苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。苦参碱诱导LNCaP细胞凋亡,各浓度组凋亡细胞比例均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;LNCaP细胞内Bcl-2含量呈浓度依赖性下降,Bax含量呈浓度依赖性升高（P〈0.01）;LNCaP细胞培养液中PSA的表达显著下降（P均〈0.05）。结论：苦参碱能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,诱导其凋亡,并抑制PSA的表达。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的：研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：分别用0、6．25、12．5、25、50μmol／L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞，12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长活性；24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化，透射电镜观察细胞超微结构变化；半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGF mRNA的表达；ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果：姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖，呈剂量与时间依赖性，不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2／M期阻滞（P〈0．01），且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组（P〈0．01），差异有统计学意义；姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变；PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论：姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长，并促进其G2／M期阻滞和凋亡，VEGF mRNA及蛋白的表达也明显降低，可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

米非司酮诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨米非司酮在体外诱导雄激素非依赖性前列腺癌DU-145、PC-3细胞凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测1,10,50和100μmol／L米非司酮作用于前列腺癌DU-145、PC-3细胞24～120h的吸光度（A）值,用流式细胞仪检测10μmol／L米非司酮作用24和48h后DU．145、PC-3细胞凋亡率的变化;采用免疫组化法检测米非司酮作用DU-145、PC．3细胞后bax、bcl-2、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的变化。结果1μmol／L米非司酮组的A值与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;10,50和100μmol／L米非司酮组的A值与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;米非司酮对前列腺癌DU-145、PC-3细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性。10μmol／L米非司酮作用前列腺癌DU-145细胞24和48h的凋亡率分别为15．3％和30．4％,PC-3细胞的凋亡率分别为22．2％和32．0％。经10μmol／L米非司酮作用后,DU-145、PC-3细胞中VEGF和bcl-2蛋白的表达明显减少,而bax的表达显著增加（P〈0．05）。结论米非司酮以时间．剂量依赖性方式抑制激素非依赖性前列腺癌DU-145和Pc-3细胞的增殖,其作用可能是通过降低VEGF蛋白的表达。从而下调bcl-2、激活bax蛋白的表达来实现。     

热休克蛋白70在人前列腺癌细胞株PC-3m和LNCaP中的表达及其意义

目的　探讨前列腺癌雄激素不敏感性的发生。方法　用细胞免疫化学方法和流式细胞术定位、定量分析体外培养的人前列腺癌雄激素不敏感细胞株PC-3m和雄激素敏感细胞株LNCaP中主要热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果　2种不同生物学特性的细胞株表面及细胞内均有HSP70表达,但PC-3m细胞膜及细胞内的阳性染色程度高于LNCaP;流式细胞术测定的PC-3m细胞膜及细胞内的表达量（17.61±4.20,69.54±10.50）分别高于LNCaP（7.42±1.70,21.83±6.30）,两者比较差异均有显著性(P＜0.05)。结论　正常状态下雄激素不敏感前列腺癌细胞株过表达HSP70,可能与雄激素不敏感性的发生、发展有关。     

凋亡相关基因PDCD5对前列腺癌细胞PC-3M-1E8促凋亡作用的研究

目的：观察外源性PDCD5对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M-1E8的促凋亡作用。方法：扩增重组质粒PCI-neo-PDCD5,利用脂质体介导将其瞬时转染前列腺癌细胞PC-3M-1E8,RT-PCR检测转染后表达情况;撤除血清培养16h后,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡指数,透射电子显微镜观察细胞形态。结果：MTT结果显示转染重组质粒组细胞较转染空载体和对照组细胞生长速度明显减慢,存活细胞明显减少（P〈0.001）;通过TUNEL与透射电镜观察,发现转染组细胞凋亡程度和数量明显增加,凋亡指数较对照组明显增高（P〈0.001）。结论：PDCD5在撤出血清因素的诱导作用下能显著抑制前列腺癌细胞PC-3M-1E8在体外的生长,明显促进其凋亡。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

