Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

车叶草苷通过内质网应激促进胰腺癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)通过内质网应激(ERS)诱导胰腺癌(PC)细胞凋亡的机制。方法:选取人胰腺癌PANC-1细胞作为研究对象。将PANC-1细胞按照随机数字表法分为4组，分别为对照组、ASP组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyric acid, 4-PBA)组和ASP+4-PBA组。采用CCK-8检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移，蛋白质印迹法检测细胞中活化转录因子6(ATF6)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇依赖性激酶1α磷酸化蛋白(p-IRE1α)相对表达水平。结果:随着ASP浓度的增加，PANC-1细胞增殖率呈下降趋势。与对照组相比，ASP组迁移细胞数量降低，细胞凋亡率增加，ATF6、CHOP、cleaved-caspase-3、PERK及p-IRE1α蛋白相对表达水平上升，差异均有统计学意义(P<0.05)。与ASP组相比，ASP+4-PBA组细胞迁移数量增多、细胞凋亡...     

内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

热休克预处理对大鼠心肌细胞凋亡和金属硫蛋白表达的影响

目的:探讨热休克预处理对大鼠心肌细胞凋亡和金属硫蛋白表达的影响.方法:将体外培养的大鼠心肌细胞随机分为3组:对照组(C组)、H2O2损伤组和热休克预处理组,检测心肌细胞的凋亡、心肌细胞Caspase-3活性,并用Western blotting检测线粒体中细胞色素C和金属硫蛋白的表达.结果:与对照组相比,H2O2损伤组心肌细胞凋亡数目增加(P＜0.01),Caspase-3活性明显增高(P＜0.01),线粒体中细胞色素C和金属硫蛋白的蛋白表达量明显增高(P＜0.01),而给予热休克预处理的心肌细胞的凋亡数量和坏死细胞数较H2 O2损伤组明显下降(P＜0.01),参与细胞凋亡执行的Caspase-3活性明显降低(P＜0.01),细胞色素C和金属硫蛋白的蛋白表达量持续升高(P＜0.01).结论:热休克预处理能够抑制心肌细胞凋亡,增加对心肌起保护作用的金属硫蛋白的表达,减少线粒体细胞色素C的释放,从而对心肌细胞起保护性作用.     

右美托咪定对H9C2细胞内质网应激性损伤的影响及机制研究

目的研究右美托咪定（DEX）对H9C2心肌细胞内质网应激反应（ERS）的影响,探讨可能的发生机制。方法取正常培养的大鼠H9C2细胞,同时进行对照培养和缺氧/复氧（H/R）培养,其中H/R条件为5%CO2和95%N2密闭缺氧装置中缺氧3h后,常氧条件下培养3h。以含有1滋mol/LDEX和1mmol/L4-苯基丁酸（4-PBA）的培养基提前孵育细胞1h和24h。采用低损伤法检测各组细胞上清液的乳酸脱氢酶（LDH）浓度、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,以及RT-PCR和Westernblot法检测内质网应激特异性分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。将H9C2细胞分设Control组、毒胡萝卜素（TG）组、4-PBA组以及p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂（SB202190）组并进行相应的干预,Westernblot法检测各组p38MAPK和p-p38MAPK的表达,以及GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。结果与Control组相比,H/R组的H9C2细胞活力减低,细胞上清液LDH浓度增加,细胞凋亡率增加（P＜0.05）;与H/R组比较,DEX+H/R组的细胞活力明显增加,细胞上清液LDH浓度明显下降,细胞凋亡率下降（P＜0.05）;与DEX+H/R组比较,4-PBA+DEX+H/R组的H9C2细胞损伤被逆转,GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达也进一步升高。在Control组、TG组和DEX+TG组之间,p38MAPK的表达均无统计学差异,但是TG组的p-p38MAPK表达明显增加,DEX能够抑制p-p38MAPK表达增加（P＜0.05）;与TG组比较,DEX+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达被抑制,但是DEX+SB202190+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA及蛋白表达被逆转增高。结论DEX对H/R损伤下的H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制与抑制细胞ERS有关,通过调控p38MAPK能够减轻细胞损伤和凋亡。     

