刚地弓形虫ME49株对体外培养的小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的研究刚地弓形虫ME49株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响。方法制备小鼠胎盘滋养层细胞并分别接种于不同细胞培养板,对照组加入DMEM高糖培养液孵育,实验组加入相同体积不同密度(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养8h后,AnnexinⅤ-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有升高趋势(P0.05),呈量效依赖性,弓形虫密度8×106/ml组8h凋亡率最高,为28.37%;荧光显微镜观察,随弓形虫感染密度增加,滋养层细胞凋亡数目增多。蛋白质印迹法检测刚地弓形虫ME49株作用于滋养层细胞8h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达(与β-actin比值)各为1.24±0.05、1.37±0.03、1.78±0.04与1.15±0.03、1.09±0.05、0.97±0.01,较对照组的比值(1.17±0.06和1.23±0.02)有明显的改变(P0.05)。结论刚地弓形虫ME49株可促进体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

全血培养对体外培养PBMC细胞凋亡的影响

目的:了解不同的体外培养方法对健康青年人外周血单个核细胞(PBMC)凋亡的影响.方法:通过用RPMI-1640培养基和RPMI-1640中混入不同比例全血(1:10,1:5)的培养基来培养PBMC,用流式细胞术(FCM)观察24h细胞凋亡发生的情况;并同时用ELISA法观察细胞培养上清中TNF的水平.结果:三种培养基培养24h后PBMC的凋亡率分别为(12.04±4.38)%,(7.21±2.16)%和(2.38±0.68)%,含全血的两组与RPMI-1640组差异显著(P＜0.05,P＜0.01);三种培养基培养PBMC24h后细胞上清液TNF分别为(2.89±1.43),(5.15±1.84)和(6.52±3.06)(ng/ml),两全血培养基组与RPMI-1640组差异显著(P＜0.01),而两全血培养基组间差异无显著性(P＞0.05).结论:混入全血的培养基对培养PBMC细胞凋亡的影响小于单纯RPMI-1640培养基.     

江浙蝮蛇毒对体外培养人滑膜细胞凋亡的影响

目的 探讨江浙腹蛇毒 (AHV) 诱导类风湿性关节炎 (RA) 患者滑膜细胞凋亡的作用及对相关蛋白 Caspase-3 表达的影响。方法 AHV 处理培养的滑膜细胞后，采用 MTT 比色法检测 AHV 对滑膜细胞增殖的抑制作用，并采用流式细胞仪 (FCM) 检测细胞凋亡率，以免疫组织化学法检测 Caspase-3 蛋白的表达。结果 MTT 的检测结果显示 5 μg/mL AHV 处理组滑膜细胞增殖抑制率达 67.2%，且与时间、剂量具有正相关关系 (P＜0.05)，AHV 体外作用滑膜细胞 24 h 的 IC₅₀ 为 3.508 μg/mL。流式细胞仪结果显示，与对照组相比，AHV 各剂量组凋亡率明显增加 (P＜0.05)，并与剂量呈正相关。AHV 体外作用滑膜细胞 24 h 时出现了明显的 Caspase-3 蛋白表达，其蛋白表达率明显高于对照组。结论 AHV 对滑膜细胞具有较强的增殖抑制作用，细胞凋亡率明显增加可能与 AHV 诱导滑膜细胞 Caspase-3 活化相关。     

