流式细胞术在急性混合细胞白血病中的应用

急性白血病是一组造血干细胞的克隆性疾病,根据FAB分型分为急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病.近年来,随着单克隆抗体重组DNA技术,细胞遗传和分子生物学的理论和技术的迅速发展,流式细胞仪等检测技术的应用,又进一步分为伴淋系抗原表达的急性髓细胞白血病（Ly＋AML）,伴髓系抗原表达的急性淋巴细胞白血病（My＋ALL）和急性杂合细胞白血病（HAL）.     

慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型的比较研究

目的比较慢性髓系白血病急变期（CML-BC）与急性白血病（AL）的免疫表型特征。方法采用一组单克隆抗体和四色流式细胞术对58例成人CML-BC及同期420例AL患者骨髓标本进行免疫表型分析。结果58例CML-BC中。CML-AML占77．6％，CML-ALL占13．8％，CML-MAL（混合性白血病）占5．2％；AL中，AML占66．2％。ALL占32．9％，MAL占1．0％。CML-AML中，CD7及CD34表达高于AML；CML-BC和CML-AML中CD7与CD34共阳性表达分别高于AL和AML（P〈0．05）。276例AML中，纯型占62．3％，变异型占37．7％；130例ALL中，纯型占44．6％，变异型占55．4％；42例CML-AML中。纯型占59．5％，变异型占40．5％；8例CML-ALL中，纯型与变异型各占50．0％。结论CML-BC中干祖细胞阶段的抗原较AL高表达，变异型CML-BC与AL比例相当。     

流式细胞术诊断急性混合细胞白血病临床意义研究

目的 探讨流式细胞术对混合细胞白血病(MAL)诊断的临床意义.方法 采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测208例初发急性白血病患者的免疫表型.结果 208例初发急性白血病患者,混合细胞白血病(MAL)14例,所占比例为6.7％,B/髓系共表达10例(71.4％),T/B共表达3例(21.4％),T/髓共表达1例(7.1％);71例FAB分型诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL),纯淋系抗原表达31例,淋系伴髓系抗原表达(My+ALL)40例(56.34％);123例FAB分型诊断为急性髓细胞白血病(AML),纯髓系抗原表达79例,髓系伴淋系抗原表达(Ly+AML)44例(35.77％);14例MAL,CD79a、cCD3及MPO表达比例为100％、100％和81.8％.14例MAL中11例表达CD34(78.6％),2例白血病细胞部分弱表达,1例不表达.11例淋系和髓系混合细胞白血病中,CD117的表达率为81.8％(9/11).结论 对于MAL、My+-ALL、Ly+-AML等,单纯依靠细胞形态学均不能对其进行准确诊断,流式细胞术免疫分型弥补了FAB分型的不足,减少了误诊率,可对白血病细胞进行准确的分型诊断,为临床诊断、选择合理的治疗方案等提供了科学的依据.     

儿童急性髓系白血病髓外复发子宫髓系肉瘤一例

髓系肉瘤(myeloid sarcoma,MS)是由原始粒细胞或不成熟的髓细胞,在髓外增生和浸润所形成的肿瘤性包块,其可单独出现,也可与恶性血液疾病伴随,如急性髓系白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)急变期、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病等,其中以AML最常见,体现为AML的髓外表现。累及子宫的MS在儿童极为罕见,本院收治1例,现报道如下。1病例资料     