D-β-羟基丁酸通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死

探究D-β-羟基丁酸（DβHB）对大鼠急性心肌梗死（AMI）的作用及其可能的作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、心梗组、DβHB组和阳性对照组,每组10只。除对照组外,其余组通过结扎冠状动脉左前降支近端建立AMI大鼠模型。DβHB组大鼠腹腔注射DβHB 100 mg·kg-1·d-1,阳性对照组大鼠腹腔注射倍他乐克12mg·kg-1·d-1,对照组和心梗组大鼠注射等量生理盐水,持续给药3周。超声心动图检测心功能;HE染色检测心脏病理学变化;TTC染色检测心肌梗死面积;ELISA试剂盒检测LDH和CK-MB活性;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测凋亡、Notch1/Hes1通路和内质网应激相关蛋白水平。结果 与对照组相比,心梗组大鼠心肌结构紊乱,存在明显炎性细胞浸润和间质水肿,心功能明显降低,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达明显升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白水平明显降低（P＜0.05）,Notch1、NICD和Hes1蛋白水平差异无统计学意义（P＞0.05）;与心梗组相比,DβHB组和阳性对照组大鼠心肌病理学变化有明显改善,心功能明显提升,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白水平明显降低（P＜0.05）,Bcl-2、Notch1、NICD和Hes1蛋白水平明显升高（P＜0.05）。结论 DβHB可能通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死。     

高糖诱导的心肌细胞损伤的内质网应激机制研究

目的:本文对高糖诱导的心肌细胞损伤的内质网应激机制研究,为临床治疗提供借鉴.方法:心肌细胞随机分为3组:对照组、高糖组和4-BPA组.高糖组给予高糖处理12h,4-BPA组细胞在高糖处理的第6h给予4-BPA处理.免疫印迹法分析各组细胞内质网应激蛋白CHOP、BIP、PERK的表达.结果:高糖引起心肌细胞内质网应激蛋白CHOP、BIP、PERK的增强表达,且与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);4-BPA处理后上述蛋白的异常表达得到部分改善,且与高糖组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:高糖损伤心肌细胞可能是通过激活细胞内内质网应激信号通路实现.     

低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡的内质网应激机制研究

目的:本文对低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡相关机制进行研究,为新药开发和临床治疗提供参考.方法:人卵巢癌细胞A2780经低剂量奥沙利铂联合紫杉醇处理后,MTT法检测细胞增殖情况;采用real-time PCR及Western Blotting方法检测内质网应激相关蛋白PERK,CHOP以及细胞凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的表达情况.结果:低剂量奥沙利铂(1μM)联合紫杉醇(10 mM)处理72 h后,A2780细胞抑制率为39.5％,明显高于其他组,差异具有统计学意义(P＜0.01);且PERK、CHOP及细胞凋亡蛋白在mRNA和蛋白质水平上均明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:低剂量奥沙利铂联合紫杉醇可能通过激活人卵巢癌细胞A2780的内质网应激及细胞凋亡通路起抑制细胞增殖的作用.     

木犀草素调控内质网应激-线粒体凋亡通路在脂毒性心肌损伤中的作用

目的 探讨木犀草素(LU)对H9c2心肌细胞的保护作用及与内质网应激-线粒体凋亡通路的关系。方法 使用棕榈酸(PA)建立H9c2心肌细胞脂毒性损伤的模型,将实验组分为正常组、模型组及木犀草素组(15μmol/L)。采用CCK8法测定体外培养的细胞增殖水平,利用试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,使用DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化,Annexin V-FITC/PI测定细胞凋亡程度,Westren blot法检测细胞在内质网应激-线粒体凋亡通路中相关基因的表达。结果 用PA(0.2mmol/L)直接刺激24h,可明显降低H9c2心肌细胞增殖率,增加细胞氧化应激水平,降低线粒体膜电位,使p-PERK、p-IRE1、GRP78、CHOP、Bax、caspase-3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达降低,但使用木犀草素处理后,明显逆转了以上结果,降低了PA诱导的H9c2心肌细胞氧化应激水平,减轻细胞凋亡程度,逆转了在PA影响下细胞内内质网应激-线粒体凋亡通路相关蛋白的表达。结论 木犀草素可减轻PA诱导的脂毒性心肌...     

