大肠杆菌不耐热肠毒素的粘膜免疫机理

大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）是由Ａ、Ｂ两种亚单位组成的ＡＢ５型蛋白，其中Ａ亚单位具有ＡＤＰ－核糖基化活性，Ｂ亚单位具有与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂结合的作用。它能引起人和猪等动物的腹泻。另外，它还是强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂。了解其粘膜免疫机理，对于发展ＥＴＥＣ菌苗和粘膜免疫佐剂具有重要意义。本文分别从ＬＴ的粘膜免疫原性和佐剂效应两方面对其粘膜免疫机理作一讨论。     

大肠不耐热肠毒素B亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选

目的通过对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位相互作用蛋白的分析,探讨LTB佐剂活性的分子机制。方法纯化的LTB蛋白和生理盐水分别处理RAW 264.7细胞,pulldown实验分离与LTB有相互作用的蛋白分子,质谱鉴定这些相互作用蛋白;免疫荧光和Western blot分析验证与LTB相互作用蛋白在细胞内的相互作用。结果通过质谱鉴定了25种可能与LTB存在相互作用的蛋白分子,并构建了其相互作用网络图,筛选出可能与LTB免疫调节作用相关的蛋白分子;免疫荧光结果显示神经节苷脂能阻断LTB进入RAW 264.7细胞内,LTB在细胞内与GM130存在相互作用,而Vimentin在生理状态下与LTB不存在相互作用;LTB处理RAW 264.7细胞12 h后,β-actin表达上调,Hspd1表达无变化。结论 LTB佐剂活性的发挥是通过与免疫细胞表面GM1结合,引起内吞,并以小泡的形式到达高尔基体,通过高尔基体的加工。最终通过与Jup结合进而作用于TCF/LEF,引起Bcl-2、IL-6、Runx3等基因表达的变化,发挥促进T细胞和B细胞的增殖分化及活化、分泌细胞因子及免疫球蛋白的作用。     

产毒性大肠杆菌不耐热和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的：用基因工程方法克隆产毒性大肠杆菌（ETEC）不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）基因,以制备检测ETEC的单克隆抗体.方法：利用PCR技术扩增LT和ST基因并将它们插入T-easy载体中,采用全自动测序仪进行核苷酸序列分析.结果：DNA序列分析表明,克隆的ETEC-LT-B DNA序列与GenBank公布序列比较在17、69、101、102位点有碱基变异,同源性98.9%;ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致.结论：成功获得正确的ETEC的LT和ST基因,为其重组表达及后续研究奠定了实验基础.     

卵黄LT抗毒素亲和层析纯化大肠杆菌不耐热肠毒素

大肠杆菌不耐热毒素 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｈｅａｔ -ｌａｂｉｌｅｅｎｔｅｒａｔｏｘｉｎｔｏｘｉｎ ,ＬＴ)是产毒性大肠杆菌 (ＥＴＥＣ)感染人畜引起急性腹泻的主要毒素之一 ,关于它的提纯方法有不少报道[1-3 ] ,一般采用沉淀、超滤、浓缩、凝胶层析 ,离子交换层析及超速离心等多种技术联合使用。本文采用ＬＴ免疫母鸡所产蛋的卵黄中提取的抗ＬＴ抗体作亲和层析柱 ,纯化大肠杆菌不耐热肠毒素ＬＴ ,方法简便、纯度高 ,生物学活性完好。1　材料和方法1 1　材料1 1 1　试剂　ｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢ .ｓｕｌｆａｔｅ(日本一制药株式…     

产毒性大肠杆菌不耐热和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的:用基因工程方法克隆产毒性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)基因,以制备检测ETEC的单克隆抗体.方法:利用PCR技术扩增LT和ST基因并将它们插入T-easy载体中,采用全自动测序仪进行核苷酸序列分析.结果:DNA序列分析表明,克隆的ETEC-LT-B DNA序列与GenBank公布序列比较在17、69、101、102位点有碱基变异,同源性98.9%;ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致.结论:成功获得正确的ETEC的LT和ST基因,为其重组表达及后续研究奠定了实验基础.     

酶免疫法(ELISA)快速检测大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)

<正> 产毒大肠杆菌(ETEC)是致婴幼儿腹泻的重要病原菌,在小儿腹泻病原中检出率高达26.5％。ETEC产生不耐热(LT)和耐热性(ST)两种肠毒素。检测LT有动物试验、细胞培养和免疫血清学方法,其中多数方法需要特殊的仪器设备和试验动物,难以在基层医疗单位普遍推广使用。我们用双抗体夹心ELISA法对403株大肠杆菌和30     

流感疫苗黏膜佐剂研究进展

当前流感疫苗主要为肌内注射灭活疫苗和滴鼻减毒活疫苗.对于预防呼吸道传播的流感,抗原特异性黏膜免疫应答非常重要.现有资料显示,两种疫苗都存在不可避免的局限性,为解决这个问题,需要对黏膜佐剂流感疫苗进行深入的研究.此文对进入临床试验的流感疫苗黏膜佐剂进行综述.     

