大黄灵仙胶囊对胆结石防治作用机制的实验研究

目的 运用现代医学实验方法,从生物化学、分子生物学水平研究和探讨大黄灵仙胶囊对胆结石的防治作用机制.方法 选健康新西兰大白兔共80只,分为模型组、大黄灵仙组、消炎利胆组和正常对照组4组,每组20只.模型组、大黄灵仙组、消炎利胆组进行慢性肝损伤造模,完成后大黄灵仙组和消炎利胆组分别予大黄灵仙胶囊（制作成悬液）、消炎利胆片（制作成悬液）灌胃;模型组和对照组以等量生理盐水灌胃.6周后取材,观察、比较胆囊成石情况;检测各组兔血清相关指标;检测兔肝组织总RNA和肝组织中CYP7A1mRNA和acbc11mRNA基因表达相对量.结果 大黄灵仙组在降低胆固醇含量、增加胆汁酸含量方面结果 优于消炎利胆组;模型组兔肝组织中CYP7A1和acbc11基因表达显著下调,分别只有正常组的54.0%和49.9%;大黄灵仙组、消炎利胆组兔肝组织CYP7A1mRNA和胆汁酸盐输出泵acbc11mRNA表达量亦比正常组下降,但却比模型组有明显上升趋势,同时比较二者治疗结果,大黄灵仙组优于消炎利胆组（P〈0.05）,特别是在改善acbc11基因表达方面更具优势.结论 大黄灵仙胶囊能够修复受损肝细胞,稳定肝细胞CYP7A1、胆汁酸盐输出泵acbc11的基因表达,改善肝脏胆固醇代谢和胆汁酸代谢等,有效地保护了肝脏功能,起到了减少和预防结石形成的作用.     

大黄灵仙胶囊预防保胆取石术后结石复发的基础与临床研究

目的通过临床研究观察验证大黄灵仙胶囊降低保胆取石术后复发率的影响作用,探讨大黄灵仙胶囊预防胆结石复发的作用机制。方法建立胆石症豚鼠模型,模拟结石形成过程,给豚鼠喂养脂餐,比较各组胆囊结石形成率,病理切片观察胆囊炎症情况,利用免疫组化检测各组豚鼠肝组织中胆固醇7a-羟化酶(CYP7A)表达的情况。将接受保胆取石手术患者分组,定期随访术后情况,B超检测胆囊壁厚度、有无胆囊结石复发及胆泥形成情况、临床症状改善情况。结果服用大黄灵仙胶囊组豚鼠成石率12.50%,明显低于对照组55.00%,解剖发现服用大黄灵仙胶囊组豚鼠的胆囊黏膜炎症明显轻于未服药物组。检测发现,大黄灵仙胶囊组肝组织中CYP7A阳性表达率为(67.5±5.87)%,高于未服药物组(31.8±4.59)%。大黄灵仙胶囊组的保胆取石术后患者随访1年后,结石复发率明显低于未服药组,症状及胆囊炎症改善情况明显优于未服药组。结论大黄灵仙胶囊具有较好的预防结石形成作用,其主要机制可能为抑制胆囊黏膜炎症及上调肝组织中CYP7A;同时在临床实验中,B超的随访提示胆囊收缩功能较术前有所改善,二者表明,保胆取石术后病人中,大黄灵仙胶囊可能有提高胆石症手术的疗效,降低胆石症术后残石率及复发率的作用。     

Drp1缺失通过ABCB10激活线粒体未折叠蛋白反应

目的：在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中探讨动力相关蛋白1(dynamin related protein 1, Drp1)基因缺失激活线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,mtUPR)的分子机制。方法：采用不同浓度 (0、2.5、5.0、10.0mmol/L)3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)处理Drp1敲除或敲低的MEF细胞、Drp1抑制剂Mdivi-1或选择性阻断Drp1与下游蛋白相互作用的小分子多肽P110处理的MEF细胞以及相应对照,随后进行Western blot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、ATP 结合盒 B 亚家族成员 10(ATP binding cassette subfamily B member 10,ABCB10)、Lon肽酶1(Lon peptidase 1,LONP1)以及热休克蛋白60(heat shock protein 60,Hsp60) 的表达。RT-qPCR 检测Drp1敲低或Mdivi-1处理后MEF细胞的ABCB10的mRNA水平。同时敲低Drp1和ABCB10,Western blot检测CHOP蛋白的表达,试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,流式细胞术检测线粒体活性氧和线粒体膜电位水平。结果：3-NP处理后,Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中CHOP表达呈现倍数上调。Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中ABCB10蛋白表达上调,mtUPR效应蛋白LONP1和 Hsp60表达上调。Drp1敲低的MEF细胞和Mdivi-1处理的MEF细胞中ABCB10 mRNA水平上调。同时敲低Drp1和ABCB10后, 与Drp1敲低组相比,CHOP表达下调,LDH含量降低,线粒体活性氧水平降低,线粒体膜电位水平增加。结论：在MEF细胞中, Drp1表达下调可引起ABCB10表达量增加,导致mtUPR关键蛋白CHOP、LONP1和Hsp60蛋白表达上调,进而激活mtUPR。     

