RGD模体在肿瘤诊断与靶向治疗方面的研究现状

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginyl-glycyl-aspartic acid,RGD)模体是一类含有RGD序列的短肽,有环形和线性两类,可以竞争性结合整合素受体,阻止肿瘤细胞与细胞外基质的黏附,还可以直接诱导肿瘤细胞凋亡,通过阻断整合素-斑点黏附激酶途径,抑制肿瘤细胞黏附、增殖、侵袭、转移。该类肽与整合素结合成为抗肿瘤药物设计的靶点。随着对其分子机制的深入研究,越来越多的含RGD模体的药物被运用于肿瘤的早期诊断和临床抗肿瘤的治疗。     

人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化

目的 构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽（T21RGD）―内含肽―几丁质结合蛋白融合表达载体，实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法 人工设计合成T21RGD肽基因， 经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2，酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导其融合表达，对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析，DTT诱导柱上裂解以获得T21RGD肽。经Trcine-SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定。结果 质粒酶切和测序结果显示，含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50％以上，Trcine-SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符，反相高效液相色谱测定峰纯度达97％。结论 成功构建T21RGD肽融合表达载体，实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化，为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机理奠定基础。     

RGD肽与生物材料的内皮化

生物材料的表面内皮化可以明显改善材料的血液相容性,促进各种生物材料,尤其是心血管移植物的临床应用,种植内皮细胞在生物材料表面的贴附及生长状况是决定内皮化能否成功的关键因素,RGD是许多粘附蛋白所共有的高度保守氨基酸序列,这一序列在介导细胞粘附,迁移及生长方面起重要作用,我们综述了RGD与整合素受体的相互作用,RGD生物活性的影响因素以及它在生物材料内皮化方向的应用。     

肽段在肿瘤治疗应用中的展望

近年来,随着组合化学（Combinatorial Chemistry)的发展,人们确定了许多肿瘤抗原及其优势决定簇,在此基础上设计的以小肽段为核心的肿瘤疫苗及治疗性药物,在体内外实验中取得了极大的成功,有些已经开始应用于临床。     

肽段在肿瘤治疗应用中的展望

近年来 ,随着组合化学 (CombinatorialChemistry)的发展 ,人们确定了许多肿瘤抗原及其优势决定簇。在此基础上设计的以小肽段为核心的肿瘤疫苗及治疗性药物 ,在体内外实验中取得了极大的成功 ,有些已经开始应用于临床。     

003 肽段在肿瘤治疗应用中的展望

近年来,随着组合化学(Combinatorial Chemistry)的发展,人们确定了许多肿瘤抗原及其优势决定簇.在此基础上设计的以小肽段为核心的肿瘤疫苗及治疗性药物,在体内外实验中取得了极大的成功,有些已经开始应用于临床.     

生物活性短肽RGD在骨组织诱导再生中的研究进展

临床上对创伤、感染和肿瘤切除后所造成大范围骨缺损的修复至今未得到有效的解决。在基质材料中的生物活性物质能对其周围组织及长入基质材料中的纤维组织发生诱导作用，使其向骨组织方向生长，从而促进骨缺损区的修复。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列(Arg-Gly-Asp，RGD)是细胞膜整合素受体与细胞外配体相结合的识别位点。在一定条件下。人工合成的RGD序列的可溶性小分子多肽能够竞争性地与细胞表面的整合素结合。将细胞外信息传入细胞内。引起细胞一系列的生理变化。目前，国内外研究报道合成的RGD肽具有诱导成骨细胞的生长。抑制破骨细胞之间、破骨细胞与基质之间的黏附，具有诱导骨再生的能力。本文仅就RGD肽在骨组织诱导再生中的应用及其进展作一简要综述。     

随机肽库技术在肿瘤导向治疗中的应用

目前肿瘤导向治疗的临床效果尚不理想 ,关键的问题在于缺乏高效导向性的载体系统。而用肿瘤治疗中的目标受体从随机肽库中筛选出相应结合肽 ,并对其结构进行分析 ,得到该目标受体的模拟配体 ,并利用其与目标受体有强亲和力的特性可以将药物定向地输送到肿瘤细胞 ,改善治疗的效果。通常应用的随机肽库为噬菌体肽库。噬菌体肽库由于具有表型与基因型的统一 ,可以大量扩增 ,并能用于蛋白质二级结构的研究 ,而且操作方法具有快速、有效、简便等特点 ,从而在医学和生物学的基础理论研究和实际应用中都有非常广泛的用途     

肿瘤特异性转移因子在消化系统肿瘤治疗中的应用

转移因子(transfer factor,TF)最早由Lawrence[1]于1949年发现,作者从对某一特定抗原有明显皮肤反应的供体采集白细胞并制备白细胞抽提液,然后将抽提液注入无皮肤反应或免疫抑制的受试者,而受试者随即出现强烈的皮肤反应,这一实验结果很有力的证明了个体间的全身性和特异性免疫可以发生转移,因此实现这种转移功能的白细胞抽提物被称为转移因子.目前,TF被用于治疗病毒、寄生虫、真菌、自身免疫及恶性失调等引起的疾病.按性质TF可以分为特异性转移因子( specific TF,STF)与非特异性转移因子(non-specific TF,NSTF).肿瘤特异性转移因子(tumor specific transfer factor,TSTF)是指用肿瘤组织作抗原免疫健康动物(如羊、猪、兔等)后,取动物的血液、脾脏和淋巴结组织,采用非特异性TF的常规方法而获得的提取物的小分子生物活性物质[2].相对分子质量(Mr)为3000～5000,对热不稳定,但耐低温,在4℃保存1年仍有稳定的免疫活性[3].     

