慢性复合性应激大鼠学习和记忆与海马突触后致密物质CaMKII的表达变化

目的　探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。　方法　采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6周的慢性复合性应激试验。实验后 ,动物进行 3d的Morris水迷宫和Y迷宫测试 ,记录其学习和记忆成绩 ,同时观察CaMKII在海马CA1和CA3区的分布和表达。　结果　应激组动物的学习与记忆成绩均超过或优于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;与对照组比较 ,CaMKII在应激组海马CA3区辐射层灰度明显降低(P <0 0 1) ,而始层灰度无明显变化 (P >0 0 5 ) ,在应激组CA1区海马辐射层和始层的灰度均较对照组降低 (P <0 0 5 ) ;大鼠的学习记忆成绩与CaMKII的表达呈正相关。　结论　慢性复合性应激致大鼠的学习与记忆能力加强 ,CaMKII在海马CA1区和CA3区的表达增加 ,说明CaMKII参与了慢性复合性应激对学习记忆的影响。     

莪素油对慢性低氧大鼠学习与记忆和海马p—CaMKⅡ表达的影响

目的：探讨不同浓度的莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响和可能的机制。方法：将SD大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、慢性低氧＋低、中和高浓度的莪术油组，持续饲养28d。实验结束次日，测试大鼠学习和记忆成绩的变化；测定血清和海马组织MDA和SOD的浓度；测定海马组织Ca^2＋浓度；观察磷酸化Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（p—CaMKⅡ）在海马组织染色和表达情况；应用透射电镜观察海马组织超微结构的变化。结果：慢性低氧组发现隐蔽平台的潜伏期延长；MDA含量明显增高，SOD活力明显降低；[Ca^2＋]i明显增高；p—CaMKⅡ染色较弱和表达量明显降低。中、高浓度莪术油组发现隐蔽平台的潜伏期缩短（P〈0．05）；莪术油各组MDA含量均显著降低；中、高浓度莪术油组血清SOD活力显著增加；莪术油各组[Ca^2＋]i明显降低；中、高浓度莪术油组p—CaMKⅡ免疫组化染色较强，表达量也明显增加（P〈0．05，P〈0．01）。慢性低氧组突触界限不清楚，树突棘和轴突均见水肿，突触囊泡及突触后致密物质消失；随着莪术油浓度的增加，突触和线粒体水肿逐渐减轻，突触后致密物质逐渐增多。结论：莪术油能够通过清除和对抗自由基的产生，增加突触后致密物质的表达来改善低氧大鼠学习和记忆能力，此作用呈剂量依赖效应。     

慢性应激对大鼠空间学习记忆和海马一氧化氮的影响

目的 :探讨慢性应激对大鼠空间学习记忆和海马NO的影响。方法 :采用电击足底结合噪声建立慢性应激大鼠模型 ,Morris水迷宫观察动物的学习和记忆能力 ,同时检测海马NO含量和NOS活性。结果 :慢性应激大鼠在Morris水迷宫的空间学习和记忆能力明显下降 ,海马NO含量和NOS活性 (3 87± 0 47nmol/mgpro和 10 2 64± 13 33pmol/mgpro/min)显著高于对照组大鼠 (2 76± 0 43nmol/mgpro和 78 2 5± 10 67pmol/mgpro/min)。结论 :慢性应激损害大鼠空间学习和记忆能力 ,可能与其海马内NO增多有关     

