白血病细胞中端粒酶抑制因子Pinx1的表达与端粒酶活性关系的研究

目的：研究端粒酶抑制因子Pinx1在急性白血病细胞中的表达和在急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中的表达改变，分析其表达与端粒酶逆转录酶hTERT表达的关系，以了解白血病细胞中Pinx1对端粒酶的作用及可能机制。方法:荧光定量RT-PCR检测30例急性白血病细胞中Pinx1与hTERT mRNA的表达，进一步在ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中检测Pinx1及hTERT mRNA表达，分析两者之间的相关性。结果:Pinx1在急性白血病细胞中的表达（0.00312，5.42×10-4-0.024）明显高于正常人骨髓单个核细胞（7.89×10-4，0-0.00863，P＜0.01），与hTERT的表达呈正相关（r=0.296,P＜0.05）。Pinx1表达随NB4细胞分化逐渐下降，与hTERT呈正相关（r=0.900,P＜0.05） 。结论：Pinx1虽然为端粒酶活性的抑制因子，但在白血病细胞中与端粒酶活性的调控方向一致，提示Pinx1的表达改变可能是继发于hTERT的一种负反馈反应，目的是保持端粒酶活性的稳定，具体机制尚待进一步研究。     

三氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究

目的 研究锑剂三氧化二锑（Sb2O3)对早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的诱导作用，以寻求早幼粒细胞白血病治疗的新方法。方法 采用细胞生长曲线，形态学及硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验，判定NB4细胞的生长，分化及功能。采用细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果 Sb2O3能诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间，剂量依赖性。结论 Sb2O3能有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示锑剂诱导细胞半亡的疗法，有望成为临床治疗早幼粒细胞白血病的新方法。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡过程中对细胞内活性氧和Ca2+水平影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡、活性氧(ROS)及Ca2+水平等的影响。 方法： 采用不同浓度SeO2（3-30 μmol/L）分别处理3种白血病细胞，用流式细胞术测定细胞凋亡率、细胞中ROS和Ca2+的水平。 结果： 10和30 μmol/L SeO2能抑制3种细胞增生，30 μmol/L SeO2作用48 h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡。同时下调细胞内ROS和Ca2+水平。NB4和HL-60细胞中ROS阳性细胞比例随SeO2浓度增加而减少，K562中只有30 μmol/L SeO2才能使ROS出现明显下降。10、30 μmol/L SeO2能使NB4和HL-60细胞内Ca2+水平逐步下降。K562中只有30 μmol/L SeO2才能使细胞内Ca2+水平出现明显下降。 结论： SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及细胞内ROS及Ca2+水平下降。     

亚硒酸钠诱导的人白血病耐药细胞株MR2的生长抑制及凋亡

本文以人急性髓系白血病M3型耐药细胞株（抗全反式维甲酸ATRA）MR2为研究对象，通过细胞生长增殖分析，细胞凋亡相关指标的检测，细胞内活性氧自由基含量的测定等，探讨亚硒酸钠对MR2细胞的凋亡诱导作用及其作用机制。结果发现：（1）亚硒酸钠浓度大于10μmol/L时对细胞株有明显的生长抑制作用，大于20μmol/L时有明显的凋亡作用，并呈剂量时间依赖性增加。40μmol/L的亚硒酸钠作用细胞60h后，可使凋亡百分率超过80％；（2）亚硒酸钠作用细胞一定时间后可使胞内自由基水平增加，并在24h时出现最大值，以上结果表明亚硒酸钠对MR2细胞的生长抑制及凋亡诱导作用可能是通过氧化应激实现的。     

初发急性髓性白血病患者外周血中高表达TAL1基因及其意义

目的:分析调控造血分化的重要转录因子TAL1在急性髓性白血病(AML)细胞株及原代AML细胞中的表达特点。方法:利用real-time PCR法分别检测47例初发急性髓性白血病患者外周血单个核细胞以及急性白血病细胞株(Jurkat、CCRF-CEM、HL-60和NB4细胞株)中TAL1 mRNA的水平,并以12例健康志愿者外周血样本作为对照组。结果:TAL1 mRNA在AML细胞株(HL-60和NB4)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株(Jurkat和CCRF-CEM)和原代AML细胞中的水平均显著高于健康对照组(P0.05)。各AML亚型中TAL1的mRNA表达水平均较对照组显著升高,并以AML-M1和AML-M5 2个亚型升高最为明显(P0.05)。结论:AML细胞中TAL1异常高表达可能与其影响粒系的分化发育有关,其能否作为AML发病相关分子标志物有待进一步研究。     

对比硫化砷对两种白血病细胞株凋亡和hTERT-mRNA表达的影响

目的:对比硫化砷对慢性粒细胞白血病细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4两种细胞的作用是否存在差异及其机制.方法:PCR-ELISA法测定端粒酶活性;半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达;流式细胞术测量细胞周期、凋亡.结果:0.15～0.6 mg/L硫化砷(72 h)可在诱导NB4细胞凋亡的同时,下调细胞端粒酶活性和hTERT-mRNA表达,同样作用对于K562细胞需要硫化砷浓度达到0.3～3 mg/L.0.3 mg/L硫化砷(72 h)可引起NB4细胞出现G2/M期细胞比例增高.而K562细胞需要在1.5mg/L硫化砷诱导下出现G2/M期细胞比例增高.结论:端粒酶系统可能是硫化砷诱导NB4和K562细胞凋亡的途径之一;由硫化砷诱导的G2/M期阻滞可能与端粒酶活性的显著下降相关.NB4和K562细胞对硫化砷的敏感性存在明显差异,具体机制有待进一步研究.     

