淫羊藿素对LPS诱导原代皮质星形胶质细胞炎性反应影响

目的 探讨淫羊藿素(ICT)对脂多糖(LPS)诱导的原代皮质星形胶质细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)阻断剂JB-1的阻断作用.方法 常规培养原代皮质星形胶质细胞,将其分为对照组、LPS组、ICT+LPS组和JB-1+ICT+LPS组....     

EGb761对星形胶质细胞iNOS基因表达的调控

目的：以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(WN-γ)诱导体外培养的大鼠脑星形胶质细胞表达可诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、产生大量一氧化氮(NO)为病理条件下胶质细胞过度活化的实验模型，研究了银杏叶提取物(EGb761)对星形胶质细胞合成一氧化氮的作用以及对共培养的小脑颗粒神经元的作用。方法：应用逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测了EGb761对星形胶质细胞中iNOS基因表达的影响，并探讨了这一调控作用的分子机理。结果：EGb76l能明显降低星形胶质细胞中iNOSmRNA和蛋白的表达、减少一氧化氮的生成、防止活化的胶质细胞损伤共培养神经元，抑制IKB-α的降解和阻止p65／RdA进入细胞核，结果提示EGb761对iNOS基因表达的抑制作用依赖于NF-κB信号通路。结论：实验结果提示EGb761可能对与胶质细胞过度活化有关的神经系统痰病具有治疗、预防的作用。     

氟西汀对体外培养星形胶质细胞活性及脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的 通过体外培养星形胶质细胞,观察氟西汀对星形胶质细胞的活性及对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞释放肿瘤坏死因子-α( TNF-α)的影响.方法 体外分离、纯化大鼠星形胶质细胞.星形胶质细胞接种到96孔板中,以浓度为(5,10,20,40)μM的氟西汀孵育24h,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测星形胶质细胞增殖活性;星形胶质细胞接种至48孔板,经(5,10,20,40) μM氟西汀预处理后再用1μg/ml LPS刺激,酶联免疫吸附(Elisa)法检测各组上清TNF-α的水平.结果 氟西汀浓度为20 μM,40μM时星形胶质细胞的增殖活性(OD值:0.23±0.014,0.24 ±0.012)与对照组(OD值:0.20±0.017)相比明显增加(P＜0.05),经LPS刺激24h星形胶质细胞释放TNF-α水平(53.84±24.84) pg/ml与对照组(8.00±10.87) pg/ml相比明显增加(P＜0.01),氟西汀浓度为10μM明显抑制LPS刺激星形胶质细胞释放TNF-α(28.85±3.36) pg/ml(P＜0.05).结论 氟西汀在一定浓度范围内可促进星形胶质细胞的增殖活性,氟西汀浓度为10μM时可抑制LPS诱导的星形胶质细胞对TNF-α的释放.     

汉黄芩素对脂多糖诱导的BV2细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

[目的]探讨汉黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞激活时所分泌的一氧化氮的产生以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.[方法]用10,100,500,1 000μg/L的LPS刺激小胶质细胞株BV2,并向LPS(100μg/L)中加入10,20,30μmol/L的汉黄芩素后再培养24h,采用Greiss法测定细胞外液所分泌的一氧化氮含量;应用Western-Blot及RT-PCR法分别检测iNOS蛋白和mRNA的表达.[结果]LPS高度激活BV2细胞,并且能使一氧化氮分泌增加,汉黄芩素呈剂量依赖性抑制一氧化氮的含量,同时抑制iNOS蛋白和mRNA的表达.[结论]汉黄芩素可有效抑制LPS激活的BV2细胞iNOS蛋白和mRNA的表达及一氧化氮的产生.     

右美托咪定对LPS诱导星形胶质细胞MCP-1分泌的影响

目的 研究右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA分泌的影响.方法 培养原代大鼠星形胶质细胞,待诱导分化成熟,免疫组化检测α-2A肾上腺受体的表达;不同浓度LPS刺激星形胶质细胞,观察LPS浓度与MCP-1 mRNA表达的量效关系;随后将细胞随机分为6组:对照组(control组)、LPS(200 ng/ml)刺激组(LPS组)、右美托咪定(DEX)500 ng/ml孵育组(DEX组)、DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS(200 ng/ml)组[DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS组],荧光实时定量PCR检测各组MCP-1 mRNA的表达.结果 α-2A肾上腺受体在星形胶质细胞表达,与细胞标志物GFAP完全共标;不同浓度LPS刺激可引起MCP-1剂量依赖性的表达增加(F(6,41)=289.35,P<0.001),LPS刺激引起MCP-1 mRNA表达量增加的ED50为150.8 ng/ml,ED95为344.1 ng/ml,r=0.86;与LPS组相比,不同浓度右美托咪定均可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞MCP-1 mRNA升高(F(5,21)=454.15,P<0.001).结论右美托咪定可抑制LPS刺激大鼠星形胶质细胞MCP-1 mR-NA的表达,该作用可能是其减轻疼痛的机制之一.     

