背根神经节Nav1.8磷酸化在大鼠糖尿病痛性周围神经病变中的作用

目的 本研究采用射频热凝毁损腰交感神经节,探讨背根神经节（DRG）Nav1．8磷酸化在大鼠糖尿病痛性周围神经病变中的作用。方法 采用腹腔注射链尿佐菌素诱导糖尿病痛性周围神经病变大鼠模型,取造模成功的大鼠20只,随机分为糖尿病对照组（D组）及交感神经节射频热凝组（R组）,每组10只,另取10只同月龄大鼠为正常对照组（C组）。R组大鼠在X光机介导下行右侧L3,4椎旁腰交感神经节射频热凝毁损。分别于射频热凝前、射频热凝后1、2周时,采用von Frey纤维丝测定大鼠右侧后爪对机械性刺激缩足反应的阈值（PWT）;射频热凝后2周,采用Western-blotting方法测定DRG细胞Nav1．8蛋白和苏氨酸磷酸化Nav1．8蛋白表达,并采用透射电镜观察大鼠腓肠神经超微病理结构。结果 与C组比较,射频热凝前D组和R组PWT降低（P＜0．01）。射频热凝后1～2周,R组较D组PWT升高,但仍较C组降低（P＜0．05）。C组髓鞘排列均匀,轴突内可见形态正常的线粒体;D组脱髓鞘明显,髓鞘板层排列紊乱、断裂、肿胀;R组脱髓鞘程度明显减轻,髓鞘板层局部排列紊乱、空泡形成。与C组比较,D组和R组Nav1．8蛋白表达降低（P＜0．05）,而苏氨酸磷酸化Nav1．8蛋白表达增高（P＜0．01）;R组苏氨酸磷酸化Nav1．8蛋白表达低于D组（P＜0．05）。结论 DRG细胞Nav1．8的磷酸化可能是糖尿病痛性周围神经病变大鼠痛觉过敏形成的机制之一。     

腰交感神经节射频热凝对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节TTX-R钠电流的影响

目的 评价射频热凝毁损腰交感神经节对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节（DRG）细胞上河豚毒素不敏感（TTX-R）钠通道电流的影响。方法 腹腔注射链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病痛性周围神经病变模型，取造模成功的大鼠20只，随机分为糖尿病对照组（D组）及交感神经节射频热凝组（R组），每组10只，另取10只同月龄大鼠为正常对照组（C组），R组大鼠行右侧L3，4椎旁射频热凝毁损腰交感神经节。于射频热凝前、射频热凝后1、2周采用von Frey纤维丝测定缩爪反应阈值（PWT）;射频热凝后2周，急性分离小DRG细胞，采用全细胞膜片钳记录方法，在电压钳制下记录TTX-R钠通道电流。结果 与C组比较，射频热凝前D组和R组PWT降低（P〈0．01），射频热凝后1、2周，R组PWT低于C组（P〈0．05），高于D组（P〈0．05）;射频热凝后2周，与C组比较， D组、R组I-V曲线向左移，R组电流密度高于C组（P〈0．01），低于D组（P〈0．05），与C组比较，D组、R组半激活电压及半失活电压升高（P〈0．01），D组和R组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 腰交感神经节射频热凝可有效缓解糖尿病痛性周围神经病变大鼠的痛觉过敏，抑制小DRG细胞TTX-R钠通道电流可能是其发挥镇痛作用机制之一。     

射频热凝腰交感神经节的临床应用

目的 探讨腰交感神经节射频热凝的方法与疗效。方法32例腰腿部血管性或交感反射性疼痛病人,腰交感神经节试验性阻滞阳性。随机分为两组:Ⅰ组(18例),X线透视引导穿刺针到位,注造影剂及用刺激电流确认,热凝85℃、90s;Ⅱ组(14例),根据术前X线照片测量值定位穿刺,电刺激和热凝参数同Ⅰ组。结果Ⅰ组和Ⅱ组治疗后,下肢变暖者分别为93.1％和78.3％(P<0.01);VAS评分降低分别为(3.4±2.2)和(3.2±2.4)分(P>0.05);显效分别为11.1％和7.1％(P<0.05),有效率44.4％和50。0％(P>0.05),部分有效率38.9％和35.7％(P<0.05),总有效率94.4％和92.9％(P>0.05)。治疗后下肢不适或穿刺点疼痛加用止痛药者Ⅰ组5.5％和Ⅱ组14.3％(P<0.01)。结论 射频热凝术能有效地毁损腰交感神经节。X线透视指引穿刺有助于提高成功率和减少并发症。     