LNCaP细胞系的雄激素非依赖性生长和类固醇尿苷二磷酸葡糖醛酯转移酶的表达

目的 :研究去除LNCaP细胞中雄激素后前列腺癌的雄激素非依赖性生长机制和葡萄糖醛酸化活性的影响。　方法 :在不含雄激素的培养基中持续传代LNCaP细胞 ,并检测细胞的葡萄糖醛酸化活性 ,以建立前列腺癌LNCaP SF的雄激素非依赖性生长模型。构建并检测尿苷二磷酸葡糖醛酯转移酶 (UGT) 2B15反义cDNA的表达载体。　结果 :LNCaP SF引起UGT2B15较高表达 ;与LNCaP细胞相比较 ,LNCaP SF的葡萄糖醛酸化活性要高 2 .5倍。LNCaP SF和LNCaP转染反义UGT2B15cDNA的能力与对照组相比更低 ,这提示UGT2B15在两种细胞雄激素萄糖醛酸化…     

3种手术方式治疗Tossy Ⅲ型肩锁关节脱位的对照研究

目的比较带线锚钉、锁骨钩钢板和Endobutton钢板3种内固定方法治疗TossyⅢ型肩锁关节脱位的手术疗效及相关并发症。方法手术治疗90例TossyⅢ型肩锁关节脱位患者,其中带线锚钉组(A组)30例,锁骨钩钢板组(B组)35例,Endobutton钢板组(C组)25例。比较手术时间及疗效,观察手术相关并发症。结果手术时间:A组(45±2.6)min,B组(40±2.8)min,C组(48±3.1)min;B组短于A、C组,差异均有统计学意义(P0.05),A组与C组比较差异无统计学意义(P0.05)。术后肩关节活动度:在术后3、6个月时比较B组差于A、C组,差异有统计学意义(P0.05),在术后1、2年时3组比较差异无统计学意义(P0.05),A组与C组在随访各时段比较差异均无统计学意义(P0.05)。疗效:B组与A、C组比较差异有统计学意义(P0.05),A组与C组比较差异无统计学意义(P0.05)。并发症情况:A组1例术后3个月复查X线片示锚钉松动,肩锁关节再次脱位,经更换锁骨钩钢板重新固定,恢复良好;B组7例术后肩部疼痛明显,肩关节外展、上举90°,术后6个月时取出内固定后症状均缓解;B组与A、C组比较差异均有统计学意义(P0.05),A组与C组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论带线锚钉及Endobutton钢板内固定符合肩关节的生物力学环境,相关并发症少。     

银芷肛肠熏洗剂对大鼠痔相近模型iNOS、VEGF、CD68表达的影响

为观察银芷肛肠熏洗剂对大鼠痔相近模型诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血管内皮生长因子（VEGF）、CD68表达的影响,本实验采用肛门外周注射冰醋酸法建立大鼠痔相近模型,造模成功后将50只大鼠随机分为空白对照组（A组）、马应龙金玄痔科熏洗散对照组（B组）和银芷肛肠熏洗剂低剂量组（C组）、中剂量组（D组）、高剂量组（E组）,每组10只,连续给予相应药物7d,于第8天处死大鼠,通过免疫组化染色法评估大鼠痔相近模型创面组织中iNOS、VEGF、CD68水平。结果显示,（1）iNOS：B～E组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．01;D、E组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞率评分明显低于B、C组,P〈0．01;而B、C组比较差异无统计学意义,P〉0．05。（2）VEGF：B～E组大鼠创面组织中VEGF阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．05或P〈0．01;D、E组大鼠创面组织中VEGF阳性细胞率评分均低于B、C组,P〈0．01;而B、C组比较差异无统计学意义,P〉0．05。（3）CD68：B～E组大鼠创面组织中CD68阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．05或P〈0．01;C～E组大鼠创面组织中CD68阳性细胞率评分均明显低于B组,P〈0．05或P〈0．01。结果表明,银芷肛肠熏洗剂能明显抑制大鼠痔相近模型iNOS、VEGF、CD68的表达,其对痔的治疗作用可能与抑制iNOS、VEGF、CD68表达有关。     