冬凌草甲素对小鼠溃疡性结肠炎内质网应激的作用研究

目的 探讨冬凌草甲素对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的结肠上皮组织内质网应激(ERS)的影响.方法 利用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型组,设置冬凌草甲素及柳氮磺胺吡啶干预组;测定疾病活动指数(DAI),对结肠组织速行病理形态学评分(HPS),RT-qPCR检测结肠上皮组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子EBP同源蛋白(CHOP)、激活性转录因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇酶1α (IRE1α)mRNA表达变化.结果 与健康小鼠相比,模型组结肠上皮组织中TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、ATF6、CHOP、PERK及IRE1α mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,冬凌草甲素干预组DAI与HPS均明显下降(P＜0.05,P＜0.01),疗效与柳氮磺胺吡啶干预组相当(P＞0.05,P＜0.01),除IER1α mRNA外,TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、CHOP、ATF6及PERK mRNA表达水平均明显下调(P＜0.05,P＜0.01).结论 冬凌草甲素能减轻DSS诱导小鼠结肠炎症,其机制可能与其调节结肠上皮组织ERS有关.     

过表达肌浆网钙ATP酶对心肌细胞内质网应激的影响

目的 研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)对心肌细胞内质网应激的影响.方法 构建含SERCA2a cDNA的重组腺病毒载体(Adv-SERCA2a),以缺氧和衣霉素诱导内质网应激,随机将体外培养的心肌细胞分为以下6组:正常对照组、缺氧组、衣霉素组、过表达SERCA2a组、SERCA2a+缺氧组和SERCA2a+衣霉素组.采用Western印迹法检测内质网应激蛋白GRP78及C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,台盼蓝染色检测心肌细胞存活率.结果 过表达SERCA2a+缺氧组GRP78及CHOP蛋白表达较缺氧组分别低49.1%和52.7%,细胞凋亡率较缺氧组低66.0%,细胞存活率较缺氧组高13.4%,差异有统计学意义(均P<0.05);过表达SERCA2a+衣霉素组GRP78及CHOP蛋白表达较衣霉素组分别低50.4%和66.1%,细胞凋亡率较衣霉素组低54.0%,细胞存活率较衣霉素组高6.7%,差异有统计学意义(均P<0.05).结论 过表达SERCA2a通过下调内质网应激蛋白表达,降低心肌细胞内质网应激水平,缓解过度内质网应激介导的细胞损伤.     

鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制

目的 探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制.方法 分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)于预.实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组.用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均＜0.01),凋亡率均降低(P＜0.05,P＜0.01);C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P＜0.01).结论 过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的.     

重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡

目的: 观察新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法: 将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate, 4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4 PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： 感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4 PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rL-RVG组明显降低(P<0.05)。结论： rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。     

未折叠蛋白反应在严重烧伤大鼠淋巴液诱导肺内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨未折叠蛋白反应介导的凋亡通路在严重烧伤大鼠淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 选成年Wistar雄性大鼠20只,分为烫伤组(行30％体表面积Ⅲ度烫伤)和假伤组,建立大鼠胸导管淋巴瘘模型,收集伤后24h淋巴液,用于体外实验.将细胞实验分为烫伤淋巴液刺激组(A组)、烫伤淋巴液+4苯基丁酸(4-PBA)处理组(B组)和假伤淋巴液处理组(C组).刺激6h后,Annexin V/PI标记法流式细胞术检测细胞凋亡.western blot检测caspase12、葡萄糖调节蛋白78(GRt78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)等蛋白表达的情况.结果 A组细胞凋亡水平显著高于C组(P＜0.01),B组细胞凋亡水平显著低于A组(P＜0.01).A组GRP78、CHOP和caspase12蛋白表达水平显著高于C组,经PBA处理后3种蛋白水平显著降低(P＜0.01).结论 烧伤大鼠淋巴液可以引起血管内皮细胞凋亡,未折叠蛋白反应可能是其主要通路之一.     

