皮质发育障碍模型鼠脑皮质、海马光镜体视学研究

目的:主要探寻弥漫性皮质发育障碍(Diffuse cortical dysplasias,DCD)大鼠大脑半球、海马的体积变化和皮质下异位结节中神经元的形态、数量,探讨DCD所致难治性癫痫(Intractable epilepsy,IE)的发生机制。方法:建立X射线照射诱导的皮质下异位结节大鼠DCD模型,使用组织病理学和体视学技术观察DCD鼠大脑半球、海马的体积变化和皮质下异位结节中神经元的形态、数量等。结果:从出生到成年后DCD大鼠体重平均减少19%(P>0.05)。出生时DCD鼠脑质重较正常,从7 d～31周时仅平均为正常对照组的57%(P<0.05)。出生时DCD鼠脑体积正常,P7以后各时期DCD鼠脑体积平均减少36%(P<0.05)。虽然DCD鼠脑皮质体积也平均减少19%,并随着年龄的增加体积减少越明显,但无显著差异(P>0.05)。DCD鼠从P7以后海马体积平均减少39%(P<0.05),且CA1区体积也随龄增加而平均减少32%,但仅P56和P84与同龄对照组比较明显减少38%和36%(P<0.05)。皮质/大脑半球、海马/大脑半球和CA1/海马的体积分数各年龄组平均减少20%、21%和27%,但仅P56和P84的CA1/海马明显减少37%和35%(P<0.05)。各龄DCD组皮质Ⅰ层、海马CA2区、CA3区、门区及齿状回区体积与对照组比较无统计学意义。DCD组皮质下白质中的异位结节与正常对照组或母鼠组皮质下白质中神经元数密度、细胞数密度、神经元百分比比较增加99、121倍和64倍,有显著统计学意义(P<0.05),神经元细胞核费莱特直径Feret’s diameter的平均水平比较无统计学意义。DCD鼠大脑、海马体积减小主要是冠状位的缩短。DCD大鼠皮质第Ⅰ层异位结节、皮质下异位结节和海马异位结节结构及细胞特征比较与皮质Ⅱ～Ⅲ层皮质结节相似。结论:DCD鼠皮质第Ⅰ层、皮质下白质和海马异位结节未迁移到皮质Ⅱ～Ⅲ层。生物体视学方法能检测大鼠大脑的精确病理学构成,是一种很好的研究方法。     

糖复康对粮尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1表达的影响

目的研究糖复康对糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响.方法以链脲佐菌素尾静脉注入法制作糖尿病大鼠模型.将成模大鼠分为模型组、糖复康低剂量组、糖复康高剂量组、苯那普利组,并设正常对照组.检测指标有尿蛋白排泄率(UTP)、肾皮质蛋白质非酶糖化终产物(AGEs)、TGFβ1、Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)、纤维连接蛋白(FN).结果糖复康可下调UTP,与苯那普利作用相似,与模型组比较差异显著(P＜0.01);糖复康下调糖尿病大鼠肾皮质AGEs表达而苯那普利无此作用;糖复康也可降低肾皮质TGFβ1表达,减轻Ⅳ-C、FN的聚积.结论糖复康下调TGFβ1可能是其治疗糖尿病的机制之一.     

转化生长因子-β1及其受体在大肠癌的表达及其意义

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TβRⅡ在大肠癌发生发展过程中的作用.方法采用免疫组化SP法从蛋白水平分析TGF-β1、TβRⅡ在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达情况.结果 TGF-β1蛋白阳性表达率在腺瘤组织为28.6%,大肠癌组织中为57.1%(P＜0.05);TβRⅡ在大肠癌组织中的表达率为51.8%,低于腺瘤组织(90.5%)(P＜0.01);TGF-β1、TβRⅡ表达的改变与大肠癌浸润深度、淋巴结转移相关(P＜0.05或P＜0.001).结论 TGF-β1的过度表达与大肠癌侵袭转移演进密切相关;TβRⅡ的失表达不仅有助于提高细胞对TGF-β1的生长抵抗,也增强了大肠癌的侵袭性.     