104例急性白血病流式细胞免疫表型分析及意义

目的探讨多参数流式细胞仪检测急性白血病免疫表型及临床意义。方法采用多参数流式细胞术方法检测104例急性白血病患者的免疫表型并分析其比较AL各类型白血病免疫表型的表达情况及与完全缓解率(CR)的关系。结果①104例AL患者以系列专一表达为主,同时存在抗原交叉表达,M3极少表达CD34、HLA-DR。HAL主要为髓/B混合表达,未检测到T系表达;②AML中,CD34 、HLA-DR 组的CR率低于阴性组患者的CR率(P<0.05);CD33 组的CR率明显高于CD33-组(P<0.05)。Ly AML的CR率(50%)低于Ly-AML的CR率(86.8%)(P<0.05);My ALL的CR率与My-ALL的CR率无显著性差异(P>0.05);HAL组CR率(42.8%)低于ALL(95.6%)、AML的CR率(76.8%)(P<0.05)。结论①AL的免疫表型可提高AL的诊断率,HAL主要为髓系/B系混合表达;Ly -AML、CD34 -AML、HLA-DR -AML及HAL对化疗反应较差,预后不良,ALL中,髓系相关抗原的表达对CR没有影响。     

急性髓细胞白血病免疫分型和FAB分型的关系

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)免疫分型和FAB分型的关系。方法:对93例初治AML进行细胞形态学检查和免疫分型检查,免疫分型采用流式细胞术(FCM),并对2种检查结果进行分析。结果:93例AML中M1亚型1例,M2亚型68例,M3亚型13例,M4亚型3例,M5亚型4例,未分类4例;单表型74例,伴淋系抗原表达12例,双表型5例,未表型2例;细胞形态学确诊AML72例,诊断准确率为77.4%;免疫分型确诊AML91例,FAB分型结合免疫分型使诊断的准确率达到97.8%。结论:免疫分型在鉴别AML各亚型和杂合性白血病(HAL)方面具有重要作用,细胞形态学结合免疫分型可提高诊断准确率,弥补FAB分型的不足之处。     

初治成人急性白血病48例免疫表型分析

目的：探讨初治成人急性白血病(AL)的免疫表型的分布和特征。方法：用流式细胞仪—单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法检测初治成人AL48例骨髓细胞的免疫标志。结果：系列专一型占64．6％，其中急性髓细胞白血病(AML)中纯系表达占70．4％，急性淋巴细胞白血病(ALL)中纯系表达占63．2％；系列非专一型占25％，其中AML伴淋巴细胞系表达占22．2％，ALL伴髓细胞系表达31．6％；混合型占4．2％。结论：白血病细胞具有高度异质性；FAB分型(French—American—British Carcinoma staging)与免疫分型结合可互相补充，提高诊断率。     

成人急性白血病细胞三色流式细胞术的免疫分型

目的:探讨成人急性白血病(AL)细胞三色流式细胞术免疫分型的特点.方法:采用CD45/SSC双参数散点图设门方法、三色流式细胞术对197例急性白血病细胞进行免疫表型分析.结果:急性淋系白血病细胞均表达淋系抗原,46.7%和11.1%的成人ALL细胞表达CD13和CD33;急性髓系白血病细胞均表达髓系抗原,M3中只有1例表达CD34,HLA-DR均无表达;同时AML中有12例表达淋系抗原CD7,21例表达CD10;197例急性白血病中有11例(占5.6%)为杂舍型急性白血病(HAL),其中有6例B/M型.结论:CD45/SSC设门方法能排除骨髓中正常细胞的干扰,免疫表型的检测和研究对急性白血病的分型和明确诊断有帮助.     

成人急性白血病免疫表型特征分析及意义

采用活细胞间接免疫荧光技术 ,使用常规 8种抗CD单抗 ,测定 12 0例成人急性白血病免疫表型。结果显示免疫分型与FAB形态学分型有较高的符合率 ,但亦存在CD抗原在淋系或髓系交叉或反向表达、甚或不表达的情况。急性粒细胞白血病 (AML)M3 型和急性淋巴细胞白血病 (ALL)L3 型以及B淋巴系和T淋巴系ALL在免疫表型上各有其特点。部分免疫表型特征对提示预后有一定意义     

