卵巢癌细胞蛋白成分分析

应用高渗氯化钾抽提法获取膜蛋白,借助于聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦技术对多种卵巢癌蛋白成分进行了分析,发现卵巢癌细胞膜蛋白与卵巢瘤和正常卵巢细胞均不相同,其中酸生蛋白成分相对增加;同时发现粘液性囊腺癌所特有的肿瘤蛋白质,其等电点为pH4.6～4.9。     

HaCaT细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

背景与目的： 建立HaCaT细胞蛋白质组双向电泳图谱。 材料与方法： 用含10％ 胎牛血清的RPMI1640培养液培养HaCaT细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,离心后取上清液进行第一向第电聚焦电泳和平衡,再进行第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析。 结果： 通过对HaCaT细胞蛋白提取液进行双向电泳,在 17 cm pH 3-10 L IPG胶条上可分离到(700±23)个重复性及分辨率均较好的蛋白位点,蛋白斑点的匹配率为72.2％。 结论： HaCaT细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

大肠癌病人血清结合珠蛋白的型别分布及含量变化(摘要)

血清结合珠蛋白(Hp)为α_2球蛋白中的一种糖蛋白,能与血红蛋白(Hb)结合生成Hb-Hp复合物。大肠癌患者血α球蛋白常可发生紊乱,其中含量的变化以Hp较为明显。作者分别用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳及凝胶过滤法检测大肠癌病人血清Hp型别和含量,以探索Hp与大肠癌发病的关系。用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分析了161例正常人血清Hp型别,结果Hp1—1型9.9％、     

介绍HE切片脱色后行多种特殊染色法

H.E 常规病理切片,是病理诊断的常用方法,若遇到疑难病例须进一步鉴别时,则需作特殊染色,以往作法是重切白片进行特殊染色。应用过锰酸钾脱色法,进行脱色后行多种特殊染色,简便易行,效果佳良,我们已做了弹力纤维的地衣红染色,胶元纤维的 Van Gieson 染色及 Mallory 氏三色新染法,网状纤维的     

聚丙烯酰胺水凝胶隆乳剂取出术式选择

目的探讨如何合理选择2种聚丙烯酰胺水凝胶取出术。 方法回顾性分析2012年6月至2018年12月在成都市第三人民医院就诊的213例行聚丙烯酰胺水凝胶取出术的患者资料。采用χ²检验比较61例微创抽吸术(抽吸组)和152例乳晕切口开放性聚丙烯酰胺水凝胶及包膜取出术(开放组)患者的术前伴随症状(疼痛、结节、红肿、破溃、乳头溢液和乳房肿大);患者的年龄和手术数据(手术时间、术中出血量、术后引流时间)为偏态分布计量资料,用M (P₂₅ , P₇₅ )表示,组间比较采用非参数检验;2种手术方式比例逐年变化趋势的组间比较采用趋势χ²检验。 结果(1)抽吸组患者术前疼痛发生率更低,无伴随症状者更多[疼痛：29.5%(18/61)比50.7%(77/152),χ²＝7.881,P＝0.005;无症状：52.5%(32/61)比29.6%(45/152),χ²＝9.850,P＝0.002],其余伴随症状(结节、红肿、破溃、乳头溢液和乳房肿大)发生率的组间比较,差异均无统计学意义(χ²＝3.323、3.349、2.869、0.000、0.020,P均>0.050)。(2)开放组手术时间和出血量都明显多于抽吸组[手术时间：141(120,190) min比90(76,116) min,Z＝-8.719,P<0.001;出血量：20(10,20) ml比10(5,20) ml,Z＝-6.076,P<0.001],2组患者术后引流时间差异无统计学意义[5(5,6) d比5(5,6) d,Z＝0.111,P＝0.912]。(3)从2012年开始,开放组患者多于抽吸组,2种手术方式比例变化趋势比较,差异有统计学意义(χ²＝6.936,P＝0.008)。 结论虽然开放性切除术比微创抽吸术手术创伤更大、难度更高,但是其能最大限度地取出聚丙烯酰胺水凝胶,并清除其周围包膜和变性组织;对于注射聚丙烯酰胺水凝胶时间长,术前伴随症状较多的患者,更倾向于选择开放性切除术。     

癌相关蛋白在喉癌诊断中的应用

本文采用超薄板状聚丙烯酰胺凝胶电脉技术，对３６例经病理证实为喉癌的病人以及健康供血员１００人，进行了癌相关蛋白的测定，结果癌相关蛋白阳性率喉癌为７７．８％，健康人为５％，喉癌病人与健康供血员之间存在着显著差异（Ｐ＜０．０１），而且癌相关蛋白的阳性率与喉肿瘤的分期有关。研究表明：该检测方法对于喉癌的临床诊断有较高的参考价值。     