维甲酸诱导NB4细胞分化过程中下调端粒酶活性及端粒长度

端粒酶 ,是一种核糖核蛋白复合物 ,催化合成和延伸端粒 DNA。此酶在细胞永生化和肿瘤形成中扮演重要角色 ,端粒酶的抑制与肿瘤细胞的终未分化相关。应用成熟敏感的 NB4细胞系和成熟抵抗的 NB4- R1和 NB4- R2细胞亚系作者分析了维甲酸治疗 APL过程中端粒酶的表达模式。NB4细胞表达有嵌合的 PML- RAR- α蛋白 ,可被维甲酸经 RAR通路诱导分化成熟 ,而 NB4-R1和 NB4- R2细胞则不被维甲酸诱导成熟 ,但NB4- R1细胞可被升高的 c AMP试剂所激发 ,对维甲酸产生反映并被诱导分化成熟 ,而 NB4- R2细胞则不可。因在 NB4- R2细胞中 ,破…     

白血病细胞早幼粒细胞白血病(PML)蛋白存在形式的检测和临床意义北大核心CSCD

目的研究早幼粒细胞白血病(PML)蛋白在急性早幼粒细胞白血病(APL)不同阶段存在形式,探讨全反式维甲酸(ATRA)、砷剂、化疗药物对PML蛋白存在形式的影响。方法收集42例APL的骨髓细胞和白血病NB4、MR2细胞,采用1μmol/L三氧化二砷(As_2O_3)、1μmol/L四硫化四砷(As_4S_4)、1μmol/L ATRA、10 mg/L阿糖胞苷、1 mg/L高三尖杉酯碱处理,采用间接免疫荧光法,检测处理前后细胞PML荧光信号变化。结果 APL初发病例87.5%表现为小荧光信号(细胞核内密布满天星般荧光亮点,多于30个/细胞),完全缓解病例91.67%表现为大荧光信号(细胞核内有较大的荧光亮点,少于30个/细胞),复发病例中83.33%表现为小荧光信号;与未加药组相比,ARTA组、As_2O_3组、As_4S_4组能使初发患者APL细胞的PML蛋白表达由小荧光信号转变为大荧光信号,阿糖胞苷组、高三尖杉酯碱组则无明显影响;ARTA能使NB4细胞PML蛋白表达由小荧光信号转变为大荧光信号,而不能改变MR2细胞PML蛋白表达的小荧光信号,As2O3和As4S4能使NB4、MR2细胞PML蛋白表达由小荧光信号转变为大荧光信号。结论检测APL细胞PML蛋白存在形式对APL预后判断及合理药物选择具有实际应用价值。     

重组慢病毒LV5-NE的构建及NE促进NB4细胞增殖

目的构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株,探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响,为研究NE致白血病的可能机制奠定基础。方法以质粒p CMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE,将NE基因连接到穿梭载体p GLV10/U6/GFP/Puro后酶切验证,将序列正确的质粒与包装质粒p Gag/Pol、pRev、p VSV-G共转染293T细胞。测定病毒滴度。实验分为空白组、LV5-NC组和LV5-NE组,病毒感染NB4细胞72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞。用Western blot检测NE在NB4细胞中的蛋白表达以及其切割作用;CCK-8法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞周期和凋亡;Western blot检测p Akt和Akt以及Bax和Bcl-2蛋白表达。结果成功构建表达NE的慢病毒LV5-NE,筛选得到纯NB4/LV5-NE细胞株,NE对NB4细胞的增殖有明显促进作用(P0.05)结论 NE在NB4细胞株中稳定表达后中可促进NB4细胞的增殖,其增殖作用可能通过激活PI3K/Akt通路调节。     

靶向PML-RARα融合基因的siRNA对急性早幼粒细胞白血病细胞NB4活性的影响

通过靶向PML-RARα融合基因的小干扰RNA(siRNA)的体外干扰,研究其对急性早幼粒细胞白血病细胞NB4活性的影响。设计合成5对靶向PML-RARα融合基因的siRNA,转染NB4细胞,采用MTT比色法、软琼脂细胞集落形成实验检测siRNA对NB4细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术测定细胞的凋亡,结果显示siRNA显著抑制了NB4细胞的增殖并有效诱导细胞凋亡。靶向PML-RARα融合基因的siRNA有望成为治疗急性早幼粒细胞白血病的有效方法。