探讨乙酰化酶Sirtuin-2对巨噬细胞Melanocortin 1受体表达的影响

目的：探讨去乙酰化酶Sirtuin-2 (SIRT2)对巨噬细胞Melanocortin 1受体表达的影响。方法：体外培养小鼠巨细胞株RAW264.7巨噬细胞，随机分为空白对照组（A组）、SIRT2慢病毒过表达对照组（B组）、SIRT2慢病毒过表达组（C组）、SIRT2 RNA干扰组（D组），每组加入氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导分化为泡沫细胞共培养24 h。采用实时荧光定量（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）检测各组细胞SIRT2 mRNA和SIRT2蛋白含量，油红O染色观察细胞内脂质含量，高效液相色谱检测细胞内胆固醇含量，免疫印迹方法分别检测细胞内Melanocortin 1受体、三磷酸腺苷结合盒转运子A1 (ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运子G1 (ABCG1)表达的变化。结果：与A组相比，B、C、D组诱导的油红O染色阳性巨噬细胞数明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）。与B组和D组相比，C组巨噬细胞SIRT2蛋白表达水平增强,细胞内ABCA1、ABCG1表达增强，Melanocortin 1受体表达上调，差异有统计学意义（P<0.0...     

川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的：观察川芎嗪（四甲基吡嗪）对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响，揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法：采用细胞增殖（CCK8）实验，分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性，计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性，遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞，模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞；空白组和模型组均用1640完全培养基孵育，实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育，阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA，用免疫印迹法（Western Blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果：A549细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（28.33±3.19）μM,A549/DDP对顺铂的IC50为（983.43±101.67）μM,A549/DDP的耐药指数为34....     

miRNA-145通过靶向调节ABCC1增强胃肠道间质瘤细胞对伊马替尼的敏感性*

目的：探讨miRNA-145(miR-145)通过调控三磷酸腺苷结合盒转运蛋白亚家族C成员1(adenosine triphosphate binding cassette subfamily C member 1, ABCC1)的表达介导胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor, GIST)细胞对伊马替尼敏感性的影响。方法：实时定量聚合酶链式反应法(real time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测间质瘤细胞株GIST-T1及伊马替尼耐药株GIST-TI-R中miR-145的表达水平；脂质体转染法将miR-145 mimic转染至GIST-TI-R细胞，RT-PCR检测GIST-TI-R细胞中miR-145水平；双荧光素酶报告基因实验检测miR-145对ABCC1的调节作用；Western Blot检测ABCC1蛋白水平的变化；细胞增殖试验(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞药物敏感性的改变。结果：相比于GIST-T1细胞，miR-145在GIST-TI-R细胞中表达下调，而ABCC1蛋白表达上调；过表达miR-145后，GIST-T1-R细胞中ABCC1表达降低，且miR-145可以靶向调节ABCC1的3′非编码区；miR-145过表达组GIST-T1-R细胞的药物敏感性显著增加。结论：miR145可通过下调ABCC1的表达，增强GIST-T1-R细胞对伊马替尼的药物敏感性。     

miR-338-5p过表达对胃癌细胞进展及耐药基因表达的影响

目的 探讨miR-338-5p过表达对胃癌细胞侵袭和耐药性的影响。方法 人胃癌细胞MKN-45分为mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组，分别转染miR-338-5p-mimics、miR-338-5p-inhibitor及其NC质粒，未行转染的人胃癌细胞MKN-45为对照组。在转染培育24 h后，用CCK-8检测细胞的增殖活性，体外侵袭实验测定细胞的迁移及侵袭能力；使用qRT-PCR检测各组细胞中的耐药基因P-糖蛋白(PGP)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白B2(ATP-binding cassette transporter B2,ABCB2)和G2(ABCG2)相关mRNA的表达；Western blot测定各组细胞中的第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten, PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)和磷酸化蛋白激酶B(phosphoprotein kinases B, p-AKT)蛋白表达。结...     