RGD抗体的研制和其在丝素膜中的应用

本研究应用双功能偶联剂小分子间苯二甲基二异氰酸盐(m—xylylen—diisocyanate，简称XDI)作桥梁，将短肽RGD(GLY—ARG—GLY-ASP—SER—PRO-LYS)粘附生长因子偶联到卵清白蛋白(Ovalbumin，简称OVA)载体上，对偶联物RGD-OVA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶纯化和紫外光谱测定，确定RGD与OVA偶联比为11：1，用偶联物对兔子进行背部小剂量多点免疫注射，诱发出抗RGD抗体，利用得到的兔抗RGD抗体IgG包埋于丝素材料内，并借助抗原抗体的结合力，结合RGD在该丝素膜表面，对这种结合有RGD抗体的丝素膜进行培养血管内皮细胞(Endothelial cell，简称EC)的试验，结果表明，结合有RGD的丝素膜与其对照组相比，细胞数量有显著提高。     

RGD肽表面修饰聚苯乙烯及其细胞相容性研究

目的以聚苯乙烯二维平面为模板研究了蛋白表面修饰技术,构建具有生物活性的生物材料表面。方法采用物理包被法依靠疏水作用在PS表面架构明胶、胶原和RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）多肽的生物活性层。通过光电子能谱（XPS）分析修饰表面的元素含量变化,N元素含量显著提高,说明蛋白分子在表面存在。Bradford方法定量分析明胶、胶原和RGD多肽的表面吸附量。结果XPS证实了表面N原子的引入,存在酰胺键,确定蛋白分子存在于PS表面。结论动态接触角下降显著,证明修饰表面的亲水性得到提高。并在明胶、胶原和RGD多肽修饰表面接种人表皮细胞,对比考察其对细胞行为的影响,提高了细胞的黏附和增殖能力。     

用于肿瘤血管靶向治疗的RGD/tTF融合蛋白的表达及活性鉴定

目的：制备用于肿瘤血管靶向治疗的重组RGD／tTF融合蛋白，并鉴定其生物学活性。方法：利用PCR技术均建RGD与tTF的融合基因，克隆至表达载体pET22b（＋），在E．coliBL21（DE3）中表达，镍亲和层析柱纯化。凝血实验和FX活化实验鉴定融合蛋白中tTF的活性，间接ELISA分析RGD活性。结果：获得序列正确的RGD／tTF／pET22b（＋）重组子，融合蛋白在E．coliBL21（DE3）中高效表达。纯化后的融合蛋白具有活化FX、引起血液凝固的功能，且能与α，β3特异性结合。结论：成功构建RGD／tTF／pET22b（＋）重组子，RGD／tTF融合蛋白具有TF活性且与d，B，特异性结合，为进一步研究其体内特异性诱发肿瘤组织血管栓塞功能创造了条件。     

Synthesis of a novel polyurethane co-polymer containing covalently attached RGD peptide

The synthesis of a novel polyurethane block co-polymer containing a covalently attached, well-oriented RGD (Arg-Gly-Asp) peptide was explored. A poly(tetramethylene oxide) (PTMO)-based polyurethane was synthesized, and a bimolecular nucleophilic substitution reaction was then employed to incorporate ethyl carboxylate groups onto the polymer backbone (i.e. carboxylated polyurethane). Elemental analysis was used to determine the extent of carboxylation. The hexapeptide H-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Tyr-OH was coupled to the carboxylated polyurethane via the formation of an amide bond. The attachment of the peptide was controlled by a protection-deprotection scheme. Nuclear magnetic resonance (NMR) and Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopies were used to monitor the reactions. Sakaguchi assay and amino acid analysis confirmed that the RGD-containing peptide was successfully grafted onto the carboxylated polyurethane. This reaction scheme provides a new route for grafting end-linked, bioactive peptides onto polyurethanes.     