5一羟色胺对人胎盘滋养细胞L-型钙通道的影响

目的探讨5一羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分为对照组和低（1．01xmol／L）、高（10．0μmol／L）浓度5一羟色胺组。采用全细胞膜片钳实验方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入Nimodpine（10μmol／L）、Flunarizne（10μmol／L）和替曲朵辛（Trxl01．Lmol／L）,进行电流检测;同样的实验条件和方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入5-TH（1μmol／L和101xmol／L）,测试电流值;在细胞外液中分别加入5-TH（μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）、5-TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后再检测电流。结果胎盘滋养细胞L-型钙通道开放在一60--50mV之间,最大峰值电流在一40～30mV为82．31±6．46（pA）。加入Nimodpine（10μmol／L）。可阻断此电流大部分成份。Flunarizne（10Ixmol／L）和’兀X（10肛m0ⅣL）不能抑制该电流成份。加入5-TH（1μmol/L和10μmol／L）峰值电流明分别为104．77±10．84（pA）和117．16±9．67（pA）,与对照组相比有显著差异（P〈0．05）;加入5-TH（1μmo]／L）和Nimodpine（101xmol／L）、5一TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后;峰值电流分别为85．35±6．54（pA）、89．42±7．62（pA）,与对照组相比无显著差异（P〉0．05）。结论5-TH可激动胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

刚地弓形虫RH株对小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的 通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制.方法 将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养2、4、8 h,Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化;荧光显微镜观察细胞形态改变情况;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性.结果 流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有下降趋势(P<0 05),呈量效依赖性,弓形虫数量8×106/ml实验组8 h凋亡率最低,为(15.81±0.19)%;荧光显微镜观察到8 h不同数量实验组滋养细胞凋亡形态改变情况,各组均有典型的早期凋亡细胞:细胞膜着绿色,细胞核拒染.随着弓形虫感染数量增加,凋亡细胞数目有所减少.Western blot 检测刚地弓形虫RH株作用于滋养层细胞8 h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组分别有明显的降低与升高(P<0.05).结论 刚地弓形虫RH株可抵抗体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达下调和Bcl-2表达上调有关.     

人胎盘滋养层细胞的超微结构及凋亡

目的：观察不同孕期胎盘滋养层细胞的超微结构和凋亡现象。方法：取早、中、晚各期胎盘组织，制备成透射电镜标本并观察，结果：细胞滋养层细胞（CT）在各妊娠时期形态结构相似。呈代分化细胞的特点，细胞核常染色质丰富，细胞质中有大量散在游离核糖体，内质网较少，高尔基复合体不发达。合体滋养层细胞（ST）为分化良好的细胞，细胞质内含丰富的扩张内质网，高尔基复合体发达。CT核数／ST核数随妊娠时间增加而减少。中、晚期有些ST核染色质呈边集、固缩等凋亡表现，且多发生丰合体结，足月胎盘ST的凋亡指数AI在于中期（P＜0．05）。结论：妊娠过程中滋养层细胞的形态学变化与ST的凋亡有关。     

铅对胎盘细胞凋亡的影响

孕期一定剂量的铅暴露可通过诱导细胞凋亡而造成胎盘损伤,并进而导致病理妊娠。为实现优生优育,孕期铅暴露应该受到重视。本文就铅诱导细胞凋亡的作用机制、胎盘细胞凋亡的意义及铅致胎盘凋亡的表现及相关机制综述如下。     

凋亡素在体外对人卵巢癌细胞及正常卵巢细胞凋亡的影响

目的　探讨凋亡素基因 (VP3)表达对人卵巢癌细胞和正常卵巢细胞凋亡的影响。方法　采用LipofectamineTM2 0 0 0介导的基因转染方法将重组凋亡素真核表达质粒pcDNA3.1 -VP3 导入仓鼠正常卵巢细胞CHO -K1、人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞耐药亚株CoC1 DDP。结果　凋亡素基因已在转染细胞中存在并在转录水平表达 ;CHO -K1中凋亡素组与空质粒组凋亡率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。CoC1和CoC1 DDP中 ,凋亡素组凋亡率明显高于空白对照组和空质粒组 (P <0 .0 1 ) ,且凋亡素更易诱导CoC1 DDP细胞凋亡 (P <0 .0 1 )。结论　在转染细胞中凋亡素基因在转录水平得到表达 ;凋亡素能特异性诱导人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞顺铂耐药亚株CoC1 DDP凋亡 ,不影响正常卵巢细胞CHO -K1 ;凋亡素更易诱导卵巢癌顺铂耐药亚株CoC1 DDP细胞的凋亡     

