芍药苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖的体外抑制作用及其机制研究

目的探讨芍药苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖的体外抑制作用及其作用机制.方法不同浓度芍药苷(3、10、30μmol/L)作用于黑色素瘤细胞A375,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期情况,Western blotting法检测NFκB p65信号通路激活情况及下游靶分子Bax、Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin E的表达.结果与对照组比较,随着给药浓度的增加,芍药苷对黑色素瘤细胞A375抑制作用逐渐增强,30μmol/L作用48 h时抑制作用最高,并使A375细胞周期阻滞在G1期;芍药苷显著抑制NFκB p65、IκBα的磷酸化,下调Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin E的表达,上调Bax表达,差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 芍药苷能抑制人黑色素瘤细胞A375体外增殖,可能是通过NF-κB信号通路发挥作用的.     

MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、迁移的影响.方法 利用细胞培养手段培养人恶性黑色素瘤A375细胞;应用倒置显微镜法观察TH588对细胞形态的影响;采用CCK-8法检测不同浓度TH588(0、4、8、16、32、64μmol/L)对A375细胞的增殖抑制作用;采用集落克隆形成抑制试验观...     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A_(375)细胞的增殖抑制作用

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖抑制作用和抗转移作用 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法　用MTT比色法测定A3 75细胞活力 ,用免疫组化方法分析nm2 3蛋白的表达。结果　As2 O3 与人恶性黑色素瘤细胞株A3 75细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 ,IC50 为 13 0 5 μmol·L-1,用药组 (As2 O3 浓度为 2 μmol·L-1)A3 75细胞中有nm2 3抗肿瘤转移基因的表达 ,而对照组则没有。结论　As2 O3 对恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖有浓度依赖性抑制作用 ,并可诱导体内产生nm2 3蛋白 ,对抑制肿瘤的转移和复发及判断预后有重要意义     

nm23-H1基因靶向调控人肺癌细胞PKA信号通路的实验研究

目的探讨nm-23H1基因靶向调控人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA信号通路的分子机理。方法应用放免法、Westem blot法检测人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pLXSN和转基因细胞株L9981-nm23-H1中的PKA活性、CREB和p-CREB的表达水平。结果L9981-nm-23H1肺癌细胞株PKA活性[1.906±0.034μmol/(min.g)]显著高于L9981[0.441±0.021μmol/(min.g)]和L9981-pLXSN[0.443±0.059μmol/(min.g)]肺癌细胞株(P=0.000);而L9981与L9981-pLXSN肺癌细胞株间PKA活性比较无显著性差异(P=0.991);(2)L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株间CREB表达水平比较无显著性差异(P=0.774);L9981-nm23-H1肺癌细胞株p-CREB表达量显著高于L9981和L9981-pLXSN肺癌细胞株(P=0.000),而L9981与L9981-pLXSN肺癌细胞株间p-CREB表达量比较无显著性差异(P=0.126)。结论(1)nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA信号通路关键激酶的活性和表达量;(2)nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌侵袭转移表型的分子机理可能与其激活PKA信号传导有关。     

Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用

研究红曲代谢产物Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用。用MTT法评价Monascin对A375增殖的抑制作用;PI流式单染检测细胞周期分布;透射电镜观察细胞超微结构变化;以黑色素含量、酪氨酸酶活力和体外迁移能力为指标检验Monascin对A375诱导分化作用。Monascin对A375具有一定的增殖抑制作用,并能将其阻滞在G0/G1期;透射电镜观察到A375核质比变小且细胞器增多;黑色素含量增多,相对酪氨酸酶活力提高,体外迁移能力下降。试验结果表明,Monascin对A375具有较显著的诱导分化作用。     