癌相关蛋白在喉癌诊断中的应用

本文采用超薄板状聚丙烯酰胺凝胶电脉技术，对３６例经病理证实为喉癌的病人以及健康供血员１００人，进行了癌相关蛋白的测定，结果癌相关蛋白阳性率喉癌为７７．８％，健康人为５％，喉癌病人与健康供血员之间存在着显著差异（Ｐ〈０．０１），而且癌相关蛋白的阳性率与喉肿瘤的分期有关。研究表明：该检测方法对于喉癌的临床诊断有较高的参考价值。     

聚丙烯酰胺水凝胶注射式隆乳术后哺乳期感染及其处理

目的探讨聚丙烯酰胺水凝胶注射式隆乳术后哺乳期感染的最佳处理途径,拟提高该并发症处理的成功率。方法对28例聚丙烯酰胺水凝胶注射式隆乳术后哺乳期感染患者采用手术取出材料、残腔灌洗、药物连续冲洗、负压引流坏死物等综合治疗手段,彻底控制感染与炎症。结果28例患者治疗1～2周后,乳腺内感染得到控制,残腔及坏死组织全部被清除,感染炎症愈合,完整保留乳房,未有复发。结论对注射隆乳感染这类严重并发症,用手术加有效药物控制等方法正确处理,切实有效,能够保持乳房组织结构完整。     

脱细胞异体真皮联合硅凝胶假体植入矫正乳房术后继发畸形

目的探讨利用脱细胞异体真皮联合硅凝胶假体植入矫正乳房因聚丙烯酰胺水凝胶取出术造成的继发畸形,并对其早期临床效果做出评价。方法2008年1月至2010年5月期间,共有10例注射式隆乳术后患者在本院进行了脱细胞异体真皮联合硅凝胶假体植入术。脱细胞异体真皮被用于修补和填充胸大肌及乳腺腺体组织缺损,包裹硅凝胶假体的下1／3,以重建乳房下皱襞。结果术后随访12个月,乳房外形满意,无感染、积液等并发症。结论应用脱细胞异体真皮联合硅凝胶假体植入可避免取出乳房内聚丙烯酰胺水凝胶后造成的严重乳房畸形。在严格把握适应证的前提下,可以取得较好的临床效果。     

胃癌细胞耐药相关蛋白质分子的差异展示

目的 寻找新的胃癌细胞耐药相关蛋白质分子,阐明肿瘤耐药的新机制。方法 以胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901／VCR为研究对象,用固相化pH梯度等电聚焦的二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术展示并比较两种细胞表达的所有蛋白质,凝胶银染法显示耐药与非耐药细胞差异表达的蛋白质分子。结果 在两张银染的凝胶蛋白质图谱上,均有680个可辨识的蛋白质点,绝大多数蛋白点在位置、形状和密度上是一致的。在耐药细胞蛋白质二维电泳图谱中,发现有30个明显差异的蛋白点,并初步确定了其等电点和分子量。其中3个蛋白点表达量很高,但在非耐药细胞中未出现;6个蛋白点丰度明显上调;19个蛋白点丰度明显下调;2个蛋白点在耐药细胞中未出现,但在非耐药细胞中高表达。结论 胃癌耐药细胞中差异表达的蛋白质分子可能与其长春新碱耐药机制相关。     

人肺鳞癌组织及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析

背景与目的:肺鳞癌的发生发展是一个多因素、多步骤的过程,虽然从基因和转录水平已对肺癌进行了许多成功的研究,但其癌变机制仍不十分明确,目前尚缺乏有效的用于肺鳞癌早期诊断和预后监测的特异性分子标志物。本研究的目的是利用蛋白质组学方法,建立分辨率高和重复性好的人肺鳞癌组织及其癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质。方法:利用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE),分离人肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上皮组织的总蛋白质,用图像分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(massspectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:(1)建立双向凝胶电泳图谱:癌组织和癌旁正常支气管上皮组织3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1349±67和1297±73,平均匹配的点数分别为1235±48和1183±56,匹配率达91.5%和91.2%;同一癌组织的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(Isoelectricfocusing,IEF)方向的偏差是(0.873±0.125)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE方向上的偏差为(1.025±0.213)mm。(2)肽质指     

一种改进的银染方法

本文介绍一种改进的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法,通过对常用的Merril等人银染方法一些步骤的修改,染色后背景颜色明显减低、灵敏度明显提高,与原法相比提高近6倍,可检出低至0.38ng的蛋白条带。     

