日本血吸虫单克隆anti—anti—id的建株及初步鉴定

日本 制备日本血吸虫抗独特型抗体（anti-id,Ab2)NP30的单克隆抗独型抗体（anti-anti-id,Ab3)。方法 应用辣根过氧化物酶标记的NP30（HRP－NP30）免疫BALB／c小鼠的脾细胞与SP2／0融合,制备单克隆anti-anti-id。结果 获得1株稳定分泌抗NP30的单克隆抗体的细胞株,定名为NP48。NP48的Ig同型为IgG2b。NP48与SWAP和SEA ELISA反应均阳性。免疫组织化学显示NP48可定位于虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜。结论 NP48是NP30的特异性anti-anti-id,可用于NP30模拟抗原的分离和鉴定。     

日本血吸虫单克隆独特型抗体的筛选及初步鉴定

目的 从本实验室已建立的IgG类抗日本血吸虫抗原不同表位的单抗中筛选抗独特型抗体NP30的独特型抗体（id,Ab1)。方法 应用间接DLISA经典法,NP30作为抗原包板。加IgG各亚类杂交瘤细胞培养上清孵育,用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗鼠IgG捕捉。结果 单抗NP56与NP30呈阳性反应,NP56的Ig同型为IgG2b。免疫组织化学显示NP56与虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP56是NP30的特异性id,可用于NP30模拟抗原的鉴定。     

单克隆抗独特型抗体NP30检测78例慢血血清的效果观察

研究证明,无论是在感染血吸虫的小鼠还是人体中,都存在自然产生的抗独特型抗体(anti-id),单克隆抗独特型抗体NP 30即是用生物技术制备抗原-抗独特型抗体NP30作为探针,用双“抗原”夹心酶标法检测血吸虫病人血清中的短程抗体。近来,我们用     

抗人膀胱癌抗独特型抗体的制备和鉴定

目的：制备抗人膀胱癌抗独特型抗体（Ab2)并进行体外实验和鉴定，探讨通过免疫效应治疗或预防膀胱癌术后复发的可能性。方法：提取膀胱癌抗原（Ag)，应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体（Ab1)，Ab1经胃蛋白酶水解制备Ab1的F（ab‘)2片优，以F（ab‘）2片段免疫新西兰白兔，其血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌抗独特型抗体（Ab2），采用ELISA等方法进行鉴别。结果：Ab2与Ab1呈阳性反应，与BALB／C小鼠γ球蛋白呈阴极反应；Ab2与Ag竞争结合Ab1；Ab2与Ag的结合。结论：Ab1是针对膀胱移行细胞癌的单克隆抗体，Ab2是具有膀胱癌抗原的抗独特型抗体。     

钙纳米颗粒作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的 探索钙（Ca）纳米颗粒作为日本血吸虫病抗独特型抗体NP30疫苗佐剂的可行性。方法 将钙纳米颗粒与NP30制备成Ca-NP30结合物（Ca-NP30)，主动免疫BALB/c小鼠，观察其对小鼠的保护性作用并探讨其免疫保护机制。结果 Ca纳米颗粒可增强NP30对宿主的保护性作用，减虫率明显提高，从单用NP30的30.4%提高到57.8%；血清特异性抗体IgG水平较对照组显著升高；足垫试验可引发迟发型变态反应。结论 Ca纳米颗粒可作为血吸虫病抗独特型抗体NP30疫苗的佐剂，其作用机制与同时引起宿主体液免疫和细胞免疫应答增强有关。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区基因的体外扩增克隆及序列分析

目的 分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区（VH）基因并测定其序列。方法 根据鼠免疫球蛋白重链可变区基因FR1和FR4序列的保守性，化学合成体外扩增Ig重链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的杂交瘤细胞株基因组DNA为模板，扩增VH基因，将其克隆入pUC19载体，重组子用Sanger′s双脱氧链终止法测定序列，将序列与GeneBank中已发表的抗体序列比较。结果 VH基因全长357bp，属鼠免疫球蛋白重链第Ⅱ亚类，由种系基因V、Dsp2．8与JH4重排而来。该VH基因序列已被GeneBank收录（accession No AF282622）。结论 该VH基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区基因。     

抗弓形虫表膜抗原P30单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗弓形虫主要表膜抗原P30单克隆抗体并进行鉴定,进而为弓形虫病诊断、抗原的提纯及亚单位疫苗的制备等提供可靠依据。用弓形虫速殖子膜蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选出能够稳定分泌高滴度抗P30单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并测定单克隆抗体免疫球蛋白亚类和抗体效价,用IFAT进行单抗识别的抗原定位,并通过SDS-PAGE和Western-Blot分析鉴定。结果获得了两株抗P30抗原的杂交瘤细胞株E3和G2,其分泌的抗体与肺孢子虫、隐孢子虫等抗原均不发生交叉反应。2株单抗均属IgG1亚类,且识别的抗原定位于速殖子表膜。结果表明,制备的抗P30抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和特异性的单克隆抗体。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因的克隆及序列分析

[目的]分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区 (VL)基因并测定其序列。 [方法 ]根据鼠免疫球蛋白轻链可变区基因FR1和FR4序列的保守性 ,化学合成用于体外扩增Ig轻链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的杂交瘤细胞株基因组DNA为模板 ,扩增VL 基因 ,将其克隆入 pUC19载体 ,重组子用Sanger的双脱氧链终止法测定序列 ,将序列与GenBank中已发表的抗体序列比较。 [结果 ]VL 基因全长 318bp ,属鼠免疫球蛋白κ轻链第IV亚类 ,由种系基因V与Jκ4 重排而来。该VL 基因序列已被GenBank收录 (accessionNo AF2 0 6 72 0 )。 [结论 ]该VL 基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因。     