基因工程大肠杆菌肠毒素菌苗研究进展

在传染性腹泻中产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的作用已引起人们的高度重视。DNA重组技术的发展,为研制大肠杆菌肠毒素基因工程菌苗提供了新途径。本文叙述了大肠杆菌肠毒素的结构及其基因分析,介绍了基因工程菌苗的研究近况。     

强效佐剂研究进展

许多佐剂具有炎症特性,缺乏特异性,并且具有毒性,因而其应用受到了限制.近年来,随着免疫学的发展,出现了大量潜在的新型佐剂,它们能以更加可控和特异的方式调节免疫应答,这将对现行及今后的疫苗策略产生重要影响.此文对于能靶向细胞、受体或信号通路等特定免疫组分的候选佐剂做一综述.     

细胞因子佐剂在流感疫苗中的应用研究进展

细胞因子是一大类可溶性的小分子多肽或蛋白质,成员包括IFN、生长因子、IL和趋化因子等。它们都是体内重要的免疫调节分子,参与固有免疫和适应性免疫的激活和调节,因而作为内源性佐剂有很大的应用前景,近年一直是研究热点。此文就细胞因子佐剂在流感疫苗领域应用的研究进展做一综述。     

CpG DNA佐剂研究进展

CpG DNA是含有非甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸,通过Toll样受体9(TLR9)激活树突状细胞(DC)和B细胞产生免疫应答.CpG DNA可以促进专职抗原呈递细胞有效地呈递抗原,从而增强疫苗的特异性免疫应答.目前使用CpG DNA佐剂的疫苗免疫后能维持长期免疫,具有明显的全身和黏膜免疫效果.临床前和临床试验表明,CpGDNA佐剂安全有效,能够提高传染病和肿瘤疫苗的效能,增强疫苗的免疫原性.     

CD40配体及其应用的研究进展

CD40配体是肿瘤坏死因子超家族中的一员,主要活化T细胞表面的共刺激分子,特别是CD4＋T细胞.CD40配体通过与其受体CD40的相互作用,在诱导机体产生免疫应答中起重要作用.此文就CD40L配体的结构和功能以及在病毒DNA疫苗和肿瘤治疗中的应用作一综述.     

菌影在蛋白亚单位疫苗和DNA疫苗递送中的应用

菌影（bacterialghost,BG）是由噬菌体ФX174E基因表达蛋白介导革兰阴性菌裂解所形成的空胞,无胞质内容物,但保留了天然的胞壁结构。由于BG具有颗粒特性并含有天然表面抗原组分,因此易于被抗原呈递细胞识别并激发体液和细胞免疫应答。BG可负载外源蛋白和DNA,并可通过各种免疫途径进行接种。因此,BG是一种有潜力的疫苗递送系统。     

小分子多肽类佐剂最新研究进展

免疫佐剂是指与抗原一起或先于抗原注入机体后,可增强机体对该抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。最近发现,某些氨基酸残基数小于50的小分子多肽具有增强机体免疫活性的能力。这些小分子多肽类佐剂因其安全性好、生物相容性好、易合成、纯度高、制备成本低等优点逐渐引起人们的关注。此文综述了小分子多肽类佐剂疫苗的研究现状,并对小分子多肽类佐剂的发展未来作了展望。     

免疫增强剂在儿童呼吸系统疾病中的应用分析

目的：分析免疫增强剂在儿童呼吸系统疾病中的应用情况。方法对2012—2013年广州市妇女儿童医疗中心呼吸内科应用免疫增强剂的销售金额、用药频度（ DDDS ）、日用药金额（ DDC ）进行统计分析。结果免疫增强剂的用药金额增长幅度比较大;从用药金额和DDDS看来,匹多莫德稳居第一位;用药金额排序和DDDS的排序两年没有明显变化。结论免疫增强剂用药基本合理。     

沙眼衣原体疫苗佐剂研究进展

沙眼衣原体是感染性致盲和细菌性性传播疾病的主要病原体.接种疫苗是预防和控制沙眼衣原体感染最经济有效的途径.蛋白或多肽疫苗、DNA疫苗和树突状细胞疫苗是具有应用前景的三类沙眼衣原体疫苗.与传统灭活疫苗相比,这三类疫苗往往存在免疫原性弱等缺陷,急需发展新型免疫佐剂来增强其免疫效果,此文对这三类沙眼衣原体疫苗佐剂的研究进展作一综述.