cAMP/Epac/Rap1信号通路调控NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF及酸枣仁皂苷A的作用研究

目的 研究环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷结合蛋白(Epac)/Ras相关蛋白1(Rap1)信号通路是否参与调控NG2细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑源性神经营养因子(BDNF)及酸枣仁皂苷A(JuA)的作用。方法 体外培养NG2细胞，分为对照组、百日咳毒素(PTX)组、非环状核苷酸Epac拮抗剂(ESI-09)组、酸枣仁皂苷A(JuA)组、艾司唑仑(阳性药)组。采用CCK-8法检测不同浓度JuA对NG2细胞存活率的影响，RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA及蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，PTX组降低IL-1β和TNF-α mRNA和蛋白的表达(P<0.01),增加BDNF和cAMP mRNA和蛋白的表达(P<0.01);ESI-09组增加IL-1β和TNF-α mRNA和蛋白的表达(P<0.05),降低BDNF、Epac和Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);JuA组、阳性药组均增加IL-1β、TNF-α、BDN...     

Ⅰ型鼠尾胶原三维培养模型对乳腺癌细胞耐药性的影响研究

【摘要】目的 探讨基质材料Ⅰ型鼠尾胶原三维（3D）培养对乳腺癌细胞MCF 7耐药性的影响。方法 根据细胞培养方法的差异将细胞分为2D组及3DⅠ型鼠尾胶原培养组。CCK8实验检测MCF 7在2D和3D组中对顺铂和紫杉醇的药物敏感性;采用流式细胞术检测MCF 7在各组中的干性表面标记CD44+/CD24-细胞亚群比例及细胞周期分析;荧光定量PCR（qPCR）检测各组MCF 7的肿瘤细胞干性标记SOX2和KLF4的表达,以及耐药性相关ABC转运蛋白ABCC1和ABCB1的表达。结果 与2D组相比较,MCF 7在3DⅠ型鼠尾胶原培养模型中的耐药性显著增强;同时,流式细胞结果显示3D组CD44+/CD24 亚群细胞比例高于2D组,且细胞周期出现G1期阻滞。qPCR结果显示较2D组细胞,3D胶原组细胞的干性相关指标SOX2和KLF4,耐药相关ABC转运蛋白ABCC1和ABCB1 mRNA的表达显著提高。结论Ⅰ型鼠尾胶原3D培养后乳腺癌细胞MCF 7干性增加,细胞周期G1期阻滞,耐药性增强。Ⅰ型鼠尾胶原可望作为新的3D药物筛选模型并用于抗耐药性肿瘤细胞意义重大。     

三磷酸腺苷对小鼠内源性β防御素2表达的作用研究

目的 研究三磷酸腺苷(ATP)对小鼠内源性β防御素2(mice β-defensin-2 mBD-2)表达的影响,探讨提高机体抗感染防御能力的途径和方法。方法 取60只小鼠为研究对象,随机分为对照组(N,30只)和实验组(T,30只),实验组小鼠每只体内注入相同剂量的ATP,对照组小鼠注射等剂量的生理盐水,于注射后不同时间段12h(T1组)、24h(T2组)、36h(T3组)分别(10只/组)提取小鼠肺组织,检测内源性mBD-2mRNA的表达,同时制作肺组织病理标本,用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中mBD-2蛋白的表达。结果 与对照组相比,经ATP处理后,实验组小鼠内源性mBD-2 mRNA的表达出现不同程度的上调,差别有统计学意义(P＜0.01)。实验组间比较,T2组mBD-2 mRNA表达水平较T1组高,差别有统计学意义(P＜0.01);T2组mBD-2 mRNA表达水平较C组高,差异具有统计学意义(P＜0.05);mBD-2 mRNA表达水平在T1组和T3组之间无差异,无统计学意义(P＞0.01)。免疫组化结果提示经ATP作用后,实验组小鼠肺组织中mBD-2蛋白表达上调,在24h达强阳性,与12h和36h相比有显著差异(P＜0.05)。结论 体内注射外源性ATP可以上调小鼠肺组织mBD-2 mRNA的表达,且mBD-2 mRNA及mBD-2蛋白的表达随ATP作用时间的不同而不同,其在24h时表达水平达到峰值。     