抗日本血吸虫抗独特型抗体的制备及初步鉴定和应用

本研究用1株针对日本血吸虫尾蚴和童虫表膜抗原的单克隆抗体(N15D9)免疫新西兰兔制备多克隆抗N15D9独特型抗体。结果表明,多克隆抗N15D9独特型抗体具有较高的抗体滴度,经用间接免疫荧光法和ELISA分析,该抗体显示较高的结合特异性,与具有相同靶抗原结合特异性的单克隆抗体有中度的交叉反应。当用抗N15D9独特型抗体作为诊断抗原检测日本血吸虫感染的病人血清时,其阳性检出率为39％。本研究结果初步揭示,抗N15D9独特型抗体具有一定的分子模拟作帮和诊断应用的潜能。     

中药用于血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的　从中药中筛选血吸虫病抗独特型抗体疫苗的佐剂 ,并初步探讨其作用机制。方法　日本血吸虫抗独特型抗体 NP30主动免疫 BAL B/ c小鼠 ,分别联用虫草多糖、猪苓多糖、黄芪、甘草酸和人体免疫调理剂 (HIM) ,观察其对小鼠的保护作用 ,并检测小鼠血清特异性 Ig G、Ig G1和 Ig G2 a抗体水平。结果　黄芪和 HIM能明显提高 NP30对小鼠的保护性免疫作用 ,减虫率显著提高 ,从单用 NP30的 37.8%分别提高到 5 0 .6 %和 5 3.6 % ;但两者对血清特异性 Ig G、Ig G1和 Ig G2 a抗体均无明显升高作用。结论　黄芪和 HIM可明显提高血吸虫病抗独特型抗体疫苗 NP30的保护性免疫力 ,可作为 NP30的佐剂 ,其佐剂作用与所检测的抗体水平似不相关 ,推测可能与细胞免疫应答有关。     

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.     

内镜下Oddi括约肌测压的临床意义

为观察胆石症、胆囊切除术后等胆系疾病及功能性消化不良（ＦＤ）、糖尿病胃轻瘫（ＤＧＰ）等非胆系疾病Ｏｄｄｉ括约肌（ＳＯ）功能变化，通过内镜采用灌注式高分辨多道胃肠功能测定仪，对１５例胆系疾病患者、１３例非胆系疾病患者进行Ｏｄｄｉ括约肌测压。结果显示，胆系疾病组的胆总管压力、ＳＯ基础压及蠕动波振幅明显高于非胆系疾病组（６．８６±０．６３ｋＰａ与１．２７±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；７．３１±０．９５ｋＰａ与１．８７±０．１６ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３２．００±１．２ｋＰａ与２４．１４±１．５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）；同时，非胆系疾病组的十二指肠压、ＳＯ蠕动频率及间期较胆系疾病组明显降低、减慢及延长（１．４２±０．２６ｋＰａ与０．３０±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３．６±１．２次／分与２．２±０．４次／分，Ｐ＜０．０５；７．４±１．２秒与１１．０±１．８秒，Ｐ＜０．０５）。结果显示，无论是胆系疾病还是ＦＤ及ＤＧＰ等非胆系疾病均有ＳＯ功能紊乱，但表现形式相反，对指导临床诊断与治疗有一定价值。     

钉螺3种酶的酶谱分析

本研究用淀粉凝胶同工酶电泳法比较了安徽及云南两省的钉螺的酸性磷酸酶（ＡｃＰ，ＥＣ３．１．３．２）、过氧化物酶（Ｐｏ，ＥＣ１．１１．１．７）及酯酶（Ｅｓｔ，ＥＣ３．１．１．１）的电泳带型。ＡｃＰ及Ｐｏ的同工酶中ＡｃＰ１、ＡｃＰ２及Ｐｏ１、Ｐｏ２由单态位点编码。Ｅｓｔ的同工酶由４个位点编码，其中Ｅｓｔ３在安徽的钉螺中为１条电泳快带，相对迁移率（Ｒｆ）为０．３６２±０．０２７；在云南的钉螺中为１条电泳慢带，Ｒｆ为０．３４０±０．０３６。     

骨代谢指标测定在骨质疏松诊治中的应用价值

目的 比较妇女绝经前后骨代谢指标的变化，研究各指标在骨质疏松症治疗后的变化率，对各指标在骨质疏松症诊治中的应用作出初步评价。方法 48例绝经前妇女、48例绝经后妇女测定10项骨代谢指标．45例绝经后骨质疏松症患者．治疗前、治疗6个月后分别测定10项骨代谢指标，观察其变化率。12名绝经后妇女，每两个月测定10项骨代谢指标。共观察一年。结果 绝经后妇女骨代谢指标明显升高，绝经后骨质疏松症患者经抗吸收治疗后．大部分骨代谢指标明显降低，血清骨形成指标比尿骨吸收指标长期个体内的变异要小。结论 绝经后骨质疏松症患者骨转换加快，部分血清骨代谢指标优于尿骨代谢指标，尤以血清骨形成指标N—mid骨钙素和血清骨吸收指标CTX为优。     

五例尸检法乐氏四联症的解剖形态观察

本文报告5例未经心内手术矫治的法乐氏四联症,对其心脏解剖形态及合并畸形,作了详细的观察和描述。