Ru486对胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞的影响

为研究糖皮质激素的可能作用位点，以分离培养的肺Ⅱ型上皮细胞为主要材料，通过板层小体染色的方法，观察Ｒｕ４８６对该细胞的影响，结果显示，无血清培液中Ｒｕ４８６１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ至培养第１ｄ或１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ培养至第３ｄ时均使Ⅱ型细胞出现坏现象，但加入地塞米松（ＤＥＸ）１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ４ｈ后再用Ｒｕ４８６则坏死现象消失，由此从形态学角度证实了肺Ⅱ型上皮细胞具有糖皮质激素受体，Ｒｕ４８６是通过     

Ru486对胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞的影响

为研究糖皮质激素的可能作用位点，以分离培养的肺Ⅱ型上皮细胞为主要材料，通过板层小体染色的方法，观察Ｒｕ４８６对该细胞的影响。结果显示，无血清培液中Ｒｕ４８６１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ至培养第１ｄ或１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ培养至第３ｄ时均使Ⅱ型细胞出现坏死现象，但加入地塞米松（ＤＥＸ）１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ４ｈ后再用Ｒｕ４８６则坏死现象消失。由此从形态学角度证实了肺Ⅱ型上皮细胞具有糖皮质激素受体。Ｒｕ４８６是通过阻断该受体发挥作用的。     

小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养和鉴定

目的:建立一套可靠的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)分离、纯化和培养技术,为进一步研究小鼠支气管肺泡干细胞(BASC)的增殖、分化及其在肺腺癌发生中的作用奠定基础。方法:采用分散酶消化小鼠肺组织块,经免疫黏附法纯化小鼠AECⅡ,并进行原代培养。用SP-C和CCSP免疫荧光染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果:该方法所获得细胞产量大、纯度高。AECⅡ比例约为(80±2.6)%(n=5),Clara细胞约(6.7±1.2)%(n=5),并能维持培养3~5 d。透射电镜观察AECⅡ,细胞内可见板层小体。结论:该方法是一种可靠的小鼠AECⅡ的分离、纯化和培养技术,可满足一般的实验要求。     

模拟海拔7000米缺氧小鼠肺1脑组织一氧化氮合酶活性变化

目的：探讨模拟海拔7000米缺氧小鼠肺和脑组织中NOS活性的变化，方法：24只小鼠随机分为常氧对照组，急性低氧组和低氧／再复氧组，分别测定肺和脑组织的NOS。结果：急性低氧组肺，脑组织NOS水平较常氧对照组及低氧／再复氧组复氧组明显下降（P＜0．01），低氧／再复氧组NOS活力较常氧对照组下降不明显（P＞0．05）。结论：低氧时NOS活力下降。     

体外膜肺对犬肺泡Ⅱ型上皮细胞系统超微结构的影响

目的：观察体外膜肺(ECMO)早期肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)及肺表面活性物质(PS)系统超微结构改变，探讨ECMO过程中ATⅡ功能变化，不断改良ECMO技术。方法：应用电子显微镜观察体外膜肺犬ATⅡ及PS系统超微结构。结果：ECMO组均可见PS层丧失连续、均匀绒状结构，脱落人肺泡腔或聚集成块现象或散落于肺泡腔内；可见ATⅡ板层小体减少、空泡形成，核变性、崩解；基底膜水肿、裸露，甚至断裂，炎性细胞渗出到肺泡腔。与对照组比较有显著差异，提示现有的ECMO治疗6h可引起肺泡Ⅱ型上皮细胞系统超微结构的改变。结论：现有的ECMO技术还有待改良。     

新生小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离方法

目的提取新生小鼠的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并进行培养和鉴定。方法应用酶消化和免疫磁珠分选方法分离并纯化C57B/L6新生小鼠AECⅡ。根据AECⅡ特异的细胞形态,利用透射电镜进行鉴定。正置荧光显微镜观察AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C前体(proSP-C)及表面活性蛋白-B (SP-B)的表达。免疫印记技术检测新生小鼠AECⅡ中特异性肺泡表面活性蛋白-A (SP-A)及proSP-C的表达。结果每只新生小鼠可获得(2±0.5)×105AECⅡ,纯度>90%。电镜下可见丰富的AECⅡ及其特异结构板层小体。正置免疫荧光显微镜观测AECⅡ中proSP-C和SP-B蛋白的表达,免疫印迹结果显示细胞内SP-A和proSP-C蛋白表达呈阳性。结论利用酶消化和免疫磁珠分选的方法可成功分离出高产量、高纯度的新生小鼠AECⅡ。     

肺纤维化形成过程中大鼠成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的:研究在平阳霉素诱导的大鼠肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:先将大鼠分成平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型(平阳霉素3mg/kg),生理盐水组气管内注射等量生理盐水,分别于7,28 d处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组及生理盐水组各取3只提取肺成纤维细胞,平阳霉素组6只提取大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,分别进行培养。待两种细胞均已贴壁后,再进行如下分组即:①实验组:用平阳霉素组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h;②对照组:用生理盐水组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h。用半定量RT-PCR法检测实验组和对照组中肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A、TGF-β及HGF mRNA表达的变化。结果:①SP-A mRNA和HGF mRNA的表达实验组低于对照组(P相似文献   

肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺移植中的作用及其进展

随着医学的迅速发展 ,大器官的移植 (如肺移植等 )已成为世界医学研究的热点。到 90年代末 ,全世界已进行肺移植的患者达 35 0 0多人 ,1年存活率为 93% ,5年存活率为 4 0 % ,最长存活时间为 10年 ,显示了肺移植的诱人前景。但是 ,与其它器官移植一样 ,肺移植中同样存在移植肺的保存、缺血再灌注、术后感染、急慢性排斥反应等。1　肺移植与肺泡Ⅱ型上皮细胞[1]目前认为 ,脏器获取前血液动力学的不稳定状态、移植肺再灌注、术后感染、排斥都是导致肺移植后高死亡率的原因。肺移植后肺功能障碍、肺部免疫力低下和存活期较短的重要原因是肺部感…     

汽车尾气对小鼠抗氧化酶活性的影响

目的 探讨汽车尾气对小鼠血液中的SOD、CAT、GSH-Px活性的影响。方法 64只小鼠分成相等的4大组，1大组作为对照组不通汽车尾气，2大组通1h汽车尾气，3大组通1．5h，4大组通2h。SOD活性和GSH-Px活性测定按试剂盒说明进行，用KMnO4滴定法测CAT活性。结果 随着污染程度的加重和污染时间的延长，3种酶活性均呈现先升高后下降的趋势，但酶升高和下降的趋势并不完全相同。结论 生物能够适应轻度污染的空气，但过度污染会伤害动物的防御能力SOD、CAT、GSH-Px在不同的污染程度下有一个最适配比，从而使3种酶在体内构成相互保护的防御系统.     

内毒素对鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠泵的影响及机制

目的观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)钠泵的影响。方法 ATⅡ细胞成功分离纯化后随机分为两组:①对照组(PBS);②LPS组(1μg/mL)药物干预4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基mRNA的表达;免疫组化法检测钠泵α1、β1亚基蛋白的表达;用高效液相法测定细胞ATP、ADP、AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得钠泵的活性。结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1、β1亚基的mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05);酶活性检测结果显示:LPS组钠泵活性较对照组明显增高(P<0.05);免疫组化结果显示:ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基蛋白均有表达,各组亚基蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论内毒素能下调ATⅡ细胞钠泵α1、β1亚基的mRNA表达,应激调节钠泵活性,但对蛋白表达无明显影响,提示钠泵的变化可能与内毒素性肺损伤有关。     

Percoll密度梯度离心法分离大鼠肺Ⅱ型上皮细胞

目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)的改良体外原代培养法.方法 采用循环冲洗、支气管灌洗、胰蛋白酶消化、滤网过滤并用轻比重及重比重Percoll密度梯度离心,分离AT-Ⅱ.原代培养后通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP) 法和电镜鉴定AT-Ⅱ.结果 经AKP染色和电镜鉴定所得的AT-Ⅱ纯度为(80.2±6.3)%,每只大鼠可分离出1×107 AT-Ⅱ.结论 采用Percoll密度梯度离心法能分离出较高纯度的AT-Ⅱ.     

重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌细胞因子的影响.方法 原核表达并纯化重组HBHA,N端缺失HBHA(HBHA-ΔN)、C端缺失HBHA(HBHA-ΔC)三种蛋白,用以刺激A549细胞,并设置阴性对照,观察A549细胞分泌细胞因子的情况.结果 rHBHA蛋白可以显著提高A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ的水平,而HBHA-△N和HBHA-△C蛋白对A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ和IL-10的作用无显著影响.结论 rHBHA能够促进IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ分泌,N端和C端缺失后促进作用减弱.提示HBHA在诱导自然免疫以及抵抗结核菌感染中具有重要作用.     

艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响。结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性;0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12 h后可显著提高细胞存活率(P=0.005<0.01);荧光显微镜下观察发现艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性。结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用;一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一;能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一。     

组蛋白修饰对COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)炎症因子表达是否与组蛋白修饰有关。方法熏烟法建立大鼠COPD模型。取大鼠肺组织进行病理观察,提取AECⅡ进行碱性磷酸酶染色鉴定和电镜鉴定;实时定量PCR检测AECⅡ三种趋化因子:单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、IL-8及巨噬细胞炎性蛋白2α(MIP-2α)的mRNA表达;Westernblot检测组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)蛋白表达;染色质免疫共沉淀(ChIP)检测趋化因子启动子区组蛋白H3、H4乙酰化和H4K9甲基化修饰情况。结果 COPD组IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达较正常对照组分别增加4.48倍、3.14倍、2.83倍;COPD组AECⅡ细胞HDAC2蛋白表达较正常对照组降低(0.25±0.15比0.66±0.15,P0.05),且HDAC2的下降程度与IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达增高程度呈负相关(r值分别为-0.960、-0.914、-0.928,P均0.05)。COPD组趋化因子基因启动子区H3、H4乙酰化水平较正常对照组均升高,H4K9甲基化水平则降低(P均0.05)。结论 COPD模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三种趋化因子基因表达增加,HDAC2介导的组蛋白修饰在COPD炎症反应中发挥重要作用。     

Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应

目的:观察Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)的转染表达及增殖效应.方法:以不同转染强度(50,100,200 MOI)Ad-GFP转染原代培养大鼠ATⅡ细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测转染效率.并以最佳感染强度Ad-HGF转染ATⅡ细胞,ELISA方法检测转染后48, 72 h上清中HGF的表达水平.用MTT法检测表达产物对肺泡上皮细胞的效应.结果:感染强度为100 MOI时,对ATⅡ细胞的转染效率已达89.61%,以100 MOI的Ad-HGF转染6×105细胞后48, 72 h上清中HGF的表达分别为(249.4±1.8) ng和(168.0±26.1)ng,且表达产物对ATⅡ细胞有明显的促增殖作用.结论:Ad-HGF可有效转染ATⅡ细胞并在细胞中表达,表达产物对该细胞有明显的促增殖作用.     

慢性缺氧小鼠心肌酶组织化学分析及超微结构观察

目的 探讨慢性缺氧对心肌酶的含量和眼微结构的改变。方法 ３０只小鼠随机分为３组；正常对照组，吸入１５％低氧混合气组和复方丹参注射组。实验２周后，取新鲜心肌标本，测琥珀酸脱氢酶，三磷酸腺苷酶，乳酸脱氢酶，光镜，电镜观察心肌病理性变化。结果 缺氧组ＳＤＨ，ＡＴＰ酶减少，ＬＤＨ升高，心肌间质水肿，心肌细胞线粒体肿胀，肌丝排列紊乱。     

体外循环血清对培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的研究

目的 探讨体外循环（ＣＰＢ）血清对肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的损伤作用。方法 原代培养大鼠ＡＴ－Ⅱ,并与ＣＰＢ血清共同孵育后观察其形态及生化指标变化和还原型谷胱甘肽（Ｒ－ＧＳＨ）的保护作用。结果 培养液中ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＡＫＰ增加,细胞凋亡率上升,Ｒ－ＧＳＨ能减轻细胞损伤。结论 ＣＰＢ血清能直接损伤ＡＴ－Ⅱ,氧自由基可能是主要原因,这可能是术中肺表面活性物质减少的重要原因。Ｒ－ＧＳＨ在体外能     

吸入石英粉尘对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

对大鼠吸入石英粉尘后肺泡Ⅱ型上皮细胞（Ｔ＿Ⅱ）的变化进行了形态学观察和定量分析。９个月的实验结果表明，石英粉尘导致Ｔ＿Ⅱ增生，且呈双相反应，染尘结束后０～４周、和９个月为两个增生高峰期。Ｔ＿Ⅱ胞浆内板层体（ＬＢ）数量增多，肺泡腔内含大士游离ＬＢ，管样髓磷脂。提示增生Ｔ＿Ⅱ合成和分泌表面活性物质的功能增强。     

肺纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞的影响及相关机制的探讨

目的:探讨肺间质纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达的影响和调控作用机制.方法:28只SD大鼠随机分为平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型,生理盐水组气管内注射等量生理盐水.分别于7,28天各处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组3只及生理盐水组3只提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,平阳霉素组6只提取肺成纤维细胞,分别进行培养.至2种细胞到亚汇合状态时,实验组即:用平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h;对照组即:用生理盐水组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h,然后用半定量RT-PCR法检测肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达量的变化.平阳霉素组及生理盐水组各余1只用作HE染色.结果:(1)实验组7天,28天FSP1mRNA,TGF-βmRNA,HGFmRNA表达均高于对照组(P＜0.01),(2)第7,28天实验组FSP1mRNA,TGF-βmRNA表达无明显差别(P＞0.05),实验组28天HGFmRNA表达高于第7天(P＜0.01).结论:平阳霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞能够促进肺成纤维细胞FSP1mRNA、TGF-βmRNA的表达,能够促进纤维化的进展.     

肺纤维化形成过程中大鼠肺成纤维细胞分泌TGF-β mRNA及HGF mRNA对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的 研究在肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响.方法 用半定量RT-PCR法检测肺成纤维细胞及肺泡Ⅱ型上皮细胞共培养过程中转化生长因子-β(TGF-β)mRNA、肝细胞生长因子(HGF)及肺泡表面活性蛋白A(SP-A)mRNA的表达变化.结果 (1)SP-A mRNA的表达实验组低于对照组(P<0.01);(2)HGF、TGF-β mRNA的表达实验组高于对照组(P<0.01).结论 在肺纤维化的形成过程中,肺成纤维细胞未能促进肺泡Ⅱ型上皮细胞的生长.