吖啶诱变剂ICR-170致弱日本血吸虫尾蚴诱导的保护性免疫效应观察

为了观察吖啶诱变无产卵能力的血吸虫是否能诱生抗感染的保护性免疫力,用 １０ μｇ／ｍ ｌ吖啶诱变剂 Ｉ Ｃ Ｒ１７０ 致弱日本血吸虫尾蚴作免疫原,免疫 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｎ 小鼠两次,分别于初次免疫后６、８、１０ ｗ ｋ 用正常尾蚴作攻击感染。结果免疫鼠成虫减少率为６８．９％ ,肝组织虫卵减少率为７４．９％ 。动态观察显示,初次免疫后６ ｗ ｋ 攻击感染的减虫率最高,减卵率高峰在６～８ ｗ ｋ。表明诱变剂 Ｉ Ｃ Ｒ１７０ 致弱日本血吸虫尾蚴发育的变异成虫具有较高的免疫原性,可诱导较高的抗攻击感染的保护性免疫力。     

吖啶诱变剂ICR-170对日本血吸虫雌虫卵巢、卵黄腺发育的抑制作用

吖啶诱变剂ICR-170和血吸虫尾蚴温育（30．5℃）后，经皮感染小鼠，6wk解剖，检视成虫发育情况，发现10μg／ml30min组28条雌虫中，发生卵巢、卵黄腺全缺或畸变者24条，诱变率高达85．7％；雄虫未见明显影响；所有不育的畸变雌虫仍被雄虫抱合，寄居在肠系膜静脉或肝门静脉内。本实验为进一步研究保护性免疫的诱导，提供了另一种形式的致弱虫体抗原。     

诱变剂NTG致弱的日本血吸虫尾蚴免疫效果的进一步观察

为了进一步了解诱变剂(NTG)致弱尾蚴的免疫效果,以NTG(30μg/ml)致弱15min后,经皮感染免疫小鼠两次,间隔一周,观察免疫后不同时间攻击感染(2、4、6、8和10wk)对免疫鼠存活时间,减虫率,肝、脾肿大及肝、脾虫卵肉芽肿程度的影响。同时,还对免疫鼠体内血吸虫进行虫体表面皮层的电镜扫描观察。实验结果表明:NTG致弱尾蚴初次免疫后,8wk攻击感染时减虫率最高(77％),且肝、脾肿大及虫卵肉芽肿病变程度最轻.小鼠存活时间也长。从而提示NTG致弱尾蚴免疫小鼠后,对攻击感染确产生免疫力。但免疫后不同时间所产生的免疫力不同,初次免疫后8wk可能是最适攻击感染时间。对免疫后不同时间所产生的免疫力不同的原因进行了讨论,NTG致弱尾蚴诱导保护性免疫力产生的机制尚待进一步研究阐明。     

PH对ICR-170诱变日本血吸虫雌虫生殖腺的影响

目的 探讨溶液pH对诱变剂ICR—170诱变日本血吸虫雌虫生殖腺的影响程度。方法 用5种pH值(pH7．2—8．0)的ICR—170溶液处理日本血吸虫尾蚴30min或45min后，经皮肤接种小鼠观察雌虫诱变率和成虫回收率。结果 溶液pH值对ICR—170的诱变作用影响较大，诱变率随着溶液pH值的上升而下降。10μg／ml 45min组和15μg／ml 30min组在pH7．2时的雌虫诱变率分别为pH7．8时的13倍和6倍，当pH＞7．4时，2种浓度的ICR—170引起的诱变率基本接近。溶液pH值对于成虫回收率的影响程度远低于对诱变率的影响程度。结论 在诱变日本血吸虫雌虫生殖腺时，ICR—170具有较强的pH依赖型特性。     

致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究

<正> 众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论。血清被动转移实验证明减毒尾坳多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索。     

