MMP-2和VEGF在视网膜新生血管中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）在视网膜新生血管中的表达及意义。方法取C57BL/6J小鼠60只,随机分为高氧组和正常组,各30只。以高浓度氧诱导小鼠建立视网膜新生血管模型。采用ADP酶视网膜铺片、苏木精-伊红染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞数并检测MMP-2、VEGF蛋白的表达。结果高氧组视网膜可见大量新生血管形成;突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数为（33.51±2.55）个,与对照组相比差异有统计学意义（t=9.345,P〈0.05）。高氧组与对照组比较,MMP-2、VEGF蛋白在神经节细胞层、内丛状层、内核层和突破视网膜内界膜的新生血管中高表达,且二者表达呈正相关（r=0.825,P〈0.05）。结论MMP-2、VEGF共同促进视网膜新生血管的形成,且二者可能具有协同作用。     

MMP-2和VEGF在视网膜新生血管的表达

目的检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在视网膜新生血管中的表达,探讨两者的相互关系。方法 取7 d龄C57BL/6J小鼠40只,随机分为高氧组和对照组,每组各20只。建立高氧诱导的视网膜新生血管小鼠模型。采用ADP酶组织化学染色、HE染色和免疫组化方法分别观察2组视网膜血管的变化、计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目和检测MMP-2、VEGF的表达。结果 高氧组视网膜铺片可见大量视网膜新生血管形成,对照组未见新生血管形成;高氧组突破视网膜内界膜内皮细胞核数目为14(14.230±5.388),与对照组数目0(0.110±0.386)相比差异有统计学意义(t=23.537,P<0.001);对照组和高氧组视网膜组织中VEGF的积分光密度值分别为36.81±14.60、60.85±24.55,差异有统计学意义(t=3.348,P<0.01);对照组和高氧组视网膜组织中MMP-2的积分光密度值分别为16.33±4.13、21.12±6.29,差异有统计学意义(t=3.160,P<0.01)。高氧组视网膜组织中MMP-2和VEGF的表达呈正相关(r=0.633,P<0.01)。结论 在ROP小鼠模型的视网膜组织中,VEGF、MMP-2的表达同步升高,二者的高表达可能与视网膜新生血管形成密切相关。     

不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后角膜MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的：探讨不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后小鼠角膜基质金属蛋白酶－2（ matrix metalloproteinase－2,MMP－2）及其组织抑制剂－2（ tissue inhibitor of metalloproteinase－2, TIMP－2）表达的影响及其调节作用。方法：BALB／c小鼠60只随机分为实验组A、实验B及对照组C,每组20只。采用1mol／L氢氧化钠溶液烧伤小鼠右眼角膜,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型,分别予以A组、B 组重组 Canstatin 蛋白3μg／mL、5μg／mL 点右眼,4次／d,对照组C组予以生理眼水点右眼。在碱烧伤后第1、3、7、14d以形态学分析评价角膜上皮损伤面积及新生血管生长的情况,并于碱烧伤后第1、3、7、14 d 应用Western－blot检测角膜MMP－2和TIMP－2的表达,增强化学发光法（ ECL）对结果进行分析。结果：形态学分析显示,A组和B组小鼠在碱烧伤后第3d起各时间点角膜上皮缺损面积均小于对照组（P＜0．01）,角膜新生血管均得到抑制,CNV面积明显小于对照组（ P＜0．01）。 Western－blot结果显示,碱烧伤后各时间点MMP－2的表达,A组和B组均明显低于对照组（P＜0．01）,TIMP－2的表达高于对照组（P＜0．01）,且A组和B组间MMP－2的表达在第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）,TIMP－2的表达在第7d及第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：重组Canstatin蛋白可通过抑制角膜细胞及浸润的炎性细胞产生MMP－2,促进TIMP－2表达,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展,对碱烧伤后角膜的重塑起着重要作用。     