鼻咽癌中ABC转运蛋白基因表达的研究

目的 探讨10种耐药相关的ABC转运蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义.方法 采用实时荧光定量PCR,检测10种耐药相关的ABC转运蛋白在25例鼻咽癌组织中的表达水平,并与其在正常鼻咽组织中的表达进行比较分析.结果 10种耐药相关的ABC转运蛋白在鼻咽癌组织中均有不同程度的表达,其中ABCA2、ABCC3在鼻咽癌组织及鼻咽正常组织中均高表达;ABCC1、ABCC5及ABCG2在鼻咽癌组织中的表达高于其在正常鼻咽组织中的表达.并有统计学差异;而ABCB1、ABCC2、ABCC3、ABCC4、ABCC6及ABCC11在两类样本中均为低表达.结论 在鼻咽组织中高表达的转运蛋白与鼻咽癌的天然耐药性有关;在鼻咽癌组织中高表达,而在正常鼻咽组织中表达显著降低的ABC转运蛋白很可能在鼻咽癌对化疗的耐药中起着重要作用,在鼻咽癌组织及正常鼻咽组织中均低表达的转运蛋白的转运药物则可能是鼻咽癌化疗的敏感药物.     

精元康胶囊对齐多夫定致骨髓抑制小鼠骨髓Notch信号通路的影响

目的:观察精元康胶囊对齐多夫定(azidothymidine,AZT)所致骨髓抑制小鼠骨髓Notch信号通路中jag1 mRNA、numb1 mRNA和numb2 mRNA表达情况的影响,探究精元康胶囊治疗骨髓抑制相关作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种小鼠70只,按照随机数字表法分为空白对照组(简称空白组)、模型组、利可君片组(简称利可君组)、贞芪扶正胶囊组(简称贞芪组)、精元康胶囊高剂量组(简称精高组)、精元康胶囊中剂量组(简称精中组)、精元康胶囊低剂量组(简称精低组),每组10只,分别给予不同药物处理,连续14 d。断颈处死小鼠,分离右股骨,制备骨髓单细胞悬液,运用实时荧光定量PCR法检测Notch信号通路中jag1 mRNA、numb1 mRNA和numb2 mRNA的表达情况。结果:(1)与空白组比较,小鼠经AZT造模后,模型组及各药物组Notch信号通路中jag1 mRNA表达明显升高(P0.05)。与模型组比较,各药物组jag1 mRNA表达水平均明显下降(P0.05)。精高组、精中组效果明显优于贞芪组、利可君组(P0.05),而精低组、利可君组、贞芪组3组之间无显著差异(P0.05)。(2)与空白组比较,模型组及各药物组numb1 mRNA表达明显降低(P0.05)。与模型组比较,各药物组numb1 mRNA表达水平均明显升高(P0.05)。精高组、精中组numb1 mRNA表达水平明显高于贞芪组、利可君组(P0.05),而精低组numb1 mRNA表达水平低于利可君组、贞芪组。(3)与空白组比较,模型组及各药物组numb2 mRNA表达明显降低(P0.05)。与模型组比较,各药物组numb2 mRNA表达水平均明显升高(P0.05)。精高组numb2 mRNA表达水平明显高于贞芪组、利可君组(P0.05),精中组numb2 mRNA表达水平与贞芪组、利可君组相当(P0.05),而精低组numb2 mRNA表达量低于利可君组、贞芪组。结论:精元康胶囊可下调骨髓抑制小鼠增高的jag1 mRNA的表达量,同时使原本降低的numb1 mRNA、numb2 mRNA的表达升高,使激活的Notch信号通路得到抑制,进而促进骨髓造血功能的恢复,且呈现剂量依赖性。     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

干扰AURKA基因表达对人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨AURKA基因表达下调对骨肉瘤细胞增殖和细胞周期分布的影响?方法:脂质体瞬时转染法介导AURKA 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)处理骨肉瘤U2-OS细胞, 采用实时荧光定量PCR及 Western blot方法检测转染前后AURKA mRNA和蛋白表达,CCK8实验检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测周期相关蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)细胞增殖实验检测细胞增殖情况?结果:AURKA siRNA作用U2-OS细胞后, AURKA mRNA和蛋白的表达水平较正常对照组及阴性对照组显著降低,且差异有统计学意义 (P < 0.05),两对照组间AURKA表达无明显差异;下调AURKA表达后,细胞活力降低,且作用72 h后抑制率最高,约为(36.63 ± 2.38)%;细胞周期中S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例增加,与正常对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05),提示存在G2/M期阻滞,S期细胞增殖率下降(P < 0.05),周期相关蛋白D1(Cyclin D1)表达水平下降(P < 0.05),周期相关蛋白B1(Cyclin B1)表达水平明显增加(P < 0.05)?结论:下调AURKA表达可抑制骨肉瘤细胞U2-OS的增殖, 同时导致细胞阻滞于G2/M期?     

