盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响

探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观察白念珠菌丝形态;透射电镜观察白念珠菌丝细胞壁结构;流式细胞术检测白念珠菌细胞壁β-葡聚糖暴露程度;qRT-PCR法检测白念珠菌丝特异性基因ECE1及β-葡聚糖合酶调控基因FKS1和FKS2的表达。结果显示,盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株的MIC为64~128μg·mL^-1;512μg·mL^-1盐酸小檗碱干预下能抑制白念珠菌落生长,64~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制菌丝代谢,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制白念珠菌丝活力,256~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制形态转化,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能明显损伤细胞壁结构,128~512μg·mL^-1盐酸小檗能促进细胞壁β-葡聚糖暴露,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能下调白念珠菌丝特异性基因ECE12.72倍及β-葡聚糖合成酶调控基因FKS1与FKS2分别3.49,3.26倍。研究表明,一定浓度的盐酸小檗碱可能通过下调白念珠菌丝特异性基因及β-葡聚糖合成酶相关基因的表达,从而破坏白念珠菌细胞壁的结构并促使β-葡聚糖暴露,进而影响整个细胞壁的完整性。     

肉桂醛和柠檬醛对黄曲霉及烟曲霉细胞DNA与RNA的影响

目的研究肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉和烟曲霉细胞DNA、RNA水平的影响,以期探明其抗真菌的作用机制。方法黄曲霉、烟曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养3～6d,将对照组和用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,以对DNA、RNA进行定量和定位观察。结果用药组DNA、RNA水平发生不同变化,出现多核分生孢子。结论肉桂醛、柠檬醛直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成,以至不能完成正常细胞周期,影响分生孢子梗的正常分化,从而抑制真菌生长、繁殖。     

肉桂醛和柠檬醛对烟曲霉细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响

目的研究肉桂醛、柠檬醛对烟曲霉中麦角甾醇生物合成的影响。方法将烟曲霉接种在含有不同质量浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养5 d,刮取平皿上菌苔,称质量、皂化、提取烟曲霉菌中的难皂化脂,高效液相色谱法测定其中的麦角甾醇。结果柠檬醛质量浓度为0.11μg/mL、肉桂醛质量浓度为0.16μg/mL作用于烟曲霉后,麦角甾醇的质量分数显著降低。结论肉桂醛和柠檬醛影响了烟曲霉中麦角甾醇的生物合成。     

四君子汤对烟曲霉菌体外生长的抑制作用

目的 探讨中药方剂四君子汤是否可以抑制体外培养的烟曲霉菌的生长.方法 一定剂量的四君子汤和氟康唑处理的103个烟曲霉菌孢子涂布在沙氏固体培养基培养4 d,计算并比较烟曲霉菌生长形成的菌落数量、菌落大小、镜下计数孢子柄与孢子的数量.结果 与对照组相比,四君子汤和氟康唑可以显著降低烟曲霉菌的菌落数量和菌落大小、抑制孢子柄与孢子的的形成(P<0.05),结果呈现剂量-效应关系.与氟康唑处理组相比,300 μl四君子汤处理的分生孢子形成的菌落数、菌落大小、孢子柄和产生的分生孢子数均显著低于氟康唑处理组(P< 0.05).结论 中药方剂四君子汤可以明显地抑制烟曲霉菌的体外生长,提示四君子汤在治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值.     

四君子汤对烟曲霉菌毒性代谢产物的抑制作用

目的 探讨中药方剂四君子汤对烟曲霉菌合成毒性代谢产物的抑制作用.方法 不同剂量四君子汤处理的5×106烟曲霉菌孢子用DMEM液培养48 h,收集不同组的培养液滤液,计算其不同组培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率;比较抑制50%细胞生长的不同组培养液滤液的稀释度;观察100 μl 0.3%H2O2在沙氏固体培养板上对一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子的抑菌圈大小.结果 四君子汤处理的烟曲霉菌孢子培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率显著高于无药物处理组(P<0.05),抑制50%细胞的药物组孢子培养液滤液的稀释度低于无药物组,结果均呈现剂量-效应关系;100μ10.3%H2O2在沙氏固体培养板上作用一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子所产生抑菌圈直径显著大于无药物处理组(P<0.05),结果呈现剂量一效应关系.结论 中药方剂四君子汤可以抑制烟曲霉菌培养时毒性代谢产物的产生,治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值.     