腹腔镜直肠癌根治术气腹及腹壁切口长度对血浆血管内皮生长因子水平的影响及其临床意义

目的:探讨腹腔镜直肠癌根治术(laparoscopic radical resection,LR)CO2气腹压力、腹壁辅助切口长度对血浆血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的影响及其临床意义。方法:入选患者88例,其中51例行腹腔镜手术(LR组),腹腔镜组内根据腹壁切口长度、气腹压力又分为腹壁长切口、高压力组(LR-Ⅰ组,n=21)与短切口、低压力组(LR-Ⅱ组,n=30);37例行开腹结肠癌根治术(open radical resection,OR,OR组)。采用酶联免疫组化法检测3组患者手术前后不同时段血浆VEGF水平,并进行组间同一时段、组内不同时段的对比。结果:术后腹壁切口平均长度方面,OR与LR组相比、LR-Ⅰ组与LR-Ⅱ组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。术前3组患者VEGF水平差异无统计学意义(P>0.05)。术后VEGF水平3组患者均有所升高;自术后第3天,OR组与LR组患者同一时段相比差异有统计学意义(P<0.05);LR-Ⅰ组与LR-Ⅱ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与术前相比,LR组仅术后第7天差异有统计学意义(P<0.05),余差异均无统计学意义(P>0.05);而OR组术后第1天至第7天差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:腹腔镜及开腹结直肠癌根治术后VEGF水平均有所升高,但腹腔镜组升幅低于开腹组;LR-Ⅰ组与LR-Ⅱ组的手术切口、气腹压力对VEGF水平的影响差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔镜直肠癌根治术是安全、可行的。     

体外受精-胚胎移植中卵巢低反应患者应用不同超促排卵方案的比较

目的 探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中卵巢低反应患者合适的超促排卵方案. 方法 对山东中医药大学第二附属医院生殖医学中心2009年1月至2010年12月120例158个周期采用不同超促排卵方案的卵巢低反应患者的临床资料进行回顾性分析.根据不同的超促排卵方案患者分组：促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）超短方案组（A组）、克罗米芬微刺激方案组（B组）和自然周期方案组（C组）,对各组临床用药及临床结局进行比较. 结果 三组患者中A组促性腺激素（Gn）用量及用药时间明显多于B组及C组,差异有统计学意义（P＜0.05）,C组在治疗过程中没有应用Gn,与B组比较也有统计学意义（P＜0.05）.注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）日内膜厚度、获卵数及临床妊娠率B组低于A组及C组,差异有统计学意义（P＜0.05）,A组及C组间无显著性差异（P＞0.05）.hCG日雌二醇（E2）A组及B组间比较无显著性差异（P＞0.05）,与C组间差异有统计学意义（P＜0.05）.周期取消率A组低于B组及C组,差异有统计学意义（P＜0.05）,B组及C组间比较无显著性差异（P＞0.05）.各组间MⅡ卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率均无显著性差异（P＞0.05）. 结论 对于卵巢低反应的患者,GnRH-a超短方案、克罗米芬微刺激方案及自然周期方案各有利弊,但都是可行的方案,治疗时需要根据患者的不同情况进行个体化的选择.     

前列腺液中性粒细胞弹性蛋白酶在Ⅲ型前列腺炎诊断中的意义

目的：探讨中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）在Ⅲ型前列腺炎诊断中的意义。方法：ⅢA型36例与ⅢB型87例分别进行前列腺按摩液（expressed prostatic secretion,EPS）细菌培养、EPS常规检查、NIH-前列腺炎症状评分（NIHCPS1NE）、NE浓度的测定,然后行独立样本t检验和简单相关分析。正常对照组84例同样进行上述检食后分别与ⅢA型和ⅢB型进行独立样本t检验。结果：①ⅢA型和ⅢB型患者EPS中NE（t=6．32,P〈0．05）差异有统计学意义,NE与白细胞呈现明显的正相关关系（r=0．878,P〈0．05）,两者CPSI（t=1．85,P〉0．05）比较差异无统计学意义。②ⅢA型和对照组患者EPS中白细胞（t＝13．74,P〈0.05）、NE（t=6．499,P〈20．05）、CPSI（t=23．76,P〈0．05）差异有统计学意义。ⅢB型和对照组患者EPS中NE（t=2．14,P〈0．05）、CPSI（t=33．15,P〈0．05）差异有统计学意义,白细胞（t=1．49,P〉0．05）无统计学意义。结论：NE在Ⅲ型前列腺炎的诊断中能够作为一个很有意义的指标,而NE浓度与白细胞呈较强的正比关系,提示NE浓度的高低能够反映出慢性前列腺炎的严重程度。     