不同层次穴位埋线调节单纯性肥胖大鼠外周脂肪代谢的机制研究

目的 探讨不同层次穴位埋线调节单纯性肥胖外周脂肪代谢的机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组（A组）10只普通饲料喂养,模型组50只高脂饲料喂养。模型复制成功后,将模型组大鼠随机分为空白组（B组）、脂肪层埋线组（C组）、肌肉层埋线组（D组）、脂肪层埋线+AG490组（E组）、肌肉层埋线+AG490组（F组）,每组10只。给予不同的埋线治疗后,比较各组JAK2、STAT3、SOCS3、LEP-R mRNA和蛋白相对表达量。结果B、E、F组脂肪组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量低于A组（P <0.05）;C、D组JAK2、STAT3mRNA和蛋白相对表达量高于B组（P <0.05）;E、F组与B组脂肪组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P>0.05）;D、E、F组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量低于C组（P <0.05）;E、F组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量低于D组（P <0.05）。B、C、D、E、F组脂肪组织SOCS3mRNA相对表达量高于A组（P <0.0...     

头痛宁胶囊对偏头痛大鼠中脑降钙素基因相关肽表达的影响

目的 探讨头痛宁胶囊干预偏头痛大鼠,对模型大鼠中脑降钙素基因相关肽(CGRP)基因表达的影响,及头痛宁胶囊对内源性痛觉调制系统功能的干预作用。方法 将24只健康成年Wistar大鼠随机分为对照组(A组),偏头痛组(B组),头痛宁胶囊对照组(C组),头痛宁胶囊治疗组(D组),每组6只。C、D组给予头痛宁胶囊0.375 g/(kg·d)灌胃7 d,之后B、D组大鼠制备硝酸甘油型偏头痛大鼠模型,造模2 h处死大鼠,取中脑组织。采用实时定量PCR检测各组大鼠中脑CGRP mRNA拷贝数。结果 A、B、C、D组大鼠中脑每250 ng总RNA中脑CGRP mRNA拷贝数分别为:(1.13±0.68)×104、(1.61±0.51)×104、(0.80±0.45)×104、(0.75±0.27)×104。A组与B组、C组与D组大鼠中脑CGRP mRNA拷贝数比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C、D组大鼠中脑CGRP mRNA拷贝数明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 头痛宁胶囊可以降低偏头痛发作时中脑CGRP基因的表达,发挥治疗偏头痛的作用。     

Mechanism of Hewei Jiangni Capsule(和胃降逆胶囊)Regulating Proliferation and Apoptosis of Human Gastric Cancer AGS Cells Through PI3K/AKT Signaling Pathway

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况.结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义.在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低.各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P＜0.05),且呈现出浓度相关性.结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡.     

高脂饮食大鼠肾脏HMGCS2表达及调控研究

目的 探讨高脂饮食大鼠肾脏3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A合成酶2（HMGCS2）表达及可能调控机制。方法 断乳Wistar 雄性大鼠27只分为3组：正常对照组（CON）、高脂组（HFG）、绿茶多酚（green tea polyphenols,GTPs）组（G）。CON组大鼠喂养普通饲料,HFG组及GTPs组给予高脂饲料,GTPs组同时自由摄食绿茶多酚浓度为1.6g/L水溶液。26周后测定空腹血糖（FPG）、血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）。免疫印迹法测定肾脏HMGCS2和Sirt3蛋白表达水平。结果 与CON组比较,HFG组大鼠体重和脂肪系数升高,血清FPG、TC、TG、LDL-C/HDLC均升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与HFG组比较,GTPs降低大鼠体重和脂肪系数,差异有统计学意义（P<0.05）,GTPs组血清FPG、TC、TG、LDL-C/HDLC均不同程度降低,差异有统计学意义（P<0.05）。与CON组比较,肾脏组织HMGCS2的表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与HFG组比较,GTPs组增加肾脏HMGCS2的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。高脂饮食、正常饮食和GTPs干预后,大鼠肾脏组织Sirt3蛋白表达差异无统计学意义。结论 高脂饮食可降低肾脏组织HMGCS2表达,绿茶多酚可逆转此效应;高脂饮食及绿茶多酚对肾脏组织HMGCS2表达的调控不经Sirt3途径。     