自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂的实验研究

目的 探讨应用自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂的可行性和优越性.方法 取SD大鼠40只,体质量250～350g,随机分成2组,每组20只.实验组:坐骨神经切断后采用自体神经外膜小间隙桥接法缝合;对照组:坐骨神经切断后采用神经外膜原位缝合.术后2、4、6、8、10、12、14及16周时,分别从2组中各取出2只大鼠,大体观察实验动物肢体恢复自主活动的时间,显微镜视下观察神经再生室及缝合口的大体形态,光镜及电镜下对2组再生神经纤维进行观察.结果 实验组大鼠恢复肢体自主活动快,缝合口与周围组织粘连轻.形态学观察发现小间隙神经纤维排列有序,结缔组织增生明显减少.电镜观察显示神经间隙远端再生神经髓鞘板层呈同心圆状排列致密、整齐,雪旺细胞增生明显.而对照组没有上述改变.结论 自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂是可行的,优于神经外膜原位缝合法,是修复周围神经断裂的一种新方法.     

腰交感神经节射频热凝毁损术的临床应用

目的探讨数字减影(ADS)引导下腰交感神经节射频消融术的疗效及安全性。方法 42例腰腿部血管性或交感性反射性疼痛病人,随机分为两组:均在ADS引导下,穿剌到位Ⅰ组(22例)行电剌激及局麻药阻滞试验确认后行射频热凝毁损,温度80℃,时间75s,两个周期,Ⅱ组(20例)行局麻药阻滞试验后以1%利多卡因10ml、维生素B12针0.5mg注射阻滞。结果Ⅰ组和Ⅱ组治疗后,下肢变暖者为94.7%和72.2%(P0.01)有极显著差异;VAS评分治疗后7d3.3±1.2和3.2±1.1分(P0.05)无显著性差异;3个月、6个月时有显著性差异(P0.05);显效、有效、部分有效均有显著性差异(P0.05),总有效率91.1%和80.0%有显著差异(P0.05)。结论腰交感神经节射频热凝毁损可有效长时间阻断腰交感性神经功能达到持续血管扩张,改善组织血液和营养供应、消除异感、减轻疼痛,是治疗腰腿部血管性或交感性反射性疼痛的安全有效、创伤小的微创治疗方法。     

射频热凝损毁腰交感神经节治疗下肢缺血性疾病40例

目的 探讨用射频热凝损毁腰交感神经节治疗下肢缺血性疾病的可行性.方法 对40例因动脉缺血导致下肢疼痛和慢性溃疡者用热凝法损毁其腰交感神经节,观察患肢血氧饱和度（SPO2）、趾脉搏波幅和足背皮肤温度,疼痛VAS评分变化以及肢体溃疡病灶的愈合情况.结果 射频热凝损毁腰交感神经节有效改善了下肢末梢血液循环,缓解疼痛总有效率为90%;难治性溃疡病灶痊愈率达15%,明显好转占32.5%,好转占40%.结论 射频热凝毁损腰交感神经节治疗下肢缺血性疾病疗效确实,定位精确、微创、成功率高、并发症少,是下肢缺血性疾病的有效治疗方法.     

耳脑胶联合生物蛋白海绵修复大鼠面神经损伤的实验研究

目的 探讨应用耳脑胶及生物蛋白海绵修复大鼠面神经损伤的效果.方法 以成年Wistar大鼠的一侧面神经颊支损伤为实验模型,将30只雄性大鼠随机分为3组进行实验,每组10只,实验组1为胶粘组、实验组2为小间隙加胶粘组、对照组为外膜缝合组.术后8周,采用大体观察、神经电生理测定和组织学观察,每组余2只取标本做透射电镜观察,评价面神经再生和功能恢复情况.结果 组1、组2的面神经吻合口内肉芽组织很少,吻合口处瘢痕很小,可见神经生长良好,均未形成神经瘤;组1和对照组在神经吻合部位远端电刺激后口轮匝肌处神经动作电位潜伏期和波幅的差异无统计学意义(P＞0.05),而组2和对照组在神经吻合部位远端电刺激后口轮匝肌处神经动作电位潜伏期和波幅的差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜观察组1再生神经纤维中有髓神经纤维排列整齐,髓鞘结构基本接近正常,组2再生神经中髓鞘数量多,厚度基本接近正常,板层结构质密,神经丝完好.结论 耳脑胶粘合修复大鼠面神经具有与外膜缝合同样的效果,并且手术操作简便;耳脑胶联合生物蛋白海绵修复大鼠面神经效果较好,优于外膜缝合法.     

