肝癌、癌旁肝组织IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体及CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达

本文采用免疫组织化学(ABC)法、Western印迹法和Northern印迹法从细胞、蛋白及转录水平观察17例肝癌及癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达。结果表明,肝癌组织中3种基因产物的表达水平显著高于正常肝组织;癌旁肝组织中IGF-Ⅱ和IGF-Ⅱ受体的表达水平显著高于肝癌组织;肝癌及癌旁肝组织IGF-Ⅱ基因呈胚胎型表达特点。但是,肝癌组织中CSF-1受体基因表达则显著高于癌旁肝组织。由此提示3种基因产物异常的过量表达与肝癌细胞自分泌生长刺激机制有关。     

早期生长反应因子1在消化系统肿瘤中的异常表达及其生物学意义

目的 明确早期生长反应因子1(EGRl)在胃癌、肝癌、大肠癌和食管癌中的表达水平变化,探讨其在肿瘤发生发展中的作用.方法 在获得胃癌差异基因表达谱的基础上,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在胃癌组织和癌旁形态学正常组织及非癌患者正常胃黏膜组织中验证EGR1基因mRNA的表达水平;进一步利用RT-PCR和Western印迹分析比较EGR1在20株肿瘤细胞系(胃癌7株、肝癌5株、大肠癌5株及食管癌3株)中mRNA和蛋白水平表达的变化;采用组织芯片和免疫组织化学方法分析EGR1在179例癌组织及159例正常组织中的表达变化及生物学意义.结果 在非癌患者正常胃黏膜组织中EGR1基因呈低水平或阴性表达,而在癌和癌旁形态学正常组织均有较高水平的表达,与胃癌基因表达谱信息一致.在多种肿瘤细胞系和癌组织中及癌旁形态学正常组织中均存在EGR1的高表达.在检测的4种人肿瘤组织和癌旁形态学正常组织中EGR1均主要表达于胞质,其中胃癌及癌旁分别为87%(49/56)和79%(43/54);肝癌及癌旁分别为83%(43/52)和79%(32/42);大肠癌和癌旁分别为78%(41/52)和63%(22/35);食管癌和癌旁分别为79%(15/19)和78%(14/18).EGR1在肿瘤组织和癌旁形态学正常组织均呈现高水平表达,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EGR1在癌和癌旁配对正常组织中以胞质为主高表达而在非癌患者正常组织以胞核为主低表达,EGR1可能与癌变早期的细胞异常增殖相关.     

PAGE5基因在肝细胞癌中的表达及对增殖与转移的影响

目的 研究PAGE5基因在肝细胞癌(以下简称肝癌)样本及肝癌细胞株中的表达情况以及被沉默后对肝癌细胞株PLC/PRF/5及Focus细胞生长及转移能力的影响,分析PAGE5与甲胎蛋白(AFP)基因在肝癌组织样本中表达的相关性.方法 采用半定量PCR方法检测PAGE5在32例肝癌组织样本及其癌旁组织以及12株人肝癌细胞株中的表达;分析48例肝癌组织样本中PAGE5与AFP基因表达;同时观察干扰PAGE5表达后肝癌细胞增殖及转移能力的改变.结果 在34.4％的肝癌组织样本中PAGE5基因表达上调;PAGE5基因表达与AFP表达水平呈正相关;利用RNA干扰技术沉默PAGE5基因表达后,PLC/PRF/5及Focus转移能力明显下降.结论 PAGE5基因在肝癌发生及维持肝癌细胞恶性表型中可能起到重要作用,深入研究PAGE5基因在肝癌中的功能,有望成为肝癌诊断标志物及潜在的治疗靶点.     

Expression of Tumor Suppressor Gene Maspin in Hepatocellular Carcinoma and Its Clinical Significance

目的 探讨抑癌基因maspin在肝癌组织中的表达及其临床意义.方法 选取肝癌组织及其癌旁肝组织各32例,另选择正常肝脏组织30例作为对照,采用免疫组化法检测3种组织中maspin基因的表达情况,并分析maspin基因表达与肝癌临床参数的关系.结果 肝癌组织maspin基因阳性率(28.1%)显著低于癌旁组织(62.5%)和正常肝组织(86.7%);肝癌组织中maspin基因表达阳性率与肿瘤分化程度、有无肝内外转移有关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤直径、TMN分期和有无门静脉侵犯无关(P＞0.05).结论 maspin基因在肝癌组织中呈低表达,其表达情况可作为判断肝癌进展情况和恶性程度的指标之一.     

癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义

目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高（53．6％、57．1％）,SSX-2表达阳性率相对较低（35．7％）,其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例（21．4％）,至少有两种SSX基因表达的有23例（82．1％）。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。     

肝细胞性肝癌中E2F8基因受表观遗传学调控的特征

目的 研究在肝细胞性肝癌中表观遗传性调控E2F8基因表达的特征,包括E2F8基因启动子区域甲基化状态、靶向调控E2F8基因的微小RNA(microRNA)在肝细胞性肝癌中的表达谱.方法 分析E2F8基因启动子区域DNA序列的CpG位点分布特征,亚硫酸氢盐修饰DNA后,测序检测肝细胞性肝癌患者的癌组织与癌旁组织中E2F8...     

一组与胃黏膜病变演化及早期癌变相关基因的鉴定及生物学意义

目的:鉴定能够特异性识别肿瘤生物学行为和预测肿瘤早期发生的分子标志谱,为胃癌早期诊断和有效防治提供实验依据和理论基础.方法:利用优化的70 mer的22K-Oligo基因芯片杂交和生物信息学分析,建立了胃癌(gastric cancer,GC)和癌旁形态学正常组织(normal appearing tissue,NAT)差异基因表达谱.通过设立以混合的正常胃黏膜组织作为共同参照(common reference,CR),将胃癌和配对癌旁形态学正常组织表达无明显差别的一类基因分离出来,这些基因主要是参与细胞增殖、代谢和分化过程的调控.在此基础上鉴定出一组与胃黏膜病变演化和细胞癌变早期相关的差异表达基因.结果:利用半定量RT-PCR,免疫组织化学染色方法对差异表达基因进行了验证,获得了与芯片表达谱数据一致的结果.进一步的生物信息学分析和实验研究明确了3个有代表性的基因(EGR1、CYR61和ADAMTS1)在胃癌及癌旁形态学正常组织、异型增生、肠上皮化生和非癌患者正常胃黏膜组织中的表达变化.癌和配对形态学正常组织表达水平未见明显差异的这一组基因,在肠化和异型增生组织中,mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织.结论:肿瘤患者癌旁形态学正常组织中的基因表达模式已经发生了改变.EGR1、CYR61和ADAMTS1基因过量表达参与胃黏膜病变的演化过程,这一组基因的异常表达可能是胃癌发生的早期事件之一.     

CLEC12B在肝癌中的表达及其临床意义

目的:研究CLEC12B在肝癌组织中的表达,探索其在肝癌发生发展及预后中的作用。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)下载肝癌数据集,获得CLEC12B基因表达谱和临床资料。比较CLEC12B在肝癌和癌旁组织中的表达差异;分析CLEC12B在肝癌组织中的表达与临床病理学参数和疾病预后的相关性;利用基因富集化分析预测CLEC12B影响肝癌发生发展的机制。结果:与癌旁组织相比,CLEC12B在肝癌组织中呈低表达。CLEC12B表达状态是影响肝癌患者预后的独立因素,高表达患者总体生存期优于低表达患者。CLEC12B高表达富集到DNA修复,低表达则富集到炎症反应等基因集。结论:CLEC12B可能通过炎症及DNA修复等影响肝癌发生发展及预后。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

Wnt诱导分泌蛋白-1在PHC中的表达及意义

目的 探讨Wnt诱导分泌蛋白-1(Wnt induced secreted protein-1, WISP-1)在原发性肝癌(primary hepatic carcinoma, PHC)中表达水平变化及其意义。方法 收集34例PHC患者及12例肝血管瘤患者手术组织标本(包括肿瘤组织及其相应的癌旁/瘤旁组织),用RT-qPCR方法检测各组WISP-1基因表达水平,用Western印迹法测定WISP-1蛋白表达水平,分析WISP-1表达与PHC患者临床特征的相关性。结果 WISP-1基因在70.6%(24/34)的PHC患者中高表达,肝癌组织中WISP-1的平均表达水平是正常肝组织的(2.65±1.16)倍,差异有统计学意义(P=0.011);Western印迹法测定的蛋白表达水平与基因表达水平一致。WISP-1基因表达与肝癌的病理分级及肿瘤分期有明显相关性,而与年龄、性别、AFP水平、肝癌类型及肿瘤位置无明显相关性。结论 WISP-1在PHC中高表达,并与其病程进展相关,WISP-1可能是治疗PHC的潜在靶点。     

肝细胞癌组织中PTEN蛋白表达的意义

目的:探讨肝癌组织中抑癌基因PTEN蛋白表达的意义。方法:应用免疫组织化学S-P法检测37例肝细胞癌及相应的癌旁组织与6例正常肝组织中PTEN蛋白的表达情况,分析HCC中PTEN蛋白表达与各临床病理特征关系。结果:PTEN蛋白在正常肝组织及HCC癌旁组织中表达高于癌组织,差异有显著性(P<0.05),但正常肝组织与癌旁组织表达无显著性差异(P>0.05)。分化程度高的HCC中PTEN表达高于低分化者,ChildA级高于B和C级,差异有显著性(P<0.05);无静脉浸润者高于有静脉浸润者,差异有显著性(P<0.05);PTEN蛋白表达在性别、年龄、有无包膜、大体类型及肿瘤大小间无明显差异(P>0.05)。结论:肝癌组织中PTEN蛋白阴性表达率较高,PTEN可作为检测肝癌生物学特征的一种分子标记。     