不同的通气方式对大鼠肺和肺内毒素受体CD14表达的影响

目的观察不同的通气方式对大鼠肺及对内毒素受体CD14的影响。方法将成年雄性SD大鼠随机分为4组(每组12只):自主呼吸组(R组),不给予机械通气;机械通气组(M组),潮气量(Vt)=12ml/kg,呼气末正压(PEEP)=8mmHg;保护性机械通气组(P组),Vt=6ml/kg,PEEP=0mmHg;大潮气量机械通气组(N组),Vt=40ml/kg,PEEP=0mmHg。每组中6只大鼠实验开始2h后注射50mg/kg伊万斯蓝(EB)。分别于机械通气前(基础值)及机械通气1、2、3h行动脉血气分析,实验3h结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺病理形态学积分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)炎性细胞数、血管壁通透性。酶联免疫分析法(ELISA)测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)及巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)浓度。RT-PCR测肺组织内毒素受体CD14的表达,免疫组化法测BALF单核细胞的CD14表达。结果肺病理形态学积分:R组和P组无变化,M组有轻度升高,N组明显高于M组(分别为6·0±1·6、0·7±0·8,t=8,P=0·000)。肺W/D:与R组比较,P组和M组差异无统计学意义;N组高于R组(分别为5·73±0·39、4·91±0·24,t=4·38,P=0·000)。EB:与R组比较,P组和M组差异无统计学意义;N组明显高于R组(分别为84·50±3·01、32·33±1·75,t=36·63,P=0·000)。BALF中WBC:与R组比较,P组无显著变化;M组高于R组(分别为0·83±0·12、0·59±0·62,t=4·272,P=0·02),N组明显高于R组(分别为5·68±0·45、0·59±0·62,t=26·68,P=0·000)。TNF-α在4组都没有测到。MIP-2:P组(35·4±5·3)与R组(31·5±2·4)比较,差异无统计学意义,M组(44·7±6·9)升高(t=4·382,P=0·04),N组(167·7±11·8)明显升高(t=27·779,P=0·000)。BALF中单核细胞的CD14蛋白表达和肺组织CD14基因表达:R组和P组二者表达基本一致,M组蛋白表达与R组差异无统计学意义,但基因表达升高;N组二者表达都显著升高(P=0·000)。结论常规机械通气导致大鼠肺部发生轻度损伤,并可使肺部CD14基因表达上调,但是肺部CD14蛋白表达无改变;大潮气量机械通气导致大鼠的肺部损伤,使肺部CD14表达明显上调。保护性机械通气可使大鼠肺部避免上述改变的发生。     

龙葵素通过诱导细胞周期G1/S阻滞抑制裸鼠前列腺癌细胞Du145移植瘤生长

目的探讨龙葵素对前列腺癌细胞Du145 裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制。方法采用高度恶性的转移前列腺癌 细胞株Du145 作为动物体内实验的模型,裸鼠皮下接种Du145 细胞建立裸鼠皮下瘤模型。1 周后将接种的裸鼠随机分为2 组：龙葵素实验组和生理盐水空白对照组,每3 d 分别向实体瘤中间部位注射0.2 mL龙葵素（50 μg/mL）和生理盐水,观察裸 鼠体内肿瘤生长,3 周后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离肿瘤组织,测量肿瘤的重量并根据肿瘤重量计算抑瘤率。实时荧光定量 PCR和Western blotting 技术检测各组裸鼠瘤体细胞周期相关基因mRNA和蛋白表达。Tunel 原位检测各组裸鼠瘤体组织凋 亡情况。结果龙葵素治疗组裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显低于对照组（P<0.01）。龙葵素能抑制瘤体 细胞CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4 和CDK6 基因mRNA和蛋白的表达,显著升高p21 基因mRNA和蛋白的表达,龙葵素 干预后裸鼠瘤体组织凋亡显著增加（P<0.01）。结论龙葵素可通过调控细胞周期G1/S 关卡促进组织细胞凋亡抑制前列腺 癌细胞裸鼠移植瘤生长。