VEGF—C、LYVE—1 mRNA在喉鳞癌组织中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelium growth factor-C,VEGF-C)与淋巴管内皮透明质酸盐受体1(lymphatic vascular endothelial HA receptor-1,LYVE-1)Mrna在喉鳞癌组织中的表达及其与喉鳞癌临床病理特征之间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链式反应技术,对40例新鲜喉鳞癌标本及10例癌旁正常喉组织中的VEGF-C、LYVE-1 Mrna表达进行检测.结果 VEGF-C Mrna在喉鳞癌组织与癌旁正常喉组织中的表达,差异有非常显著性(P＜0.01);颈淋巴结转移组VEGF-C Mrna表达高于无颈淋巴结转移组,差异有显著性(P＜0.05);喉鳞癌组织VEGF-C Mrna表达与病变部位、T分期、病理分级未显示有关;喉鳞癌组织未显示有意义的LYVE-1 Mrna表达.结论 喉鳞癌颈淋巴结转移可能与VEGF-C Mrna表达水平有关.     

大鼠外伤性白内障晶状体上皮细胞中MMP-2和TIMP-2的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及其抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)在大鼠外伤性白内障形成过程中所发挥的作用。方法:正常成年SD大鼠20只,体质量250~300g,建立单眼晶状体穿通伤后外伤性白内障模型,并随机分为伤后12,24,72,168h4个时相组。用免疫组织化学染色法检测MMP-2和TIMP-2在各组晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)中的表达情况。结果:外伤后12h晶状体开始出现混浊,并随时间延长而加重。MMP-2在各外伤组LEC中均有较强的阳性表达,而在正常对照眼中无表达。TIMP-2的表达在各组LEC中差异均无显著意义(P>0.05)。MMP-2与TIMP-2阳性表达率间无相关性(P>0.05)。结论:MMP-2参与了外伤性白内障形成的病理环节。MMP-2和TIMP-2表达失衡在外伤性白内障的发生和发展过程中发挥重要作用。     

羊膜移植对兔角膜碱烧伤早期MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的研究羊膜移植在兔角膜碱烧伤早期治疗中的作用机制。方法对60只新西兰白兔随机分为碱烧伤组、羊膜移植组及正常对照组,实验组建立角膜碱烧伤模型,羊膜移植组于烧伤后30min实施羊膜移植手术。术后14、30、60d,观察分析角膜病理组织学改变;并应用计算机图像分析系统对角膜组织中基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（Tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达进行半定量测定。结果羊膜移植组角膜浸润及角膜基质坏死溃疡程度均较同期碱烧伤组为轻,角膜MMP-2的表达显著降低（P〈0.05）,而TIMP-2表达显著升高（P〉0.05）。结论羊膜移植可提高角膜TIMP-2表达的水平并抑制MMP-2的活性,从而在角膜碱烧伤的早期治疗中起到抑制角膜炎症和溃疡的作用。     