中药诱导肿瘤细胞凋亡过程中对Bcl-2基因表达的研究

Bcl-2基因抗凋亡作用包括:抗氧化,调节细胞内的Ca2+浓度,调节凋亡信号通路等.Bcl-2与多种肿瘤的关系密切,Bcl-2抑制细胞凋亡,保证肿瘤细胞生存,Bcl-2的表达延长肿瘤细胞的寿命,使肿瘤以较慢速度生长,而其它癌基因引起肿瘤较快生长,这表明Bcl-2对上皮性肿瘤发生发展中凋亡的调控起重要作用,Bcl-2在多种肿瘤中的表达已得到证实[1].基因可抑制多种类型细胞凋亡,在人类很多肿瘤组织中,发现有c-myc基因的扩增或高表达.     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1抗癌作用的研究

目的:研究姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制.方法:应用MTT法、DAPI核染色法和细胞周期分析法,检测姜黄素对Sk-hep-1细胞生长和凋亡的影响,并通过RT-PCR方法检测姜黄素对Sk-hep-1细胞抗凋亡基因(Survivin和Bcl-xL)和耐药基因(DRG2和MDR1)mRNA表达的影响.结果:姜黄素抑制Sk-hep-1细胞增殖呈量效关系.姜黄素处理组肝癌细胞Sk-hep-1,HepG2和Hep3B细胞发生不同程度的凋亡,正常肝细胞Chang's liver无明显凋亡.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞周期发生变化,G_0/G_1或G_2/M期细胞比例增多.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞耐药基因MDR1 mRNA水平显著下降,而抗凋亡基因的表达无明显变化.结论:姜黄素能够抑制Sk-hep-1细胞增殖,并诱导其凋亡,推测可能是通过下调MDR1 mRNA的表达而起作用.     

青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究

目的 研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系 HFL-I细胞株体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据.方法 采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用,用流式细胞术测定细胞凋亡率; RT-PCR法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达.结果 青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖,HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组,Bax mRNA的表达显著高于对照组.结论 青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖,促进HFL-I细胞凋亡.     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用

目的探讨抗癌扶正方(KFP)的抗肝癌作用及机制。方法采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对Bcl-2基因表达的调控作用。结果抗癌扶正方具有良好的抑制肝癌细胞生长作用,尤其以1,10 mg/mL剂量组的效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机理在于下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,促进细胞凋亡的产生。     

论人类同--基因的阴阳相与不同基因阴或阳性的呈现

<内经>认为阴阳是宇宙事物的两相,同属一件事物不可分的属性,"阴--阳-者,一分为二也"[1]. 根据<山海经>[1]、<易经>[2]、<内经>[3]及现代生物科学的相关文献[4-8]如:多功能、促进-或抑制--的阴阳转录子1(YY1)[9-10];iNOS与eNOS(诱导性-与缺陷性--一氧化碳合成酶)的阴或阳性的效应[11];IFNγ的活跃-或沉默--[12];调节精子顶体浓度的高-或低--的双相功能的GABA(A)和GABA(B)受体[13];朊病毒蛋白PrP对金属亲和力的正常-与反常--[14];阿卓糖的二聚物的对抗式的头-与尾--四维堆垛结构[15];(间歇)连接蛋白32(Cx32)基因其-729及-329位与YY1连接为促进作用的正调控-,其-1042到-758序列为负调控--[16];雌激素受体ERα及ERβ存在(致癌-与抗癌--)的阴阳对抗性[17];所以阴--阳-在遗传学上的定义应是:阳--显现,显性,能表达,主基因,正,氧化,促进,活跃,高,大,多,反常,结合,病理性.阴--隐蔽,隐性,不表达,修饰基因,负,还原,抑制,沉默,低,小,少,正常,分解,生理性[18].     

基因真奇妙

人人都有基因说明书 基因决定了一个人的相貌，身高甚至某些疾病，但对人类基因组的测序现在还极其昂贵，非普通人所能企及，《纽约时报》说，如今美国出生的新生儿都要被取血化验，以判断其是否缺乏某些重要的酶，如果未来基因组测序的费用能降低到1000美元，每个新生婴儿出生时或许都会像一台新买的电脑一样，附带一张关于其“基因信息说明”的DVD光盘。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌相关耐药基因及耐消毒剂基因qacA的检测

目的对本院临床分离的多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因存在状况进行检测和分析,为避免多药耐药MRSA的流行提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测45株MRSA中耐消毒剂基因(qacA)、β-内酰胺类耐药相关基因(mecA)、四环素耐药相关基因(tetM)、红霉素耐药相关基因(ermA/B/C)。结果45株MRSA中,qacA、mecAt、etMe、rm基因PCR扩增均阳性,阳性率为40%(18/45)、100%(45/45)、58%(26/45)、73%(33/45)。结论本院临床分离的多重耐药MRSA中qacA、mecAt、etM和erm基因携带率均很高,应引起医院感染监控部门高度重视,合理使用抗生素和消毒剂,避免多重耐药MRSA的进一步流行。     

基因诊断的进展

基因诊断即DNA诊断或分子遗传学诊断，是指利用标本中的DNA或RNA作为检测对象进行疾病诊断的方法。随着现代分子生物学研究的不断深入，人们对疾病的认识也从传统的表型诊断进入到基因诊断。基因诊断经过近10^＋a的发展，现在已经广泛应用于各种疾病的诊断和治疗，但其是现代检验医学非常重要、非常有前景的一种检测手段。现将其临床应用情况综述如下。     