慢性粒细胞白血病不同病期形态学和免疫学诊断分型

目的 :探讨慢性粒细胞性白血病 ( CML )不同病期患者的形态学和免疫学表型联合诊断分型。方法 :应用间接免疫荧光法对 80例 CML 患者不同病期骨髓单个核细胞 ( MNC)进行形态学和免疫表型检测。 结果:CML慢性期、加速期、急变期 CD34 及 HL A- DR抗原表达阳性率分别为 3.6 %和 31% ,36 %和 73% ,6 2 %和 10 0 % ,慢性期与急变期相比差异有统计学意义 ( P <0 .0 5 ) ;CD1 5随疾病进展趋于递减 ,尤其在急变期明显低于慢性期和加速期( P均 <0 .0 5 ) ;急变期 13例中 11例表达 CD9+;部分急变期患者原始细胞无特征 ,既有淋系又有髓系特点 ;其免疫表型和形态学诊断符合率为 77%。结论:在急变类型和不同病期进展中显示出膜标记有决定性意义 ,而形态学和细胞化学方法也有免疫表型不可替代的作用。形态学、细胞化学 +免疫表型联合诊断可达到互补。     

流式细胞术在急性白血病细胞免疫表型分析中的价值

目的研究应用流式细胞技术对急性白血病进行免疫表型分析,为临床治疗和预后提供有价值的信息。方法运用双色免疫荧光抗体标记患者骨髓或外周血单个核细胞,用流式细胞仪分析白血病细胞膜免疫表型。结果分析75例急性白血病患者中,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者12例,占16.0%;急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者24例,占32.0%;急性髓细胞白血病(AML)患者37例,占49.3%。混合型急性HALL/B有2例,占2.6%。ALL患者除均表达淋系抗原外,同时伴有髓系统抗原的表达;AML患者除均表达髓系抗原外,少部分同时伴有淋系抗原的表达。AML细胞表面抗原表达百分率成人明显高于儿童(73%/27%)。结论流式细胞技术能准确地分析并鉴别出急性白血病各型别,是白血病诊断分型的重要手段之一。     

人细胞周期蛋白C在儿童急性淋巴细胞性白血病中的表达及对白血病细胞增殖的影响

目的：探讨人细胞周期蛋白C(Human cyclin C,CCNC)在儿童急性淋巴细胞性白血病（Acute Lymphocyte Leukemia, ALL）中的表达,并初步研究CCNC在体外对白血病细胞增殖的影响。方法：实时荧光定量PCR法检测CCNC在初治ALL、白血病细胞系及正常对照组中的表达,利用基因重组技术构建含有CCNC的全长的真核表达载体PCMV-2B-CCNC,用脂质体Lifefectamine2000将真核表达载体转染至人急淋细胞系6T-CEM细胞株中,Western-blot检测转染后的细胞CCNC蛋白的表达量,流式细胞分析CCNC对白血病细胞增殖的作用。结果：CCNC在对照组小儿、初治小儿ALL骨髓及6T-CEM细胞系中均有表达,在初治ALL中表达强度降低（P<0.05）。基因测序及重组质粒酶切后鉴定成功构建了PCMV-2B-CCNC真核表达载体,将其转染至6T-CEM细胞中,Western-blot检测到转染后的白血病细胞CCNC蛋白表达量增高,流式细胞结果表明在转染了CCNC基因的白血病细胞中,在细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰,细胞凋亡指数有所增高（P<0.05）。结论: CCNC在初治小儿ALL中出现较低的表达强度,在转染人白血病细胞后,具有诱导白血病细胞凋亡作用,有可能与儿童ALL的发病相关。 关键词：儿童急性淋巴细胞性白血病,细胞周期蛋白C     