透镜诱导型近视肾阳虚豚鼠巩膜MMP-2及其抑制剂TIMP-2的表达

目的　探讨负透镜诱导型近视肾阳虚豚鼠巩膜基质金属蛋白酶２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌ-ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-２,ＭＭＰ-２）及其抑制剂基质金属蛋白酶-２抑制剂（ｔｉｓｓｕｒｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ-ｔｅｉｎａｓｅ-２,ＴＩＭＰ-２）的表达。方法　选取７２只３周龄雄性英国种三色短毛豚鼠,随机分为正常对照组、戴镜组和肾阳虚＋戴镜组,每组各２４只。肾阳虚＋戴镜组每日腹腔注射氢化可的松注射液,剂量１０ｍｇ·ｋｇ－１,正常对照组和戴镜组则给予等量生理盐水,每天１次,连续２周。第３周起,戴镜组、肾阳虚＋戴镜组右眼均戴－１０．０Ｄ透镜,戴镜２周,正常对照组不作任何干预。戴镜前后分别进行眼轴长度及屈光度的测量;ＳＹＢＲｇｒｅｅｎＩ实时荧光定量ＰＣＲ检测后极部巩膜ＭＭＰ-２及ＴＩＭＰ-２ｍＲＮＡ的表达变化;ＥＬＩＳＡ和免疫组织化学检测后极部巩膜ＭＭＰ-２及ＴＩＭＰ-２蛋白表达的变化。结果　与正常对照组比较,戴镜组右眼近视屈光度增高（ｔ＝１８．７６０,Ｐ＝０．０００）,眼轴延长（ｔ＝－２．７０９,Ｐ＝０．０１３）,后极部巩膜ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ及蛋白表达明显增加（ｔ＝－２．１３４,Ｐ＝０．０４５;ｔ＝－６．３１５,Ｐ＝０．０００）,ＴＩＭＰ-２ｍＲＮＡ及蛋白表达明显降低（ｔ＝４．６３７,Ｐ＝０．０００;ｔ＝６．０６２,Ｐ＝０．０００）。与戴镜组比较,肾阳虚＋戴镜组右眼近视屈光度增高（ｔ＝３．０２６,Ｐ＝０．００６）,眼轴更长（ｔ＝－２．１４４,Ｐ＝０．０４４）,后极部巩膜ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ及蛋白表达均增加（ｔ＝－４．０９４,Ｐ＝０．００１;ｔ＝－６．２９１,Ｐ＝０．０００）,ＴＩＭＰ-２ｍＲＮＡ及蛋白表达均降低（ｔ＝５．５２４,Ｐ＝０．０００;ｔ＝３．９５１,Ｐ＝０．００１）。结论　在负透镜诱导下,肾阳虚豚鼠较正常豚鼠近视程度更加严重,肾阳虚体质与近视的发生发展可能有密切联系。     

翼状胬肉中MMP-2,TIMP-2和TGF-β1的表达意义

目的:探讨MMP-2及其抑制剂TIMP-2和影响它们作用的TGF-β1在翼状胬肉中的表达及意义。方法:采用Maxvision免疫组化技术检测在20例翼状胬肉和10例正常球结膜中MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的表达,并比较两组中表达的差异。结果:MMP-2和TGF-β1在翼状胬肉中的表达的阳性率显著高于正常球结膜中它们的阳性表达率(z=-4.618,-4.376,P<0.01),而TIMP-2在两组中的表达差异无显著性(z=-1.319,P>0.05)。经Spearman等级相关检验分析,在翼状胬肉中,MMP-2和TGF-β1的阳性表达率存在正相关(r=0·686,P<0.01);而MMP-2和TGF-β1与TIMP-2阳性表达率之间无相关(r=-0.410,-0.143,P>0.05)。结论:TGF-β1介导的MMP-2和TIMP-2表达失衡在翼状胬肉的发生、发展及侵犯角膜过程中发挥着重要的作用。     

TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达

目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。     

雌激素对人角膜基质细胞MMP-2、TIMP-2及TGF-β1表达的影响

目的:在体外实验中探讨雌激素对人角膜基质细胞中基质金属蛋白酶MMP-2及其抑制剂TIMP-2和转化生长因子TGF-β1蛋白表达的影响.方法:用1.5ng/mL IL-1β模拟角膜基质细胞炎性环境,不同浓度雌激素(0,10-10,10-8,10-6,10-4mol/L的17-β雌二醇)体外作用于人角膜基质细胞,四甲基偶氮唑(MTT)比色法鉴定细胞活性.酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中MMP-2、TIMP-2及TGF-β1蛋白的表达量.结果:不同浓度雌激素(E2)对角膜基质细胞的活性没有影响.E2处理组的MMP-2、TIMP-2及TGF-β1表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).E2处理组与对照组相比,雌激素处理使MMP-2及TGF-β1的表达明显减少,而TIMP-2的表达则显著增多.结论:雌激素能一定程度抑制MMP-2及TGF-β1的表达,同时促进TIMP-2的表达,这可能对正常人角膜起保护作用.     

p16基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p16基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义.方法 应用原位杂交法检测49例喉鳞癌组织、19例声带息肉、12例癌旁增生组织及8例非典型增生组织中p16基因的表达情况.结果 喉鳞癌组织中p16基因表达呈阳性者5例,定位于胞浆,其余44例呈阴性表达.p16阳性表达例数在喉鳞癌组织、声带息肉、癌旁增生组织及非典型增生组织中分别为5,16,8,4例,喉鳞癌组织中p16mRNA的阳性表达显著低于声带息肉、癌旁增生组织及非典型增生组织(P＜0.01),但与喉鳞癌的l临床分期及患者性别无相关性(P＞0.05).结论 喉鳞癌组织中存在p16基因的低表达;p16基因可能参与调控了喉鳞癌的发生过程.     