莪素油对慢性低氧大鼠学习与记忆和海马p-CaMKII表达的影响

目的：探讨不同浓度的莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响和可能的机制。方法:将SD大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、慢性低氧+低、中和高浓度的莪术油组，持续饲养28 d。实验结束次日，测试大鼠学习和记忆成绩的变化；测定血清和海马组织MDA和SOD的浓度；测定海马组织Ca2+浓度；观察磷酸化Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（p-CaMKII）在海马组织染色和表达情况；应用透射电镜观察海马组织超微结构的变化。结果:慢性低氧组发现隐蔽平台的潜伏期延长；MDA含量明显增高，SOD活力明显降低；［Ca2+］_i明显增高；p-CaMKII染色较弱和表达量明显降低。中、高浓度莪术油组发现隐蔽平台的潜伏期缩短（P<0.05）；莪术油各组MDA含量均显著降低；中、高浓度莪术油组血清SOD活力显著增加；莪术油各组［Ca2+］_i明显降低；中、高浓度莪术油组p-CaMKII免疫组化染色较强，表达量也明显增加（P<0.05，P<0.01）。慢性低氧组突触界限不清楚，树突棘和轴突均见水肿，突触囊泡及突触后致密物质消失；随着莪术油浓度的增加，突触和线粒体水肿逐渐减轻，突触后致密物质逐渐增多。结论:莪术油能够通过清除和对抗自由基的产生，增加突触后致密物质的表达来改善低氧大鼠学习和记忆能力，此作用呈剂量依赖效应。     

不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层Ng、PKC、CaMKⅡ mRNA表达的影响

目的：探讨不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层神经颗粒素（Ng)、蛋白激酶C (PKC)、 Ca2+ -CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）mRNA表达的影响。方法： 雄性Wistar大鼠随机分为3组,即24 h实验组、48 h实验组和72 h实验组,每组再分为睡眠剥夺组（SD组）和对照组（C组）。利用睡眠剥夺箱建立大鼠SD模型,Trizol一步法提取海马和前额皮层总RNA,用SYBRA　green Ⅰ荧光定量RT-PCR测定Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA水平。结果： (1)大鼠海马Ng mRNA水平在睡眠剥夺24 h、48 h和72 h后,较对照组均显著降低（P＜0.05）,PKC和CaMKⅡ mRNA水平在睡眠剥夺48 h和72 h后显著降低（P＜0.05）; (2)在睡眠剥夺24 h和48 h后,大鼠前额皮层Ng、PKC和 CaMKⅡ mRNA水平较对照组有降低趋势,在睡眠剥夺72 h后均显著降低（P＜0.05）。结论： 睡眠剥夺可以使大鼠海马和前额皮层Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA表达水平降低,且随着睡眠剥夺时间的延长,降低更为明显,这可能是睡眠剥夺损害认知功能的原因之一。     

慢性复合应激对学习记忆的影响及cAMP/PKA-CREB信号通路的作用

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫(MWM)测试大鼠空间学习与记忆成绩;免疫组织化学方法观察大鼠海马PKA-Cβ和磷酸化的CREB的表达水平;应用RT-PCR法半定量检测海马组织内BDNF和Bcl-2的mRNAs水平。结果应激后在MWM寻找平台潜伏期,与对照组(18.9±13.0)s相比,慢性复合应激组(14.2±5.8)s明显缩短(P<0.05),显示其空间记忆明显增强,而慢性单一应激组(20.4±12.8)s无明显差异(P>0.05);慢性复合应激组大鼠海马CA1和CA3区PKA-Cβ的表达以及CA1区和齿状回pCREB的表达明显上调(P<0.05);而慢性单一应激组海马各亚区PKA-Cβ和pCREB的表达无显著性改变(P>0.05)。BDNF和Bcl-2mRNAs的表达水平3组间差别无显著性(P>0.05)。结论慢性复合应激可增强海马依赖的学习与记忆功能,多元的环境刺激可能是其增强的主要原因。PKA-CREB信号通路在其影响机制中发挥了一定的作用。     