醋酸铅对体外培养人肾小球系膜细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞（HRMC）的凋亡作用。方法醋酸铅处理HRMC后,HE染色法观察细胞形态学变化;细胞免疫组织化学法检测p53、bax、bcl-2的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10、20μmol/L醋酸铅处理24 h后,HE染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。HRMC的细胞免疫组织化学结果显示醋酸铅组的p53和bax阳性表达升高,而bcl-2的阳性表达下降。流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可促进HRMC凋亡,进而影响肾脏正常功能。     

巨细胞病毒诱导体外人血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨HCMV感染对体外培养人血管内皮细胞凋亡的影响。方法建立HCMV-AD169株感染体外培养人脐静脉血管内皮细胞模型,应用AV/PI双染法检测HCMV感染后ECs的凋亡变化。结果体外情况下HCMV感染后不同时相点(12、24、48、72h),ECs的凋亡率分别为(10.6±4.6)%,(23.8±6.9)%,(39.4±8.9)%,(31.4±7.8)%,明显高于对照组细胞。结论HCMV感染诱导ECs凋亡的异常改变可能参与了动脉粥样硬化的发生发展。     

缺氧再灌注对早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响

目的 探讨缺氧再灌注对原代培养早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕(7～9周)绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养层细胞进行原代培养.将培养细胞随机分为20％氧浓度组(A组)、1％氧浓度组(B组)、缺氧再灌注组(将细胞放入1％氧浓度培养箱2h后,移入20％氧浓度培养箱培养6h,C组).计数细胞数目,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测细胞促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2及TNF-α基因表达.结果 ①与A组比较,B组细胞滋养层细胞数目明显增加(P＜0.05);与A、B组相比,C组细胞滋养层细胞数目明显减少(P＜0.05);②与A组比较,B组细胞培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05);与B组比较,C组培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05);③与A组比较,B组凋亡细胞核数目明显增加(P＜0.05);与B组相比,C组细胞凋亡明显增加(P＜0.05).结论 ①低氧促进早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡;②缺氧再灌注抑制早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡.     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

8-溴-7-甲氧基白杨素对顺铂耐药卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的影响

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)诱导人顺铂耐药卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡作用及细胞凋亡过程中Akt蛋白磷酸化水平的变化。方法:用不同浓度的BrMC处理体外培养的A2780/DDP细胞,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA检测试剂盒检测凋亡性细胞死亡,Western Blot分析Akt蛋白磷酸化水平。结果:BrMC具有诱导A2780/DDP细胞凋亡作用,并且随药物浓度的增加而增强;同时BrMC以浓度依赖的方式下降Akt蛋白磷酸化水平。结论:BrMC诱导A2780/DDP细胞凋亡与其抑制Akt活化相关。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的 观察5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素（ADFMChR）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用效果及其可能机制.方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分别应用不同浓度的ADFMChR处理人宫颈癌HeLa细胞,用AO/EB染色观察ADFMChR作用HeLa细胞48h后凋亡形态学改变;流式细胞术（FCM）检测ADFMChR作用HeLa细胞后的凋亡率;Westernblot分析ADFMChR对HeLa细胞caspase-3蛋白和mcl-1蛋白表达的影响.结果 不同浓度的ADFMChR处理HeLa细胞48h后,细胞出现典型的细胞凋亡形态特征,凋亡率呈浓度依赖性,同时细胞caspase-3蛋白表达上调,mcl-1蛋白表达下降.结论 ADFMChR具有体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,呈浓度依赖性,其机制可能与其上调caspase-3及下调mcl-1蛋白表达有关.     