赖氨匹林对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用

目的 研究赖氨匹林（Aspisol）对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用。方法采用四甲荃偶氮唑蓝（MTr）比色法检测赖氨匹林对A375细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜下观察A375细胞形态学变化,流式细胞仪（FCM）检测不同浓度的赖氨匹林诱导A375细胞的早期凋亡率。结果不同浓度的赖氨匹林对A375细胞均有明显的生长抑制作用,且其作用具有时间和浓度依赖性,差异具有非常显著性（P〈0．01）。不同浓度的赖氨匹林对A375细胞作用24h后,均可诱导其发生早期凋亡,并且呈浓度依赖性,差异具有显著性（P〈0．05）。结论赖氨匹林能抑制A375的增殖,诱导其发生凋亡。     

S100A4和nm23-H1在乳腺癌组织中的表达与临床意义

目的探讨乳腺癌组织中S100A4和nm23-H1的表达及意义。方法应用免疫组化SP法检测115例乳腺癌组织中S100A4、nm23-H1、C-erbB-2、雌激素受体（ER）及孕激素受体（PR）的表达情况,分析其表达与临床病理指标之间的关系。结果S100A4的表达与组织学分级之间差异有统计学意义（P〈0．05）。nm23-HI的表达与淋巴结状况、肿瘤大小、组织学分级和TNM分期之间差异无统计学意义（P〉0．05）。S100A4与nm23-H1的比值与淋巴结状况和TNM分期之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论乳腺癌组织中S100A4与nm23HI的联合表达与肿瘤的进展密切相关,是判断乳腺癌侵袭、预测转移趋势的有价值的指标。     

文冠果壳苷诱导人恶性黑色素瘤A375.S2细胞的凋亡及机制

目的观察文冠果壳苷对人恶性黑色素瘤A375.S2细胞增殖抑制作用及诱导凋亡的机理。方法采用四甲基噻唑蓝法(MTT法)检测化合物对细胞的生长抑制作用,光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化,免疫印迹法(Western blotting)检测p-p38、p38、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65及核转录抑制因子-κB(nuclear factor kappa B inhibitor,I-κB)蛋白表达水平,检测细胞核内NF-κB p65表达水平。结果文冠果壳苷可浓度依赖性地抑制A375.S2细胞增殖,并优于5-氟尿嘧啶(5-FU);10μmol·L-1文冠果壳苷作用于A375.S2细胞,形态学观察发现明显的凋亡小体和核固缩;Western blotting检测发现文冠果壳苷可时间依赖性地降低p-p38、p38、NF-κB p65及I-κB的蛋白表达水平;文冠果壳苷抑制NF-κB p65自细胞浆到细胞核的转位。结论文冠果壳苷可能通过抑制NF-κB和p38的活化诱导人恶性黑色素瘤A375.S2细胞凋亡。     

驱虫斑鸠菊提取物抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的探讨驱虫斑鸠菊提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖以及对其酪氨酸酶活性和黑色素含量的影响。方法四甲基噻唑氮蓝比色法测定对A375细胞抑制作用;显微法观察细胞形态;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果在一定质量浓度范围(1～40mg.L-1)内随着驱虫斑鸠菊提取物质量浓度增加可抑制黑色素瘤细胞的增殖;驱虫斑鸠菊提取物质量浓度小于10mg.L-1,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加的趋势;大于20mg.L-1时,显示一定的细胞毒性作用。结论驱虫斑鸠菊提取物能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,在一定质量浓度范围内(1～40mg.L-1)有浓度依赖关系(P<0.05)。     