年龄、移植胚胎数量、质量与临床妊娠率的关系

目的探讨重复周期体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中胚胎移植数量、质量对不同年龄阶段妇女IVF-ET妊娠率和多胎妊娠率的影响。方法 772个行第二次IVF-ET的取卵周期,按年龄分三组(35周岁、35~37周岁和≥38周岁),以移植胚胎数量不同分为两组(A组,移植2个胚胎;B组,移植3个胚胎);再根据移植优质胚胎的个数将A组分别细分为A0、A1和A2组(优质胚胎移植数分别为0、1和2),同法B组分为B0、B1、B2和B3组(优质胚胎移植数分别为0、1、2和3)。比较临床妊娠率、多胎发生率等多项指标的差异。结果 (1)35周岁组:A组和B组临床妊娠率无显著差异(49.4%vs.42.5%,P0.05);A组的单胎妊娠率显著高于B组(75.3%vs.55.6%,P0.05),而3胎妊娠率显著低于B组(0%vs.9.8%,P0.05),其中B2组和B3组的单胎妊娠率低于A2组(P0.05),而3胎妊娠率高于A2组(P0.05)。(2)35~37周岁组:A、B两组的妊娠率无统计学差异(P0.05);A组的单胎妊娠率显著高于B组(86.7%vs.54.8%,P0.05),双胎妊娠率显著低于B组(6.7%vs.35.7%,P0.05);A0组无胚胎种植,B0组获得11.1%种植率和29.2%妊娠率(P0.05);A1组无双胎妊娠发生,但B1组双胎妊娠率为45.5%(P0.05);B2组双胎率显著高于A2组(53.3%vs.11.1%,P0.05)。(3)≥38周岁组:A、B两组临床妊娠率无统计学差异,但B组妊娠率相对较高(23.7%vs.10.0%,P0.05)。结论年龄≥38周岁及无优质胚胎可移植的年龄35~37周岁妇女,增加移植胚胎数至3个,可能增加临床妊娠率;而对于38周岁尤其是35周岁的重复IVF-ET不育妇女,临床上有优质胚胎可移植时,移植胚胎数由3个降至2个可能并不降低临床妊娠率,但可以降低多胎妊娠率。     

并发静脉癌栓的肾细胞癌中VEGF的表达及临床意义

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）的表达与肾细胞癌（RCC）并发静脉癌栓（VTT）的关系。方法：采用免疫组织化学MaxVision^TM快捷法检测57例并发或未并发VTT的RCC组织和10例远离肿瘤的正常肾组织中VEGF的表达状况。实验分为三组,A组：并发VTT的RCC组织27例;B组：未并发VTT的RCC组织30例;C组：远离肿瘤的正常肾组织10例。结果：VEGF在三组中的阳性表达率分别为81．5％、63．3％和20．0％,其中A组和C组差异有统计学意义（P〈0．01）,A组和B组差异无统计学意义（P〉0．05）,B组和C组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：VEGF的异常表达可能在RCC并发VTT的形成中发挥重要作用,以抑制VEGF蛋白及其受体作用的靶向治疗药物在RCC并发VTT的治疗中应有良好效果。     