P185基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨P185基因在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用原位杂交方法检测49例喉鳞癌组织、19例声带息肉、12例癌旁增生组织及8例非典型增生组织中P185基因的表达情况.结果 喉鳞癌组织中44例P185基因呈阳性表达,定位于胞浆.在声带息肉、癌旁增生组织及非典型增生组织中P185基因的阳性表达例数分别为0,4,5例,经统计学分析,喉鳞癌组织中P185基因的表达显著高于声带息肉、癌旁增生组织及非典型增生组织(P均＜0.01),与喉鳞癌的临床分型分期,性别无相关性(P均＞0.05).结论 喉鳞癌组织中P185基因呈高表达,提示P185基因可能参与调控了喉鳞癌的发生过程,且与喉癌的临床分期分型无关.     

ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 研究整合素连接激酶(itegrin-linkedkinase,ILK)在眼睑结膜鳞状细胞癌中的表达及其与眼睑结膜鳞状细胞癌的分化程度的关系和相关性,探讨其在眼睑结膜鳞状细胞癌发生发展中的作用和临床意义.方法 采用免疫组化EliVision法染色对34例眼睑结膜鳞状细胞癌和10例癌旁正常组织标本进行ILK标记观察并分析表达情况.结果 ILK蛋白在眼睑结膜鳞状细胞癌组织、癌旁正常眼睑结膜组织中的表达阳性率分别为73.53％(25/34),0.00％(0/10),蛋白在眼睑结膜鳞状细胞癌组织的表达明显高于癌旁正常眼睑结膜组织,差别有显著性(P=0.000,P＜0.01).ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌23例高-中分化组中,有14例表达阳性,在11例低分化组中全部表达阳性,两者间有显著性差别(P=0.017,P＜0.05).结论 检测ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌组织中的表达明显高于癌旁正常眼睑结膜组织,提示ILK蛋白的表达可能与眼睑结膜鳞状细胞癌的发生有关;表达与肿瘤分化程度密切相关,提示可能与眼睑结膜鳞状细胞癌的发展及恶性潜能有关.     

眼睑鳞状细胞癌移植瘤模型建立及其VEGF的表达研究

目的建立眼睑鳞状细胞癌(SCC)移植瘤模型并研究其血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法BALB/c裸鼠40只,随机平均分为实验组和对照组,实验组裸鼠右上睑皮下接种Tca8113细胞建立眼睑SCC移植瘤,接种后第15、30 d,应用酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测所有裸鼠血清中VEGF蛋白水平,并采用免疫组织化学法检测实验组移植瘤组织和对照组正常眼睑组织中VEGF的表达。结果实验组裸鼠右上睑均有SCC移植瘤形成,接种后第15、30 d,实验组裸鼠血清中VEGF质量浓度(188.6 pg/m l±79.93 pg/m l和200 pg/m l±75.28 pg/m l)均显著高于对照组(94.8 pg/m l±31.41 pg/m l和90.4 pg/m l±28.62 pg/m l)(P<0.01),两组间VEGF染色分数经统计学分析也存在显著差异(2.6±0.16和2.38±0.19,0.64±0.18和0.52±0.15)(P<0.01)。结论Tca8113细胞裸鼠眼睑皮下接种是建立眼睑SCC移植瘤的可行方法,靶向VEGF的基因治疗可望为眼睑SCC治疗提供新的途径。     