基因疗法的历程及其思考

1引言 21世纪是生命科学的世纪,生命科学将处于学术的前沿位置,其中基因研究正成为分子生物学研究中医学高科技的突破点.伴随纳米技术(NanoST)的诞生则更标志着人类科学技术进入一个高新时代.纳米(nm)是一种长度计量单位,20nm相当于一根头发丝直径的1/3000.纳米科技是能在0.1nm至100nm尺度上利用扫描探针显微镜(SPM)研究和利用原子、分子的结构、特征及相互作用的高新科技,使科学家们终于能在原子、分子水平上认识基因.为了最终战胜疾病,科学家们根据遗传学原理,采用分子生物学技术,将改造后的基因植入人体,以替代或阻断异常基因的功能,以纠正基因结构和功能异常的治疗方法叫基因疗法.回顾基因治疗的发展历程,深刻认识其中的辩证关系,探析人类基因疗法中存在的问题至关重要.     

基因组学对中医证的研究启示

基因组学的发展为中医学的研究带来了新的思路 ,如何进行新的探索是每个中医学者值得思考的问题。可以运用高通量的基因分析方法进行证的遗传学基础研究以及基因表达差异研究等。树立模式生物体和比较基因组学有助于从整体上阐明证的实质。     

基因芯片技术分析SLE证候基因表达的初步研究

目的　用表达谱基因芯片筛选SLE差异基因 ,比较不同证型的基因表达的改变。方法　各组均采集静脉血 5mL ,肝素抗凝备用。提取mRNA后等量混合 ,作基因芯片检测。结果　共发现了涉及细胞因子及受体、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成、离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白、DNA和RNA结合、转录蛋白、细胞的外基质成分等 16大类 5 80条基因有显著差异表达 ;热毒炽盛型和阴虚内热型SLE大部分基因 ,特别是代谢相关基因表达具有一致性。结论　SLE的发生是由多基因共同作用的结果 ,基因表达与证型的内在联系应在基因鉴定的基础上做进一步探讨     

刺五加钙调蛋白基因的克隆及内生真菌对其表达的影响

目的:克隆刺五加的钙调蛋白(calmodulin,CaM)基因,并分析内生真菌对其表达的影响。方法:采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加CaM基因的全长cDNA序列。通过RT-PCR法检测可显著提高刺五加皂苷含量的内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对CaM表达的影响。结果:刺五加CaM基因的cDNA全长为856 bp,开放阅读框长450 bp,编码149个氨基酸的蛋白,与人参Panax ginseng和胡萝卜Daucus carota等物种的CaM同源性均高达100%。RT-PCR的结果显示,内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量(P<0.05),最大表达量出现在菌株P109-4回接90 d时,达对照的2.96倍。结论:首次克隆并报道了刺五加CaM的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷含量的机制奠定了基础。     

Effect of electro-acupuncture on gene expression in heart of rats with stress-induced pre-hypertension based on gene chip technology

OBJECTIVE:To explore electro-acupuncture's(EA's)effect on gene expression in heart of rats with stress-induced pre-hypertension and try to reveal its biological mechanism based on gene chip technology.METHODS:Twenty-seven Wistar male rats were randomly divided into 3 groups.The stress-induced hypertensive rat model was prepared by electric foot-shocks combined with generated noise.Molding cycle lasted for 14 days and EA intervene was applied on rats in model + EA group during model preparation.Rat Gene 2.0 Sense Target Array technology was used for the determination of gene expression profiles and the screened key genes were verified by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) method.RESULTS:Compared with blank control group,390 genes were changed in model group;compared with model control group,330 genes were changed in model + EA group.Significance analysis of gene function showed that the differentially expressed genes are those involved in biological process,molecular function and cellular components.RT-PCR result of the screened key genes is consistent with that of gene chip test.CONCLUTION:EA could significantly lower blood pressure of stress-induced pre-hypertension rats and affect its gene expression profile in heart.Genes that related to the contraction of vascular smooth muscle may be involved in EA's anti-hypertensive mechanism.     

阳离子聚合物在基因给药中的应用

 目的　介绍阳离子聚合物在基因给药系统中的应用研究进展。方法　总结近年文献 ,从阳离子聚合物的结构和种类、与DNA形成复合物的理化性质、介导基因转染的特点及入胞机制等方面进行分析和综述。结果　阳离子聚合物的结构具有较大的可变性 ,可以通过结构改造和配体修饰等手段来改变Polyplexes的理化性质 ,提高稳定性和转染效率。 结论　阳离子聚合物是一种新型的非病毒类基因传递系统 ,在基因治疗领域中有广阔的应用前景。