来曲唑促排卵在卵巢低反应患者中的应用

目的探讨来曲唑促排卵对IVF-ET卵巢低反应患者妊娠结局的影响。方法回顾性分析IVF-ET卵巢低反应患者应用来曲唑促排卵的62个周期(A组),随机选取同期年龄35岁应用短效GnRH-a降调后促排卵的长方案62个周期作为对照(B组)。比较两组患者临床资料、获卵、受精及妊娠情况。结果 A组Gn治疗时间及总剂量均显著低于B组(P0.01);A组HCG日子宫内膜厚度、E2及P水平均显著低于B组,LH水平显著高于B组(P0.01);A组未获卵周期率高于B组,平均获卵数及可移植胚胎数均显著低于B组(P0.01),但受精率及卵裂率两组无显著性差异(P0.05);A组取消周期率显著高于B组(P0.01),临床妊娠率/取卵周期显著低于B组(P0.01),但两组的胚胎种植率、临床妊娠率/移植周期及流产率无显著性差异(P0.05)。结论来曲唑促排卵获得卵母细胞数目少,但受精及卵裂情况较好;而且对子宫内膜影响小,适宜受精卵着床,适合于卵巢低反应的IVF-ET患者。     

镁合金对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响研究

目的：探讨镁合金对人骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法抽取人骨BMSCs并予以鉴定;采用AZ31B镁合金浸提液培养人BMSCs 1、3、5、7 d,以普通培养基为对照组,CCK-8法检测细胞增殖活性;应用浸提液培养人BMSCs,诱导分化后检测成骨分化相关基因（COLⅠ、ALP、OPN）的表达。另设置调节pH值AZ31B组（pH-AZ31B组）,以观察pH值变化对实验结果的影响。结果 BMSCs表达CD34（-）、CD45（-）、CD44（＋）、CD73（＋）、CD90（＋）、CD105（＋）。浸提液培养1、3、5、7 d,AZ31B组细胞相对增殖率低于对照组（P＜0.05）,毒性评级为2级;对照组和pH-AZ31B组细胞活性较好,两组细胞相对增殖率比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）。AZ31B组COLⅠ基因表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）;AZ31B组ALP基因表达量较低（P＜0.05）,pH-AZ31B组与对照组无显著差异（P＞0.05）;AZ31B组OPN基因表达量在诱导分化后6 d、12 d显著高于对照组（P＜0.05）,pH-AZ31B组与对照组无显著差异（P＞0.05）。结论镁合金对BMSCs增殖及成骨分化无不良影响,其影响可能与浸提液pH值的变化有关。     

腺病毒介导的PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclinD1、p21表达的影响

目的:构建携带抑癌基因PTEN的腺病毒载体,探讨PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclin D1、p21表达的影响。方法:采用RT-PCR方法从大鼠海马神经元扩增目的基因PTEN,连接入pENTR2A载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以携带PTEN基因的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测细胞中PTEN的过表达情况。Western印迹检测PTEN、cyclin D1和p21表达的变化,通过细胞生长实验、平板克隆实验检测PTEN对PC-3细胞增殖能力的影响。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-PTEN;PC-3细胞经Ad-PTEN感染后PTEN蛋白表达水平明显增加。Western印迹实验所得条带进行灰度值分析后与β-actin求比值,PTEN蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.215±0.065)明显高于对照组[(0.052±0.009),t=4.30,P0.05]和Ad-LacZ组[(0.056±0.008),t=4.21,P0.05]。cyclin D1蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.256±0.072)明显低于对照组[(0.502±0.087,t=3.77,P0.05)]和Ad-LacZ组[(0.498±0.081,t=3.87,P0.05)]。p21蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.589±0.076)明显高于对照组[(0.146±0.026,t=9.55,P0.01)]和Ad-LacZ组[(0.163±0.024,t=9.26,P0.01)]。MTT实验显示Ad-PTEN对PC-3细胞的抑制作用自48h后(21.98%)有显著性(t=6.80,P0.01)。平板克隆实验显示Ad-PTEN组克隆形成率[(37.4±4.18)%]明显低于对照组[(54.9±4.81)%,t=4.76,P0.01]及Ad-LacZ组[(56.5±5.42)%,t=4.83,P0.01]。结论:通过腺病毒载体Ad-PTEN使PC-3细胞表达PTEN基因,可以明显抑制细胞的增殖,并可降低cyclin D1表达,同时增加p21的表达。