脊髓小神经胶质细胞在糖尿病痛性周围神经病变中的作用

目的 观察糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓小神经胶质细胞的变化及腹腔注射丙戊茶碱(propentofylline,PPF)对其的影响,以探讨脊髓小神经胶质细胞在糖尿病痛性周围神经病变中的作用.方法 采用腹腔注射链尿佐菌素(streptozotocine,STZ)诱导糖尿病痛性周围神经病变大鼠模型,在造模成功的痛过敏糖尿病大鼠中取20只随机分为模型组(Ⅱ组,n:10)和PPF治疗组(Ⅲ组,n=lO),另取10只同月龄大鼠为空白对照组(Ⅰ组,n=10).Ⅲ、Ⅱ组在第28天后分别每天腹腔注射10 mg/kg的PPF和等剂量的生理盐水一周.于注射STZ前、注射STZ后2 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d测量大鼠体重并取尾静脉血测定血糖;注射STZ前、注射STZ后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d用von Frey丝测定50%机械缩足反应阈值(me-chanical withdraw threshold,MWT);注射STZ 35 d后处死大鼠,采用免疫组化的方法检测大鼠脊髓的补体受体3(CR3)变化情况.结果 与Ⅰ组相比,注射STZ后2 d Ⅱ、Ⅲ组血糖显著增高(P<0.01),注射STZ后35 d Ⅱ、Ⅲ组体重明显轻于Ⅰ组(P<0.01);MWT的变化:与Ⅰ组相比,注射STZ后28 d、35 d Ⅱ组和Ⅲ组MWT明显降低(P<0.01);与Ⅱ组相比,注射STZ后35 d Ⅲ组MWT升高(P<0.05).注射STZ后第35天检测大鼠脊髓的CR3变化:与Ⅰ组相比,注射STZ后35 d Ⅱ、Ⅲ组明显增多(P<0.01);与Ⅱ组相比,注射STZ后35 d Ⅲ组CR3明显减少(P<0.01).结论 糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓小神经胶质细胞增殖活化,可能参与了糖尿病周围神经痛的形成;腹腔注射PPF可扭转其的作用.     

CT引导下半月节射频热凝治疗顽固性三叉神经痛

目的探讨CT引导下半月节射频热凝治疗顽固性三叉神经痛的疗效。方法 2007年3月～2010年12月,在CT引导下对68例常规口服药物治疗无效的三叉神经痛进行经皮穿刺半月节射频热凝治疗,三叉神经第Ⅰ支9例,第Ⅱ支12例,第Ⅲ支17例,第Ⅰ＋Ⅱ支3例,第Ⅱ＋Ⅲ支24例,第Ⅰ＋Ⅱ＋Ⅲ支3例。结果 68例均于CT引导下穿刺进入相应卵圆孔。66例治疗后疼痛消失,1例减轻,1例无效。68例随访3～48个月,平均31个月,5例复发,复发率7.4%。1例三叉神经第Ⅰ支射频术后同侧眼球结膜充血,2周后角膜溃疡,8周后溃疡穿孔,10周后穿孔自行愈合,但该眼视力丧失。结论 CT引导下半月节射频热凝能有效治疗顽固性三叉神经痛。对于三叉神经第Ⅰ支的射频治疗,一定要控制热凝温度于70℃以下,严密监测射频过程中患者的角膜反射,做到角膜反射迟钝即结束治疗。     

神经生长因子与尼莫地平对糖尿病周围神经病变预处理的影响

目的 比较神经生长因子(NGF)与尼莫地平两种药物对大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)预处理的影响.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病(DM)大鼠模型并随机分组:Ⅰ:空白对照组(Control);Ⅱ:糖尿病组(DM);Ⅲ:糖尿病+β-神经生长因子组(DM+ β-NGF);Ⅳ:糖尿病+尼莫地平组(DM+ Nimodipine).检测各组坐骨神经运动传导速度(MNCV)以及坐骨神经病理改变.结果 坐骨神经MNCV的测量结果:8周时,Control组[(50.70±1.12) m/s]与DM组[(45.80±1.12) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]、尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]分别与DM组[(45.80±1.12) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05);12周时,β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]、尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]分别与Control组[(50.90±1.31) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]与尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与Control比较,其余3组坐骨神经形态学结构均有不同程度的破坏,DM组＞尼莫地平组＞β-NGF组.结论 NGF和尼莫地平均对大鼠坐骨神经糖尿病周围神经病变有预保护作用,但不能阻止其发生和发展,NGF对其预保护作用要优于尼莫地平,并随时间延长效果也逐渐明显.     

脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠,月龄3月,体重180～220 g,腹腔注射链脲菌素65 mg/kg制备糖尿病大鼠神经病理性痛模型.取模型制备成功的大鼠96只,随机分为3组(n=32):糖尿病神经病理性痛组(D组)、p38MAPK抑制剂组(I组)和NMDA受体阻断剂组(M组),另取32只正常大鼠作为对照组(C组).模型制备成功后每周一上午,I组和M组分别腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580 1 mg/kg、NMDA受体阻断剂MK-8011 mg/kg,1次/周,直至处死大鼠.各组分别于模型制备成功后第1、3、5、7周(T1～4)末随机取8只大鼠,采用yon Frey纤维丝测定双后足机械缩足反应阚值(MWT),采用肌电图仪测定左侧坐骨神经传导速度(NCV)后处死大鼠;取L3～6的背根神经节和脊髓,采用免疫组化法和Western blot法检测p38MAPK磷酸化水平,采用RT-PCR法检测NMDA受体1(NR1)mRNA表达.结果 与C组比较,D组、I组和M组T1～4时MWT降低,NCV减慢,p38MAPK磷酸化水平升高,NR1 mRNA表达上调(P<0.05);与D组比较,I组和M组MWT升高,NCV加快,T2～4时I组和M组p38MAPK磷酸化水平降低,M组NR1 mRNA表达下调(P<0.05).结论 脊髓NMDA受体激活可能通过p38MAPK信号通路参与大鼠糖尿病神经病理性痛的维持.     

鞘内注射舒芬太尼对神经病理性痛大鼠脊髓背角NMDA受体及CGRP表达的影响

目的 评价鞘内注射舒芬太尼对神经病理性痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体及降钙素相关基因肽(CGRP)表达的影响.方法 雄性SD大鼠36只,体重220～280 g,随机分为4组(n=9):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、坐骨神经分支选择性损伤组(SNI组)和舒芬太尼+坐骨神经分支选择性损伤组(S+SNI组).SNI组和S+SNI组制备SNI模型,S+SNI组在SNI术后14 d内每天鞘内注射舒芬太尼1 μg(用生理盐水稀释至10 μl),其余各组给予等容量生理盐水.于SNI给药前2 d(基础状态)及给药1、2、7、14 d测定机械痛阈和热缩足潜伏期,分别于给药2、7、14 d测定痛阈后立即处死3只大鼠,采用免疫组化法测定L5节段脊髓背角NMDA受体和CGRP表达水平.结果 与C组和S组比较,SNI组机械痛阚降低,NMDA受体和CGRP表达上调(P<0.01),热缩足潜伏期差异无统计学意义(P>0.05).与SNI组比较,S+SNI组机械痛阈升高,热缩足潜伏期延长,NMDA受体和CGRP表达下调(P<0.01).结论 鞘内注射舒芬太尼可抑制脊髓背角NMDA受体和CGRP表达上调,从而减轻大鼠神经病理性痛.     

小隐静脉栓塞对腓肠神经营养血管逆行皮瓣影响的实验研究

目的探讨小隐静脉栓塞对远端带蒂腓肠神经营养血管逆行皮瓣的影响。方法将30只大白兔小腿后侧切取远端蒂腓肠神经岛状皮瓣,随机分为三组,每组10个皮瓣。第1组在蒂部保留小隐静脉干;第2组在蒂部远端1cm将小隐静脉干结扎;第3组在蒂部远端1 cm栓塞小隐静脉干。结果第1组皮瓣的小隐静脉充盈较第2、3组显著,且第1组皮瓣均有明显淤血、肿胀。第3组皮瓣存活率（87.5%）明显高于第1组（62.3%）和第2组（81.5%）,差异均具有极显著意义（P〈0.01）。结论在小隐静脉远端栓塞或结扎阻断静脉血流灌入,均能显著提高远端蒂皮瓣的存活率,在蒂部结扎小隐静脉影响皮瓣远端供血和皮瓣成活面积。     

Effect of aldose reductase inhibitor ONO 2235 on reduced sympathetic nervous system activity and peripheral nerve disorders in STZ-induced diabetic rats