转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子在肾小球纤维化病变中的表达

目的探讨转化生长因子β     

转化生长因子-β2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究

目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用。方法组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;q RT-PCR及Western blot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况。结果免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性。TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和Col-Ⅰ表达量显著增加,呈典型活化状态;q RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β2可诱导PSCs活化及上皮间质转化。     

转化生长因子β1在肾病大鼠的表达及辛伐他汀对其表达的影响

目的:观察转化生长因子B1(Transforming gowth factor-β11TGF-β1)在阿霉素肾病(Doxorubicin.induced nephropathy DIN)大鼠疾病早期的表达及辛伐他汀对TGF-β1表达的影响。方法:将100只6周龄雄性sD大鼠随机分为正常组、肾病组和辛伐他汀治疗组3组,第7、21、42天检测各组大鼠胆固醇、甘油三酯,24小时尿蛋白定量、尿TGF-β1以及肾组织中TGF-β1。结果:(1)、21天辛伐他汀组与肾病组比较各项检查均无显著差异(P>0.05);第42天辛伐他汀组尿蛋白低于肾病组(P<0.05),有显著差异;尿TGF-β1、肾组织TGF-β1、胆固醇、甘油三酯有非常显著差异(P<0.01);(2)、肾病组肾组织TGF-β1与尿蛋白、尿TGF-β1成正相关。结论:TGF-β1与MCNS尿蛋白的发生有关;辛伐他汀可降低血脂及尿蛋白,降低TGF-β1的表达,减轻肾脏损害,延缓疾病进展。     

皮质发育障碍模型大鼠海马区阳离子-氯离子转运体基因表达变化的研究

目的探讨阳离子-氯离子转运体NKCCl（内向Na^＋,K^＋-2Cl^-协同运输）、KCC2（外向K^＋-Cl^-协同运输）mRNA在皮质发育障碍致痫机制中的作用。方法在SD大鼠孕17d腹腔内注入卡莫司汀（BCNU）制作皮质发育障碍模型;Nissl染色观察P60 d仔鼠病理变化;P60 d用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测两组雄性仔鼠海马区NKCC1、KCC2 mRNA的表达。结果Nissl染色显示海马区域异位细胞异常聚集。实验组海马区NKCC 1mRNA表达明显上调（NKCC1／肌动蛋白的比值,实验组0．70±0．13、对照组0．48±0．09,P〈0．01）,KCC2 mRNA表达明显下调（KCC2／肌动蛋白的比值,实验组0．54±0．10、对照组0．81±0．15,P〈0．01）。结论NKCC1 mRNAE调和KCC2 mRNA下调的共同作用可能与皮质发育障碍致痫密切相关。     

单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子β1及结缔组织生长因子在2型糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达

目的观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)在链脲佐菌素(STZ)诱发的2型糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达。方法将35只SD雄性大鼠随机分为对照组14只和糖尿病肾病组21只。糖尿病肾病组给予高脂饮食,产生胰岛素抵抗后一次性腹腔注射STZ,35 mg/kg;对照组给予常规饲料,腹腔注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。采用免疫组织化学法检测两组大鼠肾组织3种因子的表达。结果 MCP-1、TGF-β1、CTGF在STZ诱导的2型糖尿病肾病大鼠肾组织中(主要在肾小管)有较强的表达,糖尿病肾病组大鼠3种因子的平均吸光度分别为(0.29±0.04)、(0.20±0.02)、(0.20±0.02),对照组大鼠分别为(0.21±0.02)、(0.17±0.01)、(0.16±0.02),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MCP-1、TGF-β1、CTGF在STZ诱导的2型糖尿病肾病大鼠肾组织中表达增强,参与了糖尿病肾病早期的发病。     

转化生长因子TGF-β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的研究转化生长因子TGF-β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义.方法通过免疫组织化学SABC法,用抗TGF-β1抗体检测77例卵巢上皮性肿瘤(其中良性21例,交界性7例,恶性49例)中TGF-β1的表达及定位,并以正常卵巢组织14例作对照.结果正常卵巢组织和良性肿瘤组织中TGF-β1表达明显高于交界性和恶性肿瘤组织;TGF-β1的表达,粘液性癌高于浆液性癌,病理分级1级高于3级,临床分期Ⅰ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期(均P<0.05).结论TGF-β1在卵巢上皮性癌的发生发展过程中起着一定作用;TGF-β1可能与卵巢上皮性癌的预后有关.     