Cyclin D3、CDK11p58在脂多糖诱导大鼠星形胶质细胞活化过程中的表达及相互作用

目的 :探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导星形胶质细胞活化过程中细胞周期蛋白D3(cyclin D3)、周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)11p58的表达、亚细胞定位及相互作用。方法:LPS刺激体外培养大鼠星形胶质细胞,采用Western Blot技术检测过程中cyclin D3及CDK11p58蛋白的表达情况;用免疫共沉淀技术分析LPS刺激前后cyclin D3及CDK11p58形成复合物的情况;用免疫荧光双标技术检测二者的亚细胞定位情况;将cyclin D3真核表达载体转染入星形胶质细胞,用核浆分离技术分析过表达cyclin D3对于CDK11p58亚细胞定位影响。结果:LPS呈浓度依赖性上调星形胶质细胞内cyclin D3及CDK11p58蛋白表达;cyclin D3与CDK11p58可形成复合物,LPS刺激增强二者相互作用;静息状态下星形胶质细胞内cyclin D3及CDK11p58均主要位于细胞核,但在细胞质内亦有不同程度表达,LPS刺激后二者均向细胞核聚集,且出现明显细胞核内共定位;过表达cyclin D3可促进CDK11p58向细胞核转运。结论:LPS可刺激大鼠星形胶质细胞内cyclin D3及CDK11p58蛋白表达;cyclin D3通过与CDK11p58相互作用,促进CDK11p58细胞核转运,从而参与星形胶质细胞活化过程。     

金银花提取物含药血清对正常的及LPS刺激的大鼠原代小胶质细胞释放NO的影响

目的运用血清药理学方法考察金银花提取物(louicera japonica thumb,LTE)含药血清对正常及细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠原代小胶质细胞释放一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。方法采用Griess比色法和四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2thiahiazoy1)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]法检测LTE含药血清对正常及LPS(1 mg/L)刺激48 h大鼠原代小胶质细胞释放NO的影响。结果LTE含药血清在不影响细胞存活率的情况下,可以明显降低正常及LPS刺激大鼠原代小胶质细胞NO的释放量。结论LTE含药血清具有抗炎及免疫抑制作用。     

表面活性蛋白A在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及炎症调节作用

目的探讨表面活性蛋白A (SPA)在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及其炎症调节作用。方法分别采用免疫荧光双染和免疫组织化学染色法检测SPA在健康大鼠脑组织的星形胶质细胞、体外培养的星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况。采用不同浓度(1、5、10μg/mL)脂多糖(LPS)培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞24 h,10μg/mL LPS培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞2、4、8、16、24 h,采用Western blotting检测细胞中SPA的表达情况。将人星形胶质细胞及小胶质细胞随机各分为LPS组(含有5μg/mL LPS的培养液)、LPS+SPA组(含有5μg/mL LPS和0.5μg/mL SPA的培养液)、SPA组(含有0.5μg/mL SPA的培养液)和对照组(未加入任何处理因素的培养基)。各组细胞培养8 h,采用Western blotting检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65蛋白表达;ELISA法检测各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 SPA在大鼠脑组织的星形胶质细胞中表达,在体外培养的人星形胶质细胞和...     

莱菔硫烷抑制LPS诱导的小鼠星形胶质细胞增殖

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(astrocyte,AST)增殖的影响及其机制.方法 体外培养小鼠原代星形胶质细胞,给予0.1 μg/mL LPS刺激星形胶质细胞活化增殖;同时分别给予不同浓度的莱菔硫烷(10、15、20 μmol/L)处理星形胶质细胞24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况;选取20 μmoL/L作为干预剂量行GFAP、Ki67双标免疫荧光染色及流式细胞仪细胞周期检测,进一步验证莱菔硫烷对LPS诱导星形胶质增殖的作用;Western blot检测细胞周期相关蛋白P27kip1、CyclinD1、PCNA的表达情况.结果 CCK8法检测显示0.1μg/mL LPS能显著促进星形胶质细胞增殖(P＜0.01),而加入20μmol/L莱菔硫烷能显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞增殖(P＜0.01),并能减少LPS刺激下的Ki67阳性细胞(P＜0.05);细胞周期分析提示20 μmol/L莱菔硫烷可减少LPS诱导下的星形胶质细胞S期比例,增加G1期细胞比例(P＜0.05);Western blot提示20 μmol/L莱菔硫烷能下调LPS刺激下PCNA、CyclinD1的表达,上调P27kip1表达(P＜0.05).结论 莱菔硫烷可以通过调控星形胶质细胞细胞周期,抑制体外LPS诱导的星形胶质细胞增殖.     

依达拉奉干预LPS介导原代小胶质细胞的激活实验

目的 探索依达拉奉 (edaravone, EDA) 对脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) 介导原代小胶质细胞 (Microglia) 激活后的一氧化氮 (nitric oxide, NO) 调控作用.方法 麻醉SD大鼠新生鼠断头取脑, 消化离心等实验方法完成混合胶质细胞的原代培养, 通过生物摇床方法分离、纯化小胶质细胞.利用Griess法检测一氧化氮释放量.结果 通过荧光方法鉴定小胶质细胞的纯化可达到95%以上, 与对照组 (Control) 相比, LPS介导小胶质细胞后激活可见NO浓度显著上升 (P<0.05) , 建模成功;用EDA预处理原代小胶质细胞24 h后, LPS介导的NO下调, 与LPS单独组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) .同时, EDA先预处理24 h, MAPK inhibitor (丝裂原活化蛋白激酶抑制剂) 预处理30 min, 10 ng/m L LPS介导小胶质细胞16 h, NO释放量显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) .结论 EDA单独应用可抑制LPS介导原代小胶质细胞激活后NO的释放量;EDA同时加用MAPK信号传递通路抑制剂, 加强了EDA减轻LPS介导小胶质细胞激活NO产生.EDA可能与p38MAPK、JNK、ERK信号传导通路抑制剂协同抑制LPS介导的原代小胶质细胞激活有关.