现代分子生物学技术简介

一、PCR-单链构象多态性分析PCR-单链构象多态性分析(PCR-single strand conformation analysis,PCR-SSCP)是近年来在基因突变检测中运用最广泛的方法之一。PCR-SSCP技术凭借突变可引起单链DNA三级构象改变,通过观察单链DNA在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率漂移来判断突变。样     

妇科癌症病人的免疫抑制性酸性蛋白

在癌症病人血清中已发现许多种以异常数量存在的蛋白。近代,Tamura等利用聚丙酰胺凝胶的等电聚焦法,在pH2.5～pH5区间分析出癌症病人血清中存在着大量酸性蛋白即a_1-糖蛋白(a_1-AG).而健康人血清中仅小量存在。此种蛋白抑制植物血凝素诱导的淋巴细胞转化,而被称之为免疫抑制性酸性蛋白(IAP).     

γ—GT同功酶等四种检验对肝癌诊断价值的探讨

我院自1986年2月开展了γ—GT同功酶检验,现将结果作一小结。 材料与方法 受检者共109人,其中男性88人,女性21人,年龄6～76岁。包括原发性肝癌31例(皆符合全国诊断标准者),及其它肝脏疾患(详见附表)。全部作了γ—GT同功酶(聚丙烯酰胺凝胶阶段梯度电泳分离     

Pellet培养与纤维蛋白凝胶支架体外成软骨能力的比较

目的比较Pellet培养和纤维蛋白凝胶支架两种培养方式诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化及合成细胞外基质的差异。方法人脂肪组织酶消化分离脂肪干细胞,培养基为DMEM含10%胎牛血清,利用Pellet培养和纤维蛋白凝胶支架两种培养体系将P3代脂肪干细胞诱导成软骨后21天取材进行苏木精-伊红染色,番红O染色,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定Ⅱ型胶原基因表达。结果苏木精-伊红染色与番红-O染色显示,纤维蛋白凝胶实验组软骨细胞外基质大量分泌,并融合成片,说明纤维蛋白凝胶支架可更好促进干细胞成软骨分化、维持软骨细胞表型。GAG/DNA结果显示,纤维蛋白凝胶组促GAG分泌的能力优于其余各组(P0.05),其Ⅱ型胶原m RNA表达的能力也最强(P0.05)。结论利用纤维蛋白凝胶支架诱导人脂肪干细胞成软骨分化的能力优于无支架的Pellet三维培养体系。     

小肝细胞癌患者染色体1p36杂合性缺失的特点

目的: 探讨人类染色体1p36等位基因杂合性缺失在小肝细胞癌(small hepatocellular carcinoma, sHCC)发生发展中的作用及其与临床病理表现的关系。方法：采用PCR非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术，对140例信息性sHCC中1p36上9个多态性微卫星标志位点的杂合性缺失(lo     

全蝎抗癌成分的初步研究

目的研究全蝎的抗癌成分.方法采用有机溶剂超声提取、离子交换层析及聚丙烯酰胺电泳等方法,对其抗癌成分进行分离纯化并分析鉴定.结果确定其提纯组分为蛋白质,分子量为1.8、2.6、2.8kD.结论全蝎全虫入药治疗肿瘤效果良好,但其成分复杂,有效成分不清,本文对全蝎中的部分成分进行了初步分离与分析,有利于深入研究和临床应用.     

卵巢癌微卫星不稳定性的初步研究

目的　探讨卵巢癌是否存在微卫星DNA不稳定性及与其发生的关系。方法　应用PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳 硝酸银染色技术 ,检测 5 1例卵巢癌 3个位点的微卫星不稳定性。结果　 3个位点微卫星DNA不稳定性发生率分别为 3 5 .3 % ,41.2 % ,41.2 %。结论　微卫星DNA的不稳定性可能与卵巢癌的发生有关。     

PCR-SSP法检测人胰腺癌细胞株PCNA-1的K-ras基因点突变的方式

目的检测人胰腺癌细胞株PANC-1的K-ras基因点突变方式,明确干扰Ras基因靶点的碱基序列。方法针对K-ras基因第十二位点密码子点突变最常见方式CAT,CGT,GTT设计顺序特异性引物(SSP),对人胰腺癌细胞株PANC1进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无点突变及突变方式。结果人胰腺癌细胞株PANC-1存在K-ras基因的点突变,其突变方式为CAT。结论 PCR-SSP法快速简便,特异性高,结果准确,为应用RNAi技术研究胰腺癌的基因治疗奠定了基础。