111例儿童急性淋巴细胞白血病免疫分型与临床研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型与临床表现及疗效、预后的关系。方法应用流式细胞仪对111例初治儿童ALL进行免疫分型，比较不同免疫表型ALL的临床表现、强的松反应、首次诱导缓解率、达到完全缓解（CR）的治疗时间和预后情况。结果本组ALL中B细胞型81例（73．0％），T细胞型16例（14．4％），B/T混合表达14例（12．6％），My＋-ALL25例（22．5％），FAB分型与免疫分型无明显相关性；T—ALL患儿淋巴结、肝、脾明显肿大，纵隔肿块发生率及外周血WBC计数高于其它两型（P〈0．05），强的松反应敏感率、首次诱导CR率较低，达到CR的治疗时间长；B、T细胞型和BFF混合表达型ALL3年生存率分别为76．9％、75．0%和83.3％，三者无明显差异；My^＋-ALL与My^--ALL的CR率、三年生存率、复发率亦无显著差异。结论单纯免疫分型对白血病疗效及预后所提供的信息有限，应结合细胞遗传学、分子生物学、临床治疗反应等特点进行综合判断。     

恶性血液病Flt3基因内部串联重复突变分析

目的：研究Flt₃-ITD在恶性血液病中的突变及分布情况。 方法：采用PCR法检测103例恶性血液病患者基因组DNA Flt₃-ITD突变。结果：44例初治急性髓细胞白血病（AML）患者中8例发生Flt₃-ITD突变,突变率为18.2%,以M1型最高;急性淋巴细胞白血病（ALL）、骨髓增生异常综合征（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、非何杰淋巴瘤（NHL）及慢性髓细胞白血病（CML）均未检出Flt₃-ITD突变。 结论：Flt₃-ITD可作为AML重要分子标志。     

慢性粒细胞白血病骨髓巨噬细胞表达与细胞因子的相关性

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中巨噬细胞及白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-10、γ干扰素(INF-γ)的表达及相关性以明确其临床意义.方法 选择CML慢性期30例(CML-CP组)、加速期21例(CML-AP组)、急变期20例(CML-BP组)、经治疗后完全缓解的患者44例、未缓解7例以及30例缺铁性贫血患者(对照组),采用免疫组化染色法检测上述各组患者骨髓组织中CD68、CD163的表达变化;应用流式细胞仪分析相应患者骨髓IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ表达;比较骨髓巨噬细胞在CML患者不同时期骨髓组织CD68、CD163的表达差异与IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ表达变化的关系.结果 CML各组患者骨髓组织中CD68、CD163均有不同程度的表达,且随着病情的进展表达逐渐增高,即对照组＜CML-CP组＜CML-AP组＜CML-BP组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);同时,CD163与CD68阳性细胞数密切相关(P＜0.05).与对照组比较,CML-CP组骨髓IL-2、INF-γ明显降低(P＜0.05),IL-1β、IL-4、IL-10表达明显升高(P＜0.05);随着病情进展,IL-2、INF-γ表达逐渐降低,即对照组＞CML-CP组＞CML-AP组＞CML-BP组,其组间差异有统计学意义(P＜0.05),且与CD163表达呈负相关;IL-1β、IL-4、IL-10表达逐渐升高,对照组＜CML-CP组＜CML-AP组＜CML-BP组,组间差异有统计学意义(P＜0.05),并与CD163表达呈正相关.患者经治疗完全缓解后,CD68及CD163仍高于对照组(P＜0.05);IL-2、INF-γ有所回升,但仍低于对照组(P＜0.05),IL-1β、IL-4、IL-10有所降低,同样也高于对照组(P＜0.05).未缓解组所测指标与CML-BP组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 巨噬细胞在CML患者骨髓中的异常浸润并逐渐从M1型向M2型巨噬细胞激化及IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的异常表达,改变了正常骨髓微环境,有利于白血病细胞的生存和增殖分化,可能与CML的发生、发展相关.     