金雀异黄素诱导培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 :探讨金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)的促凋亡作用 .方法 :将不同浓度的金雀异黄素作用于培养人视网膜色素上皮细胞 ,通过TUNEL染色和光、电镜的形态学观察 ,观察金雀异黄素对培养hRPE凋亡的诱导作用 .结果 :不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡 ,5 0mg·L-1 金雀异黄素作用 2 4h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现 ,作用时间在 2 4 ,4 8和 72h ,其凋亡细胞百分数的中位数分别为 7.6 % ,9.8%和 1 3.7% ;当金雀异黄素浓度为 75和1 0 0mg·L-1 时 ,以上 3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为 1 0 .3% ,1 6 .4 %和 2 3.4 % ;1 5 .4 % ,2 1 .2 %和 35 .8% .透射电镜观察 ,5 0mg·L-1 浓度作用于细胞 ,胞核内染色体出现边集 ,表现凋亡的早期征象 ;75mg·L-1 作用呈现典型的凋亡特征 ;1 0 0mg·L-1 作用于细胞 ,除凋亡细胞外 ,部分细胞出现胞质的进行性溶解 ,有胞膜破坏现象 ,坏死细胞比例增多 .结论 :金雀异黄素可诱导RPE凋亡的发生 ,并有剂量和时间效应关系 .1 0 0mg·L-1 金雀异黄素使RPE坏死     

雷公藤甲素对兔血管平滑肌细胞增生和凋亡的影响

目的 研究雷公藤甲素（TP）是否具有抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖并诱导其发生凋亡的作用,为临床开发新型药物洗脱支架提供实验依据。方法主动脉SMCs体外培养和流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳。结果TP组与阳性对照地塞米松相比,凋亡率有显著提高;TP干预组凝胶电泳谱型呈凋亡特征性梯状条带。结论TP可抑制指数生长期SMCs增殖并诱导其凋亡。     

5-Fu对人结肠癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人结肠癌细胞凋亡及其相关基因表达的影响。方法:Hct/8细胞分为5-Fu组和对照组，通过凋亡细胞数量、形态、基因组DNA片段化及流式细胞仪检测观察5-Fu对人结肠癌细胞凋亡情况的影响，并通过基因芯片测定相关基因改变。结果：吖啶橙染色及基因组DNA电泳显示5-Fu组凋亡细胞数量明显多于对照组（P<0.01）；基因芯片检测显示，5-Fu致多种基因表达发生改变，尤其是与DNA损伤修复相关基因出现表达下调。结论：5-Fu具有致人结肠癌细胞凋亡的作用，其原因是由于多种基因表达改变相互作用影响所致，尤其是DNA损伤修复相关基因的改变致不能及时修复受损的基因，最终致癌细胞发生凋亡。     

胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞凋亡及小窝蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡及小窝蛋白(caveolin,Cav)-1表达的影响?方法:体外培养HUVEC,分为A组(对照组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L)?B组(高糖组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L)?C组(高糖+低浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/+胰岛素浓度20 mU/L)?D组(高糖+高浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L+胰岛素浓度1 000 mU/L)?采用流式细胞仪检测细胞凋亡比例及细胞周期,免疫组化检测HUVEC的Cav-1表达?结果:在高糖条件下,HUVEC凋亡比例显著升高,停滞于G0/G1期细胞增加,Cav-1表达减少;低浓度胰岛素使细胞凋亡比例减少,Cav-1表达增加;加入高浓度胰岛素不能改变细胞凋亡比例及细胞周期,Cav-1表达亦无明显改变?结论:低浓度胰岛素可抑制高糖导致的内皮细胞凋亡,而高浓度胰岛素无此作用,其机制可能与Cav-1表达有关?     

Effects of Nitric Oxide on Proliferation and Apoptosis of Cultured Bovine Trabecular Meshwork Cell

Nitric Oxide (NO) shows a dualism in thepathogenesis of glaucoma:in one side,NO can im-prove outflow facility of aqueous humor and dropintraocular pressure (IOP) ;on the other side,ithas direct toxic effect on retinal ganglion cell[1] .Our preveious studies demonstrated,in some ex-tent,pressure could induce inducible nitric oxidesynthase(i NOS) m RNA expression,so to increase NOS synthesis and NO level[2 ] .In this experimentwe discussed the effects of NO on the proliferationand apopto…