RGD三肽的临床应用进展

整合素是一个异源二聚体组成的膜受体蛋白家族,能特异性识别精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列。整合素在肿瘤细胞和新生血管高表达。利用它们3者之间特殊关系,将RGD作为载体,与放射性示踪剂、抗肿瘤药物以及其他物质结合,使其具有亲肿瘤显像、靶向抗肿瘤治疗、抗感染、抗抑郁和骨骼及神经修复等作用。     

cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞的体外抑制作用及在荷瘤鼠体内分布及显像研究

目的 探讨cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞的体外抑制作用及其在荷B16黑色素瘤细胞小鼠动物模型体内的分布及显像研究.方法 用MTT法检测不同浓度及作用时间cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞体外增殖能力的影响.采用直接标记法标记99 Tcm-c(RGD)2.建立荷B16黑色素瘤株动物模型,待肿瘤体积为1.0 ～ 1.5cm3左右时,分别于30min、1h、2h、3h、4h、5h及6h时,进行荷瘤鼠体内生物分布及动态显像研究.结果 cRGD肽二聚体浓度为500mg/L、作用48h时,对B16黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用.室温下、ρ(SnCl2·2H20)=1 g/L、反应时间为30 min时,99Tcm-c(RGD)2的标记率可达(87.42±3.21)％,标记产物经Sephadex G10分离纯化后放射化学纯度大于95％;静脉注射后30min行小鼠全身SPECT显像,肿瘤部位可见明显显像剂聚集,但肿瘤与周围组织的对比度较低;延迟至6小时肿瘤仍清晰可见,且随时间延迟肿瘤与周围组织的对比度增高,此时肿瘤/血液为2.15±0.24,肿瘤/肌肉为5.07 ±0.03.结论 该结构cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞株具有一定的体外抑制作用,且动物体内肿瘤组织摄取率高,显像清晰,证明其可进一步应用于聚合物多肽靶向药物的研发.     

生物活性短肽RGD在PET表面接枝方法的研究

在高分子材料表面共价引入人工合成的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸三肽(Arg-Gly-Asp peptides，RGD)，以达到让内皮细胞与之特异结合并更加牢固的目的。实验用紫外辐照法将活性基团羧基(-COOH)接枝到聚对苯二甲酸乙二醇酯(Poly(ethylene terephtalate)，PET)膜的表面，将液相合成的RGD三肽耦合接枝到处理过的材料表面，光电子能谱对以羧基为活性基团的接肽反应结果进行分析，光学、电子显微镜观察内皮细胞生长情况以检测接枝短肽的生物活性。内皮细胞生长实验结果表明，成功接枝的RGD序列对材料内皮细胞种植起到了促进作用。本实验成功运用紫外接枝与化学耦合，将生物活性短肽RGD接枝到膜表面，探索了一种新的接枝生物活性短肽的方法。     

循环肿瘤标志物在甲状腺癌临床诊疗中应用的研究进展

目的 总结循环肿瘤标志物应用于甲状腺癌临床诊疗中的研究进展。方法 在中国知网、万方数据库以及PubMed等中英文数据库中,检索2022年7月之前发表的肿瘤标志物与甲状腺癌临床应用的相关文献共568篇,剔除与内容不符、无法获得全文、重复性研究以及较为陈旧的文献,最终纳入63篇文献进行总结和分析。结果 甲状腺癌是临床最常见的内分泌肿瘤,超声引导下细针穿刺细胞学检查（FNAB）是其诊断的金标准,但存在15%~20%的不准确性。近年来,作为一种新型的非侵入性诊断工具,对包括循环肿瘤细胞（CTCs）、细胞游离DNA（cfDNA）/循环肿瘤DNA（ctDNA）、外泌体以及游离的非编码RNAncRNA）等在内的循环肿瘤标志物的检测,在甲状腺乳头状癌和滤泡状癌患者的临床诊疗中发挥了一定的作用,能够在较早期监测到肿瘤进展或复发,从而帮助临床医生制定个体化的治疗方案。然而,关于循环肿瘤标志物与甲状腺髓样癌以及未分化癌的研究仍旧较少,同时ctDNA与非编码RNA（ncRNA）在甲状腺癌临床诊疗中的作用仍不明确,仍需对其分子机制进一步探讨。结论 循环肿瘤标志物检测具有侵袭性小、副作用少、肿瘤异质性代表性强等优势,在甲状腺癌的临床诊疗中具有广泛的应用前景。     

131I-c(RGD)2的药代动力学及急性毒性研究

目的 用131I标记二硫键成环的RGD肽二聚体c(RGD)2,探讨其在裸鼠体内的药代动力学参数、急性毒性反应和死亡情况,评价其应用的安全性.方法 选取5只裸鼠为实验对象,每只经尾静脉注射131I-c(RGD)2(7.4 MBq/200μL),分别于注射后3、6、10、15、30、45、60、120、180及360min断尾取血5μL,测量血液的放射性计数,采用PKSolver软件进行药代动力学分析.另取裸鼠10只随机分为实验组及对照组,实验组每只经尾静脉注射131I-c(RGD)2(7.4 MB/60μL);对照组经尾静脉注射生理盐水60μL,观察注射后72 h内裸鼠的不良反应和死亡情况.结果 血液药-时曲线符合权重系数为1/CC的开放性二房室分布模型,其中分布相半衰期(t1/2α)为15.364 min,消除相半衰期(t1/2β)为123.125 min.注射131I-c(RGD)2后72 h内,裸鼠无不良反应与死亡.结论 c(RGD)2具有理想的药代动力学特点,且无明显毒性作用,这些均有利于其作为新药应用于临床.     

RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化

蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a( )连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。