肝癌细胞表达差异cDNA克隆的研究

目的：筛选肝细胞癌(HCC)相关基因，探讨其在HCC发病中的临床意义。方法：用差异显示技术对比研究正常肝组织，胎肝组织，HCC组织及癌旁肝组织之间mRNA的表达差异，以肝癌cDNA片段MRG8．2为探针，对10例HCC及癌旁肝组织进行斑点印渍分析，并通过逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测这些标本血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平。结果：获得55个HCC差示cDNA片段，其中24个cDNA片段同时表达于HCC和胎肝组织cHCC差示片段MRG98．2在7例HCC标本中表达阳性(7／10)，癌旁肝组织弱表达(2／10)或元表达。VEGFmRNA在7例MRG98．2阳性表达的HCC标本中6例表达上调。结论：胚胎期某些基因的激活与HCC发生有关，差示片段MRG98．2可能是HCC相关的基因片段，其表达与VEGFmRNA一致，并可能与肿瘤浸润转移及顶后不良有关。     

凋亡抑制基因Survivin在人肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨凋亡抑制基因Survivin在人肝癌 (HCC)中的表达及其临床意义。　方法 :应用SABC免疫组化染色技术和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测 95例HCC及其癌旁组织、8例非肝癌肝组织Survivin蛋白以及 8例HCC组织SurvivinmRNA的表达 ,分析其与病理分级、临床分期和肿瘤大小等临床指标之间的关系。　结果 :HCC组织中Survivin基因蛋白表达率显著高于癌旁组织和非肝癌肝组织 (5 9.77%vs 2 6 .0 0 %和 5 9.77%vs0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;HCC组织中SurvivinmRNA表达阳性率显著高于癌旁组织 (37.5 %vs 0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;Sur vivin蛋白表达与肝癌组织学分级、临床分期、肿瘤大小无相关关系。　结论 :Survivin基因在HCC组织表达上调 ,提示该基因参与了HCC的发生过程 ;Survivin基因表达与组织分化程度无关 ,提示其可能成为HCC特异性诊断指标或基因治疗的新靶点。     

Expression of autotaxin mRNA in human hepatocellular carcinoma

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｔａｘｉｎ（ＡＴＸ）ｍＲＮＡｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）,ａｎｄｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｒｅｉｓｒｅｌａｔｉｏｎ...     

SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义

目的 探讨SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义.方法 应用免疫组化技术研究SOX4基因在30例术后早期复发肝癌、30例非术后早期复发肝癌和30例正常肝脏组织的表达.结果 SOX4基因在肝癌中的表达高于正常肝组织(41.7%v 16.7%,P<0.05),SOX4基因在术后早期复发肝癌的表达高于非术后早期复发肝癌(56.7%vs26.7%,P<0.05),SOX4基因的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、乙肝表面抗原、Edmonson分级无关(P>0.05).结论 SOX4基因与肝癌的术后早期复发密切相关,SOX4基因高表达有可能促进了肝癌的早期复发,并可以作为肝癌判断预后的分子指标之一.     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

目的：应用实时荧光定量PCR法检测原发性肝细胞癌中CDK4基因的表达。方法：提取手术切除人肝癌和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中cDK4的表达水平。结果：20例肝细胞癌标本中有18例肿瘤组织中CDK4基因表达明显高于癌旁肝组织，其中7例高出4倍以上。结论：实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达；CDK4基因在肝细胞癌的发生、发展中可能起重要作用。     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

脆性位点基因WWOX mRNA在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的 检测WWOX野生型mRNA及其异常转录剪接体在肝细胞癌中的表达情况,并分析其临床病理意义.方法 采用Real-time RT-PCR和RT-PCR方法检测44例肝细胞癌(HCC)、相应癌旁肝组织和5例正常肝组织中WWOX野生型mRNA及转录剪接体Variant1、Variant4及Variant6的表达,同时分析...     

肝癌细胞株中肿瘤特异性抗原GAGE基因mRNA的表达

目的:研究肿瘤特异性抗原GAGE基因mRNA在BEL-7404肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法:运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404中GAGE基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果:肝癌细胞株BEL-7404中GAGE基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE基因表达阴性。结论:GAGE基因可作为肝癌诊断的分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。