nm23-H1基因调控人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性和体外增殖侵袭力的实验研究

目的探讨nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌L9981细胞株PKA活性变化和细胞增殖和体外侵袭力影响。方法应用放免法检测人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981,转基因细胞株L9981-nm23-H1和空载体转染细胞株L9981-pLXSN的PKA的活性,应用MTT法检测L9981,L9981-nm23-H1和L9981-pLXSN细胞株的体外增殖,改良的Boyden小实法检测L9981,L9981-pLXSN,L9981-nm23-H1这3个细胞株细胞体外侵袭力。结果(1)原代细胞株L9981的PKA活性为0.408±0.048(pmol/min/μg),空载体转染细胞株L9981-pLXSN的PKA活性为0.476±0.05(7pmolmin/μg),转基因细胞株L9981-nm23-H1的PKA活性为1.939±0.06(2pmol/min/μg),经F检验,在3种细胞株中PKA活性有显著性差异(P<0.001)两两比较,L9981-nm23-H1的PKA的活性明显高于L9981和L9981-pLXSN细胞株(P<0.001),而L9981和L9981-pLXSN细胞株之间所显示PKA的活性并无统计学差异(P>0.05);(2)L9981细胞株的OD值为1.532±0.893,L9981-pXSN细胞株的OD值为1.435±0.542,L9981-nm23-H1细胞株的OD值为0.456±0.081,经F检验,L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1增殖力有非常显著性差异(P<0.001),两两比较,L9981-nm23-H1细胞增殖力显著低于L9981和L9981-pLXSN细胞株(P<0.001),而L9981和L9981-pLXSN细胞株之间比较无显著性差异(P=0.121<0.05);(3)L9981细胞株穿越ECM胶的细胞数为151.75±3.304,L9981-pLXSN细胞株穿越ECM胶的细胞数为158.75±2.986,L9981-nm23-H1细胞株穿越ECM胶的细胞数为43.5±2.082,经F检验3个细胞株间的体外侵袭力有显著性差异,两两比较,L9981-nm23-H1细胞株体外侵袭力明显低于L9981和L9981-pLXSN细胞株(P<0.001),而L9981和L9981-pLXSN细胞株间比较无显著性差异(P=0.271<0.05)。结论nm23-H1基因可以显著抑制人高转移大细胞肺癌的体外增殖力和侵袭力,显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株的PKA活性信号。     

nm23-H1基因对口腔癌细胞骨架系统影响的实验研究

目的：探讨细胞骨架在nm3-H1基因抑制细胞转移行为和提高化疗敏感性的相关机制。方法：制备高纯度的nm3-H1真核表达质粒后，通过阳离子脂质介导的转染技术，完成转染方法的建立，利用激光共聚焦显微镜完成对细胞骨架的观察。结果：转染后细胞的微丝变得粗大，排列有序。结论：细胞骨架在改变肿瘤细胞黏附能力、运动能力、化疗敏感性方面起到了重要作用。     

COX-2及nm23-H1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的 探讨环氧化酶2(COX-2)和肿瘤转移抑制基因H1(nm23-H1)在结直肠癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化检测COX-2、nm23-H1在62例结直肠癌中的表达.结果 COX-2的高表达与淋巴结转移、Dukes分期和浸润深度有相关性(P＜0.05);nm23-H1的低表达与分化类型、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05).结论 COX-2和nm23-H1的表达与结直肠癌侵袭转移密切相关,联合检测COX-2和nm23-H1有助于评估病情、判断预后和选择适当治疗手段.     

nm23-H1蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中肿瘤转移抑制基因nm23-H1蛋白（nonmetastatic protein 23 homologue 1）的表达,试图阐明nm23-H1蛋白的表达在宫颈癌发生、发展及预后的作用。方法采用免疫组化SP法检测宫颈鳞状上皮癌60例、宫颈上皮内瘤变60例（CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例）、正常宫颈上皮组织20例中nm23-H1蛋白的表达,并分析nm23-H1蛋白的表达与临床病理特征的关系。结果 nm23-H1蛋白在宫颈癌中的表达明显低于正常宫颈组织和宫颈上皮内瘤变CINⅠ及CINⅡ（P〈0.05）,CINⅢ中nm23-H1蛋白阳性表达率明显减少,但与宫颈鳞状上皮癌相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。宫颈鳞状上皮癌中nm23-H1的表达与淋巴结转移及FIGO分期有关（P〈0.05）,与患者年龄、肿瘤的组织病理分级及肿瘤大小无关（P〉0.05）。结论 nm23-H1蛋白的低表达是宫颈癌的一个高危因素,对判断宫颈癌淋巴结转移和估计预后是一项有用的指标。     

宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中PINCH、nm23-H1蛋白的表达及临床意义

目的探讨PINCH蛋白和nm23-H1蛋白在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变（CIN）组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测60例宫颈鳞癌、30例CIN和20例正常宫颈上皮组织中PINCH和nm23-H1蛋白的表达,并结合临床病例特征进行分析。结果 PINCH蛋白在正常宫颈、CIN和宫颈鳞癌间质中的阳性表达率分别为0.0（0/20）、33.3%（10/30）、70.0%（42/60）,呈现逐渐增高的趋势（P〈0.01）;nm23-H1蛋白的阳性表达率分别为95.0%（19/20）、70.0%（21/30）、46.7%（28/60）,呈现逐渐降低的趋势（P〈0.01）。PINCH和nm23-H1的表达与患者的淋巴结转移及FIGO分期有关（P〈0.01）,与患者年龄、肿瘤的组织病理分级及肿瘤大小无关（P〉0.05）。PINCH和nm23-H1在CIN和宫颈鳞癌中表达均有相关性（C值分别为0.697和0.531,P〈0.01）。结论 PINCH蛋白和nm23-H1蛋白可能协同参与了调控宫颈鳞癌的发生、发展过程,并在宫颈鳞癌的转移和淋巴结转移中起一定作用。     

蛋白激酶C在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡中的作用

目的研究蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)在吴茱萸碱(evodiamine)诱导的A375-S2细胞死亡过程中的作用。方法TUNEL法检测吴茱萸碱诱导细胞凋亡的比例。MTT法测定药物对A375-S2细胞的细胞毒作用。Western blotting法分析药物作用后对ERK及其磷酸化蛋白和Bcl-2家族蛋白的影响。结果吴茱萸碱诱导A375-S2细胞的死亡在24 h以前以凋亡为主。PKC抑制剂staurosporine和ERK抑制剂PD98059均能促进吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡。吴茱萸碱能够抑制PKC的活力，下调ERK及其磷酸化蛋白的表达水平，并使Bax/Bcl-2表达比例上升。而staurosporine对吴茱萸碱抑制PKC活力，降低ERK及其磷酸化蛋白和Bcl-2的表达有进一步增强的作用。结论在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡中，PKC位于ERK和Bcl-2的上游发挥其调节作用。     

C-erbB-2和EGFR及nm23-H1在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:探讨C-erbB-2、表皮生长因子受体(EGFR)和nm23-H1在膀胱癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学S-P法检测69例膀胱癌和12例正常膀胱黏膜中C-erbB-2,EGFR和nm23-H1的表达情况。结果:C-erbB-2,EGFR和nm23-H1在膀胱癌中的阳性表达率分别是44.9%,56.5%和60.9%,在正常膀胱黏膜中的阳性表达率分别为0.00%,0.00%和100%,两两比较差异均有显著性(P<0.01),其中C-erbB-2和EGFR的阳性表达率随着膀胱癌病理分级和临床分期的增高而增高,nm23-H1的阳性表达率随着膀胱癌病理分级和临床分期的增高而降低。结论:C-erbB-2,EGFR和nm23-H1的异常表达在膀胱癌的发生及发展过程中起着重要作用。     

肝细胞癌癌旁组织nm23-H1蛋白表达与门静脉转移的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)癌旁组织中nm23-H1表达强度与HCC门静脉转移的关系。方法选择HCC111例,其中门静脉转移、无肝内外转移者各33例,肝外转移45例,另选肝血管瘤(HH)患者30例设为对照,用免疫组化方法检测上述患者癌旁或瘤旁组织的nm23-H1蛋白的表达,采用等级相关分析探讨nm23-H1蛋白表达与门静脉转移之间的关系。结果HCC伴门静脉转移组nm23-H1蛋白表达程度明显低于HCC无肝内外转移组及伴肝外转移组(P<0.05),HCC无肝内外转移组及伴肝外转移组nm23-H1蛋白表达程度明显低于对照组(P<0.05),nm23-H1蛋白表达程度在HCC无肝内外转移组与伴肝外转移组之间无显著性差异(P>0.05)。结论HCC癌旁组织nm23-H1表达程度与门静脉转移有关,nm23-H1表达程度低发生门静脉转移的可能性大。