Toll样受体-5在喉鳞状细胞癌中的表达及作用

目的探索Toll样受体-5(TLR-5)对喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)增殖及肿瘤微环境的影响。方法采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织与癌旁组织中TLR-5的表达;采用免疫组织化学方法检测TLR-5的蛋白表达。利用GEPIA数据库统计TLR-5对患者总体生存率和无病生存率的影响。利用TCGA数据库分析与TLR-5相关的基因,并以相关系数绝对值>0.3为界,用Metascape分别以正相关和负相关基因行聚类分析。在Hep-2细胞系中用慢病毒构建TLR-5敲除和过表达的稳定细胞系,之后用鞭毛蛋白(flagellin)刺激24、48、72 h,通过检测CCK8的吸光度值(OD值)反映细胞的增殖情况。采用qRT-PCR和酶联免疫吸附测定法检测TLR-5对炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和IL-17的表达差异。利用TIMER数据库行TLR-5与免疫细胞浸润比例的相关性分析,并用TCIA数据库分析不同免疫细胞对患者生存预后的影响。结果TLR-5在喉鳞癌组织及癌旁组织中均有表达,且在癌旁组织中的表达明显高于癌组织。预后分析结果表明,高表达TLR-5的喉鳞癌患者较低表达者总体生存率更高。基因聚类分析结果显示,TLR-5正调控淋巴细胞激活、免疫应答、细胞因子分泌、细胞黏附等过程;负调控核糖核酸酶复合物生成、翻译终止、核糖体大亚单位合成、蛋白质折叠及细胞周期等。TLR-5敲除组的OD值在各时间点均明显高于过表达组;鞭毛蛋白刺激后,各组在各时间点的OD值较无刺激减小。TLR-5激活后上调IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17的表达。TLR-5的表达与B细胞、CD8^+T细胞、CD4^+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的浸润比例呈正相关,且B细胞浸润比例与预后呈正相关。结论TLR-5激活抑制喉鳞癌细胞增殖并促进炎症因子表达;TLR-5激活可招募多种免疫细胞。     

P16INK4a和P14ARF蛋白在喉表达及临床意义鳞癌中的

【摘要】目的探讨P16INK4a和P14ARF蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学EnVision法检测71例喉鳞状细胞癌组织中P16INK4a和P14ARF蛋白的表达。结果71例喉鳞状细胞癌标本中,35例（49．3％）P16INK4a蛋白阴性,29例（40．8％）P14ARF蛋白阴性,15例（21．1％）P16INK4a和P14ARF蛋白表达均阴性。P16INK4a和P14ARF蛋白阴性间无相关性（P〉O．05）。P16INK4a和P14ARF蛋白阴性率均与患者性别、年龄及临床分期无相关性（P〉0．05）。P14ARF蛋白在Ⅰ—Ⅱ期病例中强阳性占阳性比例为41．7％,在Ⅲ～Ⅳ期中强阳性比例为11．1％。结论P16INK4a和P14ARF在喉鳞状细胞癌发生过程中起重要作用,两种蛋白的失活是各自独立的事件。P14ARF蛋白的缺失发生在喉鳞状细胞癌早期。（中国眼耳鼻喉科杂志,2010,10：218—220）     

喉鳞癌中扭曲基因、上皮型钙黏附蛋白和神经型钙黏附蛋白基因表达及相关研究简

目的 研究转录因子扭曲基因（Twist）在喉鳞癌（LSCC）中的表达及其通过对上皮型钙黏附蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏附蛋白（N-cadherin）的作用在判断肿瘤的生物学行为方面的意义。方法 采用免疫组织化学SP法及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测49例喉鳞癌及20例癌旁组织中Twist、E-cadherin和N-cadherin基因的表达情况。结果 Twist在喉癌组织中的阳性表达率（61.22%）明显高于癌旁组织（25%）（P〈0.01）;Twist在喉癌组织中的mRNA相对表达量（0.93±0.39）明显高于癌旁组织（0.57±0.24）（P〈0.01）;Twist在喉癌中蛋白及mRNA表达均与淋巴结转移、临床分期相关,而与肿瘤病理学分级、临床分型及年龄无关。在mRNA及蛋白水平,Twist与E-cadherin,N-cadherin与E-cadherin的表达均呈负相关;Twist与N-cadherin均呈正相关。结论 Twist在喉鳞癌中过度表达, 可能通过分别上调N-cadherin和下调E-cadherin的表达,进而在喉鳞癌的浸润、转移过程中发挥重要作用。