急性白血病的形态、细胞化学、免疫分型及MPO mRNA表达

目的:进一步了解急性白血病 ( AL)形态、细胞化学、免疫分型及髓过氧化物酶基因 ( MPO m RNA)表达。方法:采用细胞形态学、细胞化学染色、间接免疫荧光法和链亲和素 -胶体金原位杂交法对 137例 AL 患者进行分型。结果 :4 1例急性淋巴细胞性白血病 ( AL L)中有 5例表达髓系抗原 ,7例 MPO m RNA表达为阳性 ;91例急性髓系白血病 ( AML)中有 8例表达淋系抗原 ,所有髓系均不同程度的表达 MPO基因。 5例为 FAB不能分类的 AL( U AL) ,其中 1例表达淋系抗原 ,2例表达髓系抗原 ,3/ 5例 MPOm RNA为阳性。 结论 :联合分析 AL 形态学、细胞化学、免疫学及 MPO m RNA表达等特点 ,对于 AL 的诊断和指导治疗均有重要意义。此分型弥补了 FAB分类法的不足     

FAB分型及免疫表型在POX阴性急性白血病中的诊断价值

目的：研究FAB分型及免疫表型在过氧化物酶染色(POx)阴性急性白血病(AL)诊断中的诊断价值。方法：先取POx阴性AL住院患者，选择符合条件的病例，骨髓涂片经瑞氏染色后分类计数，并经POx、PAS、CE、AE NaF、NAP积分等细胞化学染色检查；免疫表型采用流式细胞仪测定；根据EGIL之积分标准诊断杂合型急性白血病。结果：38例POx阴性AL患者，FAB分型诊断为ALL33例，AML5例；免疫表型诊断为ALL28例，AML6例，HAL4例。结论：POx不能作为区分AML和AML的惟一凭据，对Pox阴性的AL，有必要予CE、AE NaF，NAP积分等其他化学染色结合免疫表型检查，才能提高诊断的准确性，以免误诊。     

急性白血病患者白血病细胞CD19和CD20反应谱分析

目的 观察CD19和CD20在急性白血病 (AL)细胞中的表达与分布 ,为免疫毒素导向治疗药物的合理应用提供依据。方法 采用27个直接荧光素标记的单克隆抗体 (单抗 )及CD45/SSC双参数设门多色流式细胞术对321例AL患者白血病细胞进行免疫学诊断和分型 ,并对CD19和CD20在各种类型AL细胞中的表达情况进行分析。 结果 在116例B系ALL患者中 ,CD19持续稳定表达 ,其阳性率(99.1%)高于CD20阳性率(28.4%,P=0.001) ;在17例具B系特征的杂合型白血病 (HAL)细胞中 ,CD19阳性率也明显高于CD20(P<0.01) ,而在29例T细胞系ALL和7例T/MyHAL细胞中 ,两者均无表达。在152例急性髓系白血病(AML)细胞中 ,CD19和CD20阳性率均很低 ,分别为7.2%和2.0%。 结论 CD19在B细胞系细胞的各分化阶段上持续稳定表达 ,且反应谱比CD20宽 ,CD19免疫毒素可能成为治疗大多数B系ALL的最佳选择。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对HePG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察核心蛋白对细胞增殖和细胞周期调控的影响。方法 观察表达HCV核心蛋白的细胞株HePG2-C和作为对照的细胞株HePG2-CMV的细胞形态;绘制细胞生长曲线;检测细胞周期;用流式细胞仪、免疫组化染色检测PCNA,P16,P27,P53;半定量RT－PCR检测P16,P27,P53mRNA。结果 转染重组质粒PBK－HVCC的HePG2-C细胞与转染空载体PBK－CMV的HePG2-CMV细胞相比细胞形态未见明显变化。生长曲线显示HePG2 细胞在转染PBK-HCVC和空载体PBK－CMV后,生长速度无明显变化。检测转染空载体的细胞HePG2-CMV 81.3%进入G0／G1期,7．7％进入S期;而转染PBK－HCV C的细胞HePG2-C73%进入G0／G1期,13．7％进入S期。在进一步分子机制的探讨中发现HePG2-C细胞PCNA、P53表达显著增加,P16、P27表达显著降低。 同样的变化也发生在转录水平。结论 HCV核心蛋白可能通过调节某些基因的转录与表达,增加细胞DNA合成,扰乱细胞周期,进而参与致癌过程。