载脂蛋白J对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的 观察载脂蛋白J(ApoJ)对缺氧/复氧(H/R)诱导的乳鼠心室肌细胞损伤的影响及其相关的信号传导通路.方法 用携带ApoJ基因的重组腺病毒感染乳鼠心肌细胞使ApoJ高表达.利用三气培养箱建立H/R模型,SOD类似物Mn(Ⅲ)TBAP和真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)去磷酸化抑制剂Salubrinal提前预处理,将心肌细胞分成对照组、H/R组、ApoJ组、ApoJ+ H/R组、Mn(Ⅲ)TBAP+H/R组、Salubrinal+ H/R组.利用MTT法检测细胞的存活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、凋亡蛋白酶半胱天冬酶-3/7 (caspase-3/7)及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;Westernblot检测ApoJ、氧化酶Nox2 /gp91 phox、内质网特异性凋亡蛋白caspase12、CHOP的表达及eIF2α的磷酸化水平.结果 ApoJ基因重组腺病毒转染后,心肌细胞ApoJ蛋白高表达.与对照组相比,H/R组细胞存活率和SOD的活性明显下降,LDH的漏出量及caspase-3/7的活性升高,Nox2/gp91phox、caspase-12、CHOP蛋白的表达明显升高,eIF2α的磷酸化水平升高.与H/R组相比,ApoJ组、Mn(Ⅲ)TBAP组及Salubirnal组LDH的漏出量及caspase3/7的活性明显降低,ApoJ高表达使细胞存活率和SOD的活性显著升高,Nox2/gp91 phox、caspase-12、CHOP蛋白的表达明显下降,而eIF2α的磷酸化水平显著升高.结论 ApoJ通过抗氧化应激及内质网应激的作用,减轻H/R诱导的心肌细胞损伤.     

强骨抗萎膏通过调控MFN2及抑制内质网应激改善失重状态下大鼠骨丢失

目的 观察强骨抗萎膏对尾吊大鼠骨细胞凋亡和内质网应激的影响,探讨强骨抗萎膏防治模拟失重状态下骨丢失的机制。方法 60只SD大鼠分为对照组、模拟失重组、强骨抗萎膏组、阿仑膦酸钠组,骨疏康颗粒组,每组12只。采用尾部悬吊模拟失重状态,尾吊28 d;对照组和模拟失重组给予每日等体积生理盐水灌胃,其它3组复制模型,分别每日给予中药强骨抗萎膏2.4 g/kg,阿仑膦酸钠0.007 g/kg,骨疏康颗粒0.26 g/kg灌胃。持续给药4周后处死大鼠,TUNEL法检测骨细胞凋亡情况;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和线粒体融合蛋白2(MFN2)表达,RT-PCR和Western blot检测骨组织中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的基因和蛋白表达。结果 TUNEL结果显示模拟失重组骨细胞凋亡较对照组增加,强骨抗萎膏可抑制骨细胞凋亡。与对照组大鼠比较,模拟失重组PERK基因表达量明显增高(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组PERK基因表达量下降(P<0.05);与对照组比较,模拟失重组的GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量明显增高(P<0.05),MFN2蛋白表达降低(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量均明显降低(P<0.05),MFN2表达量升高。结论 强骨抗萎膏可以改善模拟失重大鼠骨细胞凋亡,通过抑制骨组织内质网应激相关因子GRP78、PERK、ATF6 和CHOP,上调MFN2表达,从而改善失重条件下的骨丢失。     