To test the hypothesis that inhibitors of aldose reductase, a key enzyme for polyol synthesis, prevent the decrease of sympathetic nervous system (SNS) activity and improve motor nerve conduction velocity (MNCV) through the reduction of sorbitol accumulation in streptozocin (STZ)-induced diabetic rats, norepinephrine (NE) turnover (reliable indicator of SNS activity in the interscapular brown adipose tissue (IBAT), heart, and pancreas), and MNCV were measured in untreated STZ-induced diabetic rats, STZ-induced diabetic rats treated with an aldose reductase inhibitor (ARI) (ONO 2235, 50 mg X kg-1 X day-1, orally), STZ-induced diabetic rats treated with insulin therapy, control rats, and control rats treated with ARI. As expected, results from studies with the inhibition of NE biosynthesis with alpha-methyl-p-tyrosine or radiolabeled NE to measure NE turnover demonstrated significant reductions in SNS activity in IBAT, heart, and pancreas of untreated STZ-induced diabetic rats, compared with those in control rats. MNCV determined with the tail nerve was significantly reduced in untreated STZ-induced diabetic rats, compared with that of the controls. Both daily ARI treatment and insulin therapy in STZ-induced diabetic rats prevented partially but significantly the decrease of NE turnover in IBAT, heart, and pancreas, ameliorated MNCV, and reduced sorbitol accumulation in the nerve tissue and red blood cells. ARI treatment in control rats had no effect on NE turnover, MNCV, or sorbitol content. These results suggest that STZ-induced diabetic rats had not only motor neuropathy but also sympathetic nervous dysfunction and that ARI treatment might prevent these as well as insulin therapy does through the reduction of sorbitol accumulation.     

人神经生长因子β基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角致痛物质含量的影响

目的 探讨人神经生长因子β(hNGFβ)基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)含量的影响.方法 雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,随机分为3组(n=16):假手术组(Ⅰ组)假手术后立即鞘内注射人工脑脊液;Ⅱ组和Ⅲ组制备坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或重组腺病毒介导入神经生长因子β(Ad-hNGFβ)基因.于术前1 d、转染后28 d内每4天测定热痛阈、机械痛阈及行为学评分.每组分别于转染后4、7、14及28 d各处死4只大鼠,取脊髓组织,采用免疫组织化学法测定SP和CGRP含量.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组行为学评分升高,机械痛阈及热痛阈均降低(P<0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组行为学评分及机械痛阈差异无统计学意义(P>0.05),转染后8～24 d热痛阈升高(P<0.05).术后Ⅱ组和Ⅲ组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显高于Ⅰ组,术后7～28 dm组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显低于Ⅱ组(P<0.05或0.01).结论 Ad-hNGFβ基因转染可能通过降低脊髓背角SP及CGRP含量减轻神经病理性痛大鼠的热痛觉过敏.     

一氧化氮在神经病理性痛大鼠脊髓敏化中的作用

目的 评价一氧化氮(NO)在神经病理性痛大鼠脊髓敏化中的作用.方法 成年雄性Wistar大鼠32只,体重200～300 g,随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、假手术预先给药组(S-N组)、坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)组和CCI预先给药组(CCI-N组).建立CCI致神经病理性痛模型,S-N组和CCI-N组分别于模型制备前鞘内注射10 μl(250 μg)NC-硝基-L-精氨酸-甲基酯,分别于术前和术后3 d测定热痛阈,于术后4、7 d各处死4只大鼠,取L4,5脊髓,测定脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)表达水平.结果 各组术后3 d热痛阈较基础值均降低(P＜0.05);与S组和S-N组比较,CCI组热痛阈降低,脊髓背角pCREB表达上调(P＜0.05),CCI-N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与CCI组比较,CCI-N组热痛阈升高,脊髓背角pCREB表达下调(P＜0.05).结论 NO参与神经病理性痛大鼠脊髓敏化,其作用机制与促进脊髓背角pCREB释放有关.     

内脏神经-体神经端侧吻合后神经再生方式的研究

目的 通过内脏神经-体神经端侧吻合建立人工体神经-内脏神经反射弧大鼠模型25只,荧光双标追踪技术研究神经再生方式.方法 在成活的21只模型鼠左侧盆神经节(MPG)内注射0.5μl荧光金(FG),腰4前根(L_4VR)的外周神经-坐骨神经注射1μl快蓝(FB)进行逆行神经追踪.应用组织化学方法 对吻合口远端的神经根(L6VR)进行甲苯胺蓝染色.结果 逆行追踪结果显示FG单标和FG-FB双标神经元主要分布于脊髓L_4左侧前角,FB单标神经元主要分布于脊髓L_3-L_6左侧前角.脊髓腰4节段每张切片上FG单标神经元、FB单标神经元、FG-FB双标神经元数目分别为(20.8±3.3)、(5.7±1.3)、(10.3±0.7).吻合口远端(L_6VR)再生的神经经甲苯胺蓝染色后可见轴突呈深蓝色.结论 逆行追踪结果证明内脏神经.体神经端侧吻合建立人工体神经.内脏神经反射弧后,体神经可以通过侧枝发芽的方式长入并替代内脏神经.