戊四氮点燃癫痫大鼠学习记忆功能及海马神经元钙调素依赖性蛋白酶Ⅱ表达的变化

目的 观察戊四氮（PTZ）点燃癫痫对大鼠学习记忆功能的影响及海马神经元钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）表达的变化。方法 腹腔内连续注射PTZ制备点燃癫痫大鼠模型,用Morris水迷宫评测大鼠学习和记忆功能,用免疫组织化学技术观察海马神经元α-CaMKⅡ的表达。结果 与对照组大鼠比较,在Morris水迷宫试验中,PTZ组寻找平台的逃避潜伏期显著延长（P<0.05）,游泳距离显著增加（P<0.05）,穿越平台的次数及在平台象限的游泳距离的百分率显著减少（P<0.05）,搜索策略变差,同时伴有海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达明显减少（P<0.05）。结论 PTZ点燃癫痫大鼠学习和记忆功能受损可能与海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达减少有关。     

脊髓背角长时程增强中CaMKⅡ磷酸化水平的变化

目的探讨长时程增强诱导和维持过程中脊髓背角钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的变化。方法(1)细胞外记录脊髓腰膨大部背角浅层神经元C-纤维诱发电位;(2)免疫组化技术观察脊髓背角CaMKⅡ磷酸化水平的变化。结果(1)LTP30min、LTP3h脊髓背角CaMKⅡThr286的磷酸化水平明显高于对照组;(2)强直刺激前30min脊髓局部给予KN-93(CaMKⅡ选择性抑制剂,100μmol/L),LTP的诱导被完全阻断,CaMKⅡ磷酸化水平与对照组无明显差别;(3)强直刺激后30min给予KN-93,明显抑制LTP,CaMKⅡ的磷酸化水平也显著降低;(4)LTP3h后给予KN-93,LTP幅度和CaMKⅡ磷酸化水平与用药前相比,差异没有统计学意义。结论CaMKⅡ磷酸化可能在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强诱导和早期维持中发挥重要作用。     

慢性复合应激对大鼠学习和记忆的影响

本文观察慢性复合应激对海马长时程增强(LTP)和一氧化氮合酶1(NOS1)表达变化的影响,并探讨了其在学习与记忆中的作用。将Wistar大鼠随机分为对照组和慢性复合应激组,每组各10只。应激组动物采用4种应激原无规律、交替性地进行长达6周的慢性复合应激试验。实验过程中测定动物血清皮质酮(CORT)水平,采用Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠学习和记忆成绩,记录海马齿状回LTP群体峰电位(PS)幅值的变化,同时观察海马CA1及齿状回区NOS1阳性神经元数目的变化。结果显示:(1)与对照组比较,慢性复合应激组动物在应激第4周和第6周时,血清皮质酮浓度的比值显著增高(P<0.05,P<0.01);(2)高频刺激(HFS)后各时间点的PS幅值增高更为明显(P<0.01);(3)Morris水迷宫和Y迷宫实验后慢性复合应激组动物的学习和记忆成绩优于对照组(P<0.05,P<0.01);(4)慢性复合应激组和对照组大鼠海马齿状回NOS1阳性神经元个数分别为8.80±3.91和5.44±1.14,两者间有统计学差异(P<0.05)。以上结果提示,慢性复合应激对大鼠的学习和记忆有一定的影响,可能与齿状回群体峰电位幅值增强和NOS1表达增强有关。     

慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马神经细胞增殖和突触后酪氨酸激酶表达的变化

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马结构各亚区神经细胞数量变化,以及突触后致密物酪氨酸激酶（Fvn）在海马内表达的变化及其意义。方法39只大鼠随机分为复合应激组、单一应激对照组和正常对照组。复合应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑（6h／d）和夜间光照等慢性复合性应激实验;单一应激对照组进行6周的单一捆绑对照,6h／d。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩：并运用尼氏染色方法观察海马各区神经细胞数量的变化;同时采用免疫组织化学、RT-PCR方法检测Fvn在海马CA3区的表达变化以及海马Fyn mRNA水平的变化。结果单一应激对照组动物学习记忆成绩受损（P〈0．05）;复合应激组的学习与记忆成绩优于对照组（P〈0．05）;与对照组相比,复合应激组和单一应激组动物海马各区神经细胞数量明显增多（P〈0．05）;Fyn在复合应激组海马CA3区辐射层阳性表达比对照组明显增强（P〈0．05）,但单一应激对照组的则减弱（P〈0．05）;同时复合应激组动物的Fyn mRNA水平明显上调（P〈0．05）,而单一应激对照组的则明显下调（P〈0．05）。大鼠的学习记忆成绩与Fvn的表达呈正相关。结论6周慢性复合性应激使大鼠的学习与记忆能力加强;海马各区神经元数量增多;Fyn在海马中的表达和FynmRNA转录水平均增加。提示Fyn参与了慢性复合性应激增强大鼠学习记忆能力的过程。     

皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2 ]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2 ]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2 ]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2 ]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。     

杏仁核兴奋性神经元参与小鼠慢性痒及伴发抑郁的形态学研究

目的:观察慢性痒伴发抑郁对小鼠杏仁核内神经元的激活作用,为其参与痒觉信息的调控提供形态学证据.方法:应用二苯基环丙烯酮(DCP)建立小鼠慢性瘙痒模型,用痒行为视频追踪系统检测痒行为,以验证模型制备是否成功,并运用悬尾实验检测慢性痒模型小鼠的抑郁样行为.结合免疫荧光染色方法观察DCP模型小鼠杏仁核内各个区域的神经元激活情...     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠生后海马发育中的表达

目的 探讨Wistar大鼠生后海马发育过程中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的表达。 方法 应用免疫荧光方法检测CaMKⅡ在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回（DG）中的表达情况（n =48）。结果 CaMKⅡ于生后各期海马CA1区和DG的表达逐渐增强,生后第10天（P10）达高峰期,此后逐渐减弱;于CA3区的表达在P4和P10时均较高。其中,CaMKⅡ在CA3区的表达高于在CA1区和DG的表达,在多形层和分子层的表达高于在锥体细胞层或颗粒细胞层的表达。结论 CaMKⅡ在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异性的时空分布模式,这可能与其在生后发育过程中的突触发生,树突、轴突形成,海马的成熟以及学习记忆功能相关。     

缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马p-CREB阳性神经元数量的影响

目的探讨最佳剂量缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠行为及其大脑海马磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP responsive element-binding protein,p-CREB))阳性神经元的影响。方法将35只大鼠随机均分为正常对照组、未用药模型组、阴性对照模型组、阳性对照模型组、低剂量缬草模型组、中剂量缬草模型组和高剂量缬草模型组。在用药期间,每周测试大鼠体质量、自来水及1%糖水摄取量1次。用药后,计数大脑海马神经元数量,确定缬草最佳剂量。然后根据前述方法,在灌药结束后灌注和固定所有大鼠。采用中性红染色、免疫组化等方法对大鼠海马p-CREB和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)阳性神经元进行检测。结果高剂量(100mg·kg-1·d-1)缬草能促使抑郁大鼠1%糖水摄取量恢复至正常水平,还可使抑郁大鼠大脑海马神经元以及p-CREB阳性神经元数量恢复到正常水平。正常对照组大鼠大脑海马神经元的BDNF染色较浅淡,其余各组大鼠大脑海马神经元的BDNF阳性染色没有明显差异。结论本研究高剂量(100mg·kg-1·d-1)缬草可能是治疗慢性应激导致大鼠抑郁症的最佳剂量。缬草可以改善抑郁大鼠的行为活动,恢复大脑海马神经元以及p-CREB阳性神经元数量到正常水平。     