雷公藤内酯醇对肺癌荷瘤小鼠髓系抑制性细胞的影响及机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇对肺癌髓系抑制性细胞（myeloidderivedsuppressorcells,MDSC）的影响及其分子机制。方法将6~8周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、雷公藤内酯醇组、内质网应激抑制剂（4-PBA）组和4-PBA+雷公藤能内酯醇组4组,每组8只。取5×106个/mlA549细胞接种于小鼠腋下皮下,建立肺癌移植瘤模型;雷公藤内酯醇组每日腹腔注射0.2ml（浓度为1滋g/ml）雷公藤内酯醇+0.4ml0.9%氯化钠注射液,4-PBA组每日腹腔注射0.4ml（浓度为100滋g/ml）4-PBA+0.2ml0.9%氯化钠注射液,4-PBA+雷公藤内酯醇组每日注射0.2ml雷公藤内酯醇和0.4ml4-PBA,对照组给予腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液。每周监测小鼠的肿瘤体积变化,第21天处死小鼠剥离皮下肿瘤,并测量肿瘤的重量;分离提取脾脏组织细胞,采用流式细胞术分析各组MDSC细胞数量;用流式细胞术分选MDSC,膜联蛋白V/碘化丙啶双染法分析MDSC细胞凋亡,RT-qPCR法分析MDSC中重组人精氨酸酶1（ARG1）、一氧化氮合酶（iNOS）;Westernblot法分析MDSC中Bcl-2、Bax、CHOP、GRP78和PERK的表达水平。结果与对照组相比,雷公藤内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均明显降低,MDSC比例、ARG1、iNOSmRNA表达均明显下降,MDSC细胞凋亡率、CHOP、GRP78和PERK表达均明显增加（均P＜0.05）;与雷公藤内酯醇组相比,4-PBA+雷公藤内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均增加,MDSC比例、ARG1、iNOSmRNA均明显增加,细胞凋亡率和CHOP、GRP78和PERK表达均明显降低（均P＜0.05）;与4-PBA组相比,4-PBA+雷公藤能内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均明显降低（均P＜0.05）。结论雷公藤内酯醇对肺癌A549细胞移植瘤具有抑制作用,其机制与雷公藤内酯醇诱发内质网应激抑制MDSC有关。     

蟾毒灵通过激活内质网应激通路诱导HCT116细胞凋亡

目的 研究蟾毒灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响,并探讨内质网应激(ERS)在此过程中的作用。方法 采用CCK-8法测定蟾毒灵对HCT116细胞增殖活性的影响;不同浓度蟾毒灵作用HCT116细胞48 h后,采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况,同时用Western blot法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况;将HCT116细胞分为对照组、蟾毒灵组和联合组(蟾毒灵+4-苯基丁酸),Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果 CCK-8法检测结果显示蟾毒灵对HCT116细胞的增殖活性有抑制作用;细胞凋亡实验表明蟾毒灵能引起HCT116细胞的凋亡;Western blot实验结果显示,蟾毒灵能够上调促凋亡蛋白Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,同时也能诱导ERS并激活P...     

干细胞因子抑制糖氧剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的研究

目的探讨干细胞因子（SCF）抑制糖氧剥夺（OGD）诱导的人脑微血管内皮细胞（h-BMEC）内质网应激性凋亡的机制。方法将h-BMEC分为对照组、OGD组、SCF+OGD组（简称SCF组）、SCF+CompoundC+OGD组（简称CompC组）和SCF+AICAR+OGD组（简称AICAR组）;培养48h后,采用噻唑蓝法检测细胞存活率,膜联蛋白V/碘化丙啶（AnnexinV/PI）双染法检测细胞凋亡率,水溶性四唑盐-8（WST-8）法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（MDA）含量,Westernblot法检测腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）、断裂半胱氨酸蛋白酶-12（cleavedCaspase-12）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）表达。结果与OGD组比较,SCF组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;与SCF组比较,AICAR组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;CompC组AICAR组细胞存活率、SOD活性、MDA含量、细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比例、Bax、Bcl-2、、PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论SCF对OGD诱导的h-BMEC损伤具有抑制作用,其分子机制与抑制AMPK介导的内质网应激性凋亡有关。