PRK术后转化生长因子β1 mRNA表达的实验研究

目的探讨准分子激光角膜切削术(PRK)后转化生长因子β1 (TGF-β1)在角膜伤口愈合和角膜雾状混浊发病机制中的作用.方法将24只新西兰大白兔(24只眼)随机分为正常组(n=4)和手术组(n=20).手术组每只左眼行PRK术,术中采用准分子激光器,角膜中央激光去上皮,然后按-10.00 D近视进行切削,分别于术后第7d,14d,28d和3月于裂隙灯下观察记录角膜haze的变化并处死动物,将角膜组织制成石蜡切片,应用原位杂交技术检测角膜组织中TGF-β1mRNA的表达.结果①从术后第7 d开始,术眼均不同程度地发生了角膜haze,严重者可达3级,haze高峰约在术后第28 d.②正常角膜上皮中TGF-β1 mRNA有低水平表达,PRK术后第7d,14d和28d,角膜上皮TGF-β1mRNA表达明显增高,术后3月已开始降低;正常组角膜基质中未检测出TGF-β1mRNA,术后第7d,14d和28d,角膜基质中TGF-β1mRNA表达明显增高,术后3月己开始降低. 结论TGF-β1可能参与了PRK术后的伤口愈合,它可能通过促进角膜基质细胞的增殖和细胞外基质的合成而促进角膜haze的发生.     

转化生长因子β1基因转染人肝癌细胞及其对MMP-2，9表达的影响

目的通过对人肝癌细胞株(SMMC-7721)转染TGF-β1基因,观察该细胞MMP-2,9表达的变化。方法用电穿孔法进行基因转染,并经Westernblot,Northernblot法作鉴定,后分别应用Northernblot,Westernblot法观察该细胞株表达MMP-2,9mRNA和MMP-2蛋白的变化。结果经转染TGF-β1基因的细胞株MMP-2mRNA和蛋白表达均高于对照组,但MMP-9mRNA表达则没有变化。结论TGF-β1可促进肝癌细胞MMP-2表达,表明TGF-β1可能在肝癌发生浸润和转移过程中也发挥重要作用。     

转化生长因子-β1在多柔比星致大鼠心肌细胞凋亡中的促进作用

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在多柔比星诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:取出生1～2d的SD大鼠心肌细胞进行体外分离及纯化,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)免疫化学染色法鉴定细胞纯度。将培养第3天的心肌细胞随机分为对照组和不同浓度(0.5,1,2μmol/L)多柔比星处理组,同时对各浓度组的不同时间点(4,12,24,48,72 h)进行检测。用MTT法检测心肌细胞存活率,流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测心肌细胞上清TGF-β1蛋白浓度。结果:原代分离培养第3天的心肌细胞纯度可达90%。多柔比星在0.5～2μmol/L浓度范围内,随着处理时间延长,心肌细胞存活率下降,呈剂量和时间依赖性;2μmol/L多柔比星可诱导心肌细胞凋亡,在4～48 h内细胞凋亡率不断增加,且心肌细胞TGF-β1蛋白表达量也逐渐增加,与凋亡率呈正相关。结论:TGF-β1可能在多柔比星诱导的大鼠心肌细胞凋亡中起促进作用。     

糖尿病大鼠肾脏蛋白聚糖Ⅱ和转化生长因子-β1mRNA的动态变化

目的了解糖尿病大鼠肾皮质中蛋白聚糖Ⅱ(PGⅡ)mRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA随时间的变化及相互关系.方法用链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病模型,在造模成功后第3、7、14、30、60、90天分别用免疫组化法检测糖尿病组和对照组肾脏Ⅳ型胶原分布,半定量RT-PCR法检测肾皮质PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA的含量.结果与对照组相比,糖尿病组肾脏Ⅳ型胶原含量增加(除第3、7天,其余时点均P<0.05),TGF-β1mRNA从第7天起升高(P<0.05),PGⅡmRNA后期升高(第60天P<0.05;第90天P=0.01).PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA呈正相关关系(r=0.7,P<0.01).结论STZ诱导的糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1mRNA和PGⅡmRNA先后升高,TGF-β1mRNA可能是引起PGⅡmRNA升高的原因之一.     