人参皂甙Rg1对慢性应激大鼠空间学习记忆能力的影响

目的　探讨人参皂甙Rg1对慢性应激大鼠空间学习记忆能力的影响及初步机制。方法　采用电击足底结合噪声建立慢性应激大鼠模型 ,Morris水迷宫观察动物的空间学习和记忆能力 ,Niss染色观察和计数海马神经元为数量 ,Fara 2荧光法测海马突触体内游离钙浓度。结果　腹腔注射 5 0mg/kg人参皂甙Rg1对慢性应激引起的空间学习和记忆能力下降 ,海马神经元数量减少 ,海马突触体内游离钙浓度增高有明显保护作用 ,而注射 10mg/kg人参皂甙Rg1的效果不明显。结论　人参皂甙Rg1对慢性应激性认知障碍有保护作用 ,其机制可能是通过调节海马细胞内的钙浓度 ,防止海马神经细胞丢失有关。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达的影响

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能及其相关蛋白ERK2与CaMKⅡβ表达的影响。方法:采用Pulsinelli’s4血管阻断法制备VD动物模型,设假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼莫地平组,在术后第7d、14d、28d,利用水迷宫试验对各组大鼠进行行为学检测;术后第30d,采用HE染色方法观察海马CA1区形态学变化并进行神经元计数;采用Westernblotting方法观察大鼠CA1区海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习与记忆成绩明显下降(P0.05);海马CA1区神经元排列紊乱,出现凝固性坏死,细胞脱失明显;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠学习和记忆成绩均明显好转(P0.05);海马CA1区神经元排列整齐,细胞形态正常,脱失不明显,接近假手术组;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著增多(P0.05)。结论:补阳还五汤可能通过促进VD大鼠ERK2蛋白和CaMKⅡβ蛋白的表达,从而促进突触构建和学习记忆功能的恢复。     

出生前后慢性铝暴露对年轻大鼠学习记忆行为学及海马细胞内CaMKⅡ表达的影响

目的研究出生前后不同浓度慢性铝暴露对年轻大鼠学习记忆行为学及海马细胞内CaMKⅡ表达影响,以探讨铝损害学习与记忆的突触机制。方法 45只大鼠随机分为对照组、0.2%-Al和0.4%-Al组大鼠,从孕期始分别自由饮用蒸馏水、Al3+浓度为15mmol·L-1和30mmol·L-1的A1C13水溶液;采用跳台法测定海马长时程增强,采用Western-blot法检测海马细胞内CaMKⅡ的表达。结果大鼠记忆保持测试结果显示,与对照组相比,各铝暴露组跳下平台的潜伏期明显缩短(P<0.01),5min内错误次数显著增加(P<0.01),且两铝暴露组间差异明显(P<0.05);与对照组相比,两铝暴露组海马CaMKⅡ的表达明显降低(P<0.01)。结论出生前后慢性铝暴露引起大鼠学习记忆能力的降低可能与海马CaMKⅡ的表达下调相关。     

慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化

目的 探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca²⁺/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的表达变化。 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组（30只）和慢性强迫游泳应激组（30只）。慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca²⁺浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化。 结果 慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义（P<0.01）;开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义（P<0.05）;水迷宫实验逃避潜伏期分别为（20.762±3.236）s和（5.632±1.065）s,差异有统计学意义（P<0.01）;海马神经元内游离Ca 2+浓度分别为（498.94±40.45）nmol/L和（288.91±32.42）nmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组（P<0.01）。 结论 海马Ca²⁺及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一。     

慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及齿状回神经前体细胞增殖的影响

为研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习和记忆功能及齿状回(DG)神经前体细胞增殖的影响,将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组,应激组动物每天交替暴露于复合应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩。同时,采用BrdU标记分裂细胞方法,观察比较各组大鼠DG内BrdU阳性细胞数的变化和差异。结果显示:应激组动物的学习与记忆成绩均优于对照组(P<0.05);与对照组相比,应激组大鼠DG内BrdU阳性细胞数量显著增加(P<0.05)。上述结果表明:慢性复合应激导致大鼠的学习与记忆能力加强,DG内BrdU阳性细胞增多,提示神经细胞数量增加可能是应激所引起的大鼠学习记忆能力增强的原因之一。