致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB/c小鼠早期免疫应答动态变化研究

目的比较辐照致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠与正常感染小鼠早期免疫活化程度及其动态变化差异。方法采用流式细胞术（FCM）和免疫组织化学（IHC）方法比较辐照致弱尾蚴免疫小鼠与正常感染小鼠早期脾组织和/或肺组织中树突状细胞（DC）表面分子CD11c、T细胞表面分子CD25表达差异及脾细胞和外周血中CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞比例,分析T细胞免疫活化程度及其动态变化。结果在感染后7d,脾细胞中的CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞比例致弱尾蚴免疫组为（19.52±3.65）%,明显低于正常感染组的（22.12±3.24）%;而在第14、21天,致弱尾蚴免疫组这一比例分别为（28.73±3.94）%和（26.43±0.40）%,均高于正常感染组的（13.68±3.64）%和（14.42±2.24）%。在攻击感染后7、14、21d,致弱尾蚴免疫组与正常感染组小鼠在肺组织中的CD11c＋DC表达率分别为（1.05±0.16）%和（0.96±0.15）%、（1.34±0.15）%和（1.09±0.17）%、（1.49±0.14）%和（0.97±0.16）%,脾组织中CD11c＋DC表达率分别为（2.05±0.26）%和（1.95±0.18）%、（2.24±0.25）%和（2.17±0.25）%、（2.18±0.26）%和（2.06±0.18）%。在攻击感染后7、14、21d,致弱尾蚴免疫组与正常感染组小鼠在肺组织中CD25＋T细胞表达率分别为（1.24±0.13）%和（1.17±0.16）%、（1.48±0.11）%和（1.25±0.13）%、（1.55±0.14）%和（0.97±0.12）%,脾组织中CD25＋T细胞表达率分别为（3.25±0.22）%和（2.93±0.20）%、（4.57±0.23）%和（3.69±0.24）%、（4.28±0.24）%和（3.86±0.26）%,紫外线辐照致弱尾蚴免疫小鼠较正常感染小鼠在攻击感染后第7、14、21天能在肺组织募集更多的CD11c＋DC并激活更多的CD25＋T细胞。结论致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠在攻击感染后14、21d,小鼠体内T细胞激活程度和肺部DC活化程度均高于正常感染组,提示致弱尾蚴在肺部可募集更多抗原递呈细胞并使之活化。     

致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究

目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论　SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 ,提示这些抗原分子可能为抗日本血吸虫病疫苗候选分子的重要靶标     

日本血吸虫和曼氏血吸虫减毒尾蚴免疫小鼠淋巴…

宿主经照射减毒血吸虫尾蚴免疫后获得显著的抗攻击感染的抵抗力。本文探讨紫外线减毒尾蚴免疫小鼠淋巴细胞表型的动态变化。方法：小鼠分别感染减毒日本血吸虫和曼氏血吸虫尾蚴（５００条／只），对照组分别感染两种正常尾蚴（２００条／只），免疫后第３、５、７、１０、１４和２１ｄ各组剖杀６－７只，摘取两侧腋窝淋巴结和脾脏分离细胞，采用双染色免疫荧光标记的单抗及ＦＡＣＳｃａｎ流式细胞仪进行细胞表型分析。结果：免疫小鼠     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

紫外线致弱尾蚴免疫猪血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的 寻找紫外线致弱日本血吸虫尾蚴中起免疫保护作用的候选抗原分子,为血吸虫疫苗研究提供新的候选靶位抗原.方法用紫外线照射致弱尾蚴免疫猪血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,测定用于筛选的cDNA文库滴度,选用最佳滴度的cDNA文库用于筛库.结果测得最佳cDNA文库的滴度为1.89×109 ρfu/mL,经3轮筛选,致弱尾蚴组分别获得20个、10个阳性克隆,经3轮筛选获7个阳性克隆;对照尾蚴组获15个和9个阳性克隆,经3轮筛选获3个阳性克隆;无尾蚴感染组未获阳性克隆.结论获得的阳性克隆可能为寻找编码抗日本血吸虫感染的抗原基因提供了材料与方向.     

日本血吸虫紫外线致弱尾蚴免疫鼠诱导的抗病免疫效应

目的观察日本血吸虫紫外线致弱尾蚴（UVC）疫苗免疫小鼠诱导的抗肝虫卵肉芽肿及纤维化效应。方法将60只C57BL／6小鼠随机分为UVC疫苗免疫组和感染对照组。疫苗免疫组小鼠经皮肤接种UVC后5周,每鼠攻击感染（30±2）条正常日本血吸虫尾蚴;感染对照组经皮肤感染同量尾蚴。于攻击感染后7周解剖小鼠;取肝左叶制备连续石蜡切片,测定肝脏单卯肉芽肿大小;用ELISA法检测血清透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）含量,PCR—ELISA法检测肝组织TGF—β1mRNA的表达水平。结果UVC疫苗免疫组小鼠肝组织单卵肉芽肿直径为（176．25±38．67）μm,显著小于感染对照组的（304．38±53．23）μm（P〈0．01）,与感染对照组相比,UVC疫苗免疫组小鼠肝虫卵肉芽肿直径减小了42．10％。UVC疫苗组小鼠血清中HA、LN含量均显著低于感染对照组,肝纤维化程度明显减轻。结论UVC疫苗免疫小鼠诱导的抗肝虫卵肉芽肿及其纤维化效应同疫苗免疫诱导的细胞免疫应答的增强及高水平的IFN-γ以及肝TGF—β1mRNA表达水平的降低密切相关。     

紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6 小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究

目的观察紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴经耳廓免疫C57BL/6小鼠后,小鼠皮肤组织早期免疫应答的动态变化.方法 98只小鼠测定双侧耳廓厚度后,14只作为0 d组不感染/免疫,其余平均分为2组.一组经双侧耳廓分别感染正常尾蚴150 条/耳, 另一组经双侧耳廓分别免疫紫外线辐照致弱尾蚴150条/耳.感染/免疫后第1、2、4、7、14、21天分别剖杀2组小鼠各7只,测定耳廓厚度.取感染处的耳廓组织,左侧进行培养,收集上清检测相应细胞因子.右侧纵切为二,一半进行HE染色观察炎症反应;另一半应用免疫组化技术观察皮肤组织中IL-12和CD11c分子的表达.结果正常尾蚴感染的小鼠皮肤炎症反应在第7天达到高峰后逐渐下降,第21天基本恢复;而辐照尾蚴免疫小鼠耳廓皮肤在第14天炎症反应才达高峰,第21天反应仍然十分强烈.尾蚴穿皮后第4天,组织中有较高水平的CD11c及IL-12分子表达.皮片培养细胞因子定量检测也显示：与Th1细胞应答相关的IL-12、IFN-γ及Th2型因子IL-10早期在正常、辐照尾蚴差异无显著性.结论和正常尾蚴相比,辐照致弱尾蚴诱导的皮肤免疫应答持续时间长、强度高,但两者诱导Th细胞向不同方向极化并不发生于免疫应答启动阶段.     

照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库

目的从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中获得日本血吸虫新的蛋白编码基因,为防治血吸虫病提供候选疫苗和治疗药物靶点.方法制备致弱尾蚴免疫兔血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,挑取阳性克隆,测序并进行生物信息学分析.结果共筛选出8个阳性克隆,长度分布于0.6～3.0kb.随机选取4个阳性克隆进行PCR扩增及测序,获得2个日本血吸虫新基因:整合酶相似蛋白编码基因和蛋白磷酸酶1催化亚单位编码基因.前者长度为636 bp,含一个462 bp完整开放阅读框(ORF);后者1 879 bp,含一个984 bp完整ORF.两者GenBank的登录号分别为:AY855919、AY879341.结论致弱尾蚴免疫兔血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针;发现了2个日本血吸虫新基因.     

日本血吸虫酚氧化酶诱导免疫对小鼠保护性的初步研究

目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用。方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立3组进行保护性免疫实验A组(实验组)、B组(佐剂对照组)和C组(空白对照组)。初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,最后1次免疫后10d按常规收集各组免疫血清。常规ELISA法测定免疫血清效价。然后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染。6周后,收集成虫计数,常规计算减虫率并检测肝脏虫卵负荷。结果ELISA法测定的酚氧化酶免疫小鼠血清效价在1∶1200以上。日本血吸虫酚氧化酶粗抗原免疫小鼠,其雌虫、雄虫和总虫数的减虫率分别为53.27%、26.76%和39.53%,与C组相比,差异均有极显著意义(P<0.01)。A组减卵率为50.75%,与C组相比,差异有极显著意义(P<0.01)。结论日本血吸虫酚氧化酶具有抗原性,能诱导宿主抗血吸虫感染免疫保护作用。其诱导保护性免疫的机制尚待进一步研究。     

紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB／c小鼠免疫保护作用研究

目的观察紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB／c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37．90％和51．16％;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠能诱导较好的免疫保护力。     

致弱血吸虫尾蚴免疫和早期化疗诱导宿主产生高保护性现象及其效应机制的研究

运用致弱尾蚴免疫和化学药物治疗血吸虫病,可诱导宿主产生对攻击感染的高保护力。该文综述了近年来阐明这两种高保护性现象的动物实验及其相关的效应机制的研究,以期为开拓新的疫苗发展策略和新疫苗的设计提供借鉴。     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的？…

为研究日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原的免疫保护性。方法：将其编码ｃＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后亚克隆入载体重粒ｐＧＥＸ－１λｔ进行表达，并重组抗原免疫了一批昆明鼠。结论：证明重组的日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性 …

研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用ＩＰＴＧ诱导表达,制备纯化的重组ＴＰＩ蛋白,将重组ＴＰＩ抗原免疫Ｃ５７ＢＬ／６及昆明鼠,８周后用血吸虫尾蚴攻击感染,４５display status后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果Ｃ５７ＢＬ／６