TGFβ1对人血管内皮细胞整合素β3及粘着斑激酶表达的影响

目的　观察转化生长因子β     

转化生长因子β1及白介素-1β对终板软骨细胞的作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素-1β(IL-1β)在终板软骨细胞中的表达,探讨椎间盘退变的发病机制。方法应用免疫组化SP染色法检测TGF-β1及IL-1β在20例颈椎病及20例非颈椎病椎体软骨终板中的表达,并对其阳性表达结果进行比较。结果颈椎病组TGF-β1及IL-1β的阳性率分别为(32.907 6±3.076 4)%、(51.520 7±2.192 5)%,与非颈椎病终板软骨细胞TGF-β1及IL-1β表达的阳性率(42.481 6±2.061 7)%、(33.918 5±3.320 4)%相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1及IL-1β参与了椎间盘退变的形成和发展,在椎间盘退变的发病中可能起重要的作用。     

老年核性及皮质性白内障晶状体上皮细胞中TGF-β2的表达

目的比较老年核性及皮质性白内障晶状体上皮细胞中转化生长因子β2(TGF-β2)mRNA的表达有无差异,结合两种类型白内障晶状体上皮细胞的增殖状态,探讨其发病机理.方法将老年核性与皮质性白内障的患者分为两组,每组40例(男、女比例1∶1),于白内障超声乳化术中截取其前囊膜(含晶状体上皮细胞),用RT-PCR的方法检测出每组晶状体上皮细胞中TGF-β2 mRNA的水平,两组间u检验作统计学分析.结果老年核性白内障组晶状体上皮细胞中TGF-β2mRNA的水平低于老年皮质性白内障组(P<0.01).结论TGF-β2通过调节晶状体上皮细胞增殖状态,从而在白内障发生过程中起重要作用.老年核性白内障的发生与晶状体上皮细胞增殖有关,而皮质性白内障的发生与晶状体上皮细胞的退行性变有关.     

转化生长因子β1基因多态性与大肠腺瘤的相关性研究

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因-509C/T、+869T/C多态性与大肠腺瘤的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,检测82例大肠腺瘤患者以及102例正常对照者TGF-β1基因-509C/T、+869T/C多态性,并分析该基因多态性与大肠腺瘤临床病理特征之间的关系。结果 TGF-β1-509C/T、+869T/C等位基因频率及基因型频率在大肠腺瘤组和对照组的总体分布差异无统计学意义。将大肠腺瘤患者按性别分组后,大肠腺瘤女性患者与男性比较,-509TT基因型频率有增高趋势(30.3%vs14.3%,P=0.079,OR=2.609,95%CI:0.876~7.771),但差异无统计学意义。结论 TGF-β1-509C/T多态性及+869T/C多态性与大肠腺瘤易感性无关。     

转化生长因子β1表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及预后的关系

①目的探讨转化生长因子β     

转化生长因子β1和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义。方法选取2008年3月—2011年4月入住我院并接受治疗的肝癌患者54例,采用原位杂交显色法(IHCABC法)分析TGF-β1和Smad4蛋白在肝癌组织中表达和半定量情况。结果肝癌组织中Smad4蛋白高表达率(38.9%)低于癌旁组织(46.3%),差异有统计学意义(χ2=16.59,P=0.01)。肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在男女间差异无统计学意义(P>0.05);以45岁为界,肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在不同年龄间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在不同病理分期间比较,差异亦均有统计学意义(P<0.05),且随着病理分期增加,TGF-β1和Smad4蛋白高表达率升高。结论肝癌组织中Smad4蛋白高表达率低于癌旁组织,TGF-β1和Smad4蛋白高表达与患者性别无关,而与病理分期和年龄增长(≥45岁)有关。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β1的影响

目的研究黄芪多糖(APs)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾功能和肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)含量及其表达的影响.方法STZ按55 mg/kg一次腹腔注射以制备糖尿病动物模型,糖尿病大鼠分为糖尿病未治疗组(DM-C)、APS治疗组(DM-APS)和胰岛素治疗组(DM-INS),另设正常对照组(C),实验持续9周.结果DM-APS组尿微量白蛋白排泄率(UAER)、内生肌酐清除率(Ccr)、肾重/体重低于DM-C组(P＜0.05),类似于DM-INS组.DM-APS组肾组织内TGF-β1的含量低于DM-C组(P＜0.05),其表达也低于DM-C组(P＜0.01).结论APS能通过下调糖尿病大鼠肾组织内TGF-β1的蛋白含量及其mRNA的过度表达,在一定程度上减轻肾脏的病变.