IgA肾病患者外周血T细胞亚群及Fas/Fasl的表达

IgA肾病是一组以IgA沉积为主要特征的肾小球肾炎。目前认为其主要是由于免疫清除功能受损及黏膜水平抗原清除缺陷。在其发病过程中与细胞免疫有密切关系。本文从临床的角度观察IgA肾病患者外周血T淋巴细胞亚群及Fas／Fasl的表达的特点,探讨免疫炎症在IgA。肾病发病机制中起重要作用。     

Th22细胞在人类常见病毒感染中的研究进展

初始CD4 +T淋巴细胞在接受抗原刺激后可分化为不同的辅助性T细胞亚群,并分泌相应的细胞因子发挥生物学效应。Th22细胞是近年被发现的新型CD4 +T淋巴细胞亚群,不同于Th1、Th2和Th17细胞等亚群,Th22细胞分泌白细胞介素(IL)-22、IL-13和肿瘤坏死因子(TNF)-α等因子,不分泌...     

IgA肾病患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清诱导足细胞凋亡

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清对足细胞凋亡的影响。 方法 用Jacalin 亲和层析柱和Sephacryl S-200 分子筛纯化蛋白。单体IgA1（mIgA1）热聚合为聚合体IgA1（aIgA1）。实验分为患者上清组、健康上清组和对照组，系膜细胞分别与IgAN患者的aIgA1、健康对照的aIgA1和5%胎牛血清共培养，收集上清，与同步化的足细胞作用。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时定量PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L表达情况。 结果 患者上清可诱导足细胞凋亡，其凋亡率显著高于健康上清组和对照组[（28.5±5.9）%比（22.5±5.8）%、（20.5±4.5）%， 均P < 0.05]。患者上清可诱导足细胞Fas mRNA 升高，为对照组的1.89倍（P < 0.05）， 而Bcl-2 mRNA下调为对照组的72%（P < 0.05）。患者上清组的AngⅡ和TGF-β1水平均高于健康上清组[（13.2±3.4） ng/L比（8.2±2.3） ng/L，P < 0.05；（15.4±3.4） ng/L比（10.8±3.2） ng/L，P < 0.05]。 结论 IgAN患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清可诱导足细胞凋亡，可能参与IgAN的进展。     

IgA肾病患者尿足细胞数及肾组织podocalyxin表达与临床病理的相关分析

目的 探讨尿足细胞数和肾组织中足细胞顶膜区的特异性标记蛋白podocalyxin（PCX）的表达与IgA肾病(IgAN)患者临床和病理改变的关系。 方法 收集50例IgAN患者活检前3 d的每天晨尿和20例体检健康对照者的晨尿各100 ml,离心去上清于TXD3细胞离心涂片机上制成涂片。用抗人PCX单克隆抗体分别对尿沉渣涂片和肾组织切片进行免疫组化染色,于光学显微镜下计数尿足细胞排泄数,以及用计算机图像分析系统测量和计算肾小球PCX平均吸光度值。IgAN按Lee分级分成5组,并用Katafuchi半定量积分法记分。比较各组尿足细胞数和肾组织PCX平均吸光度值,并与各项病理指标评分和临床生化指标进行相关性分析。 结果 IgAN组尿中足细胞数显著高于健康对照组（P < 0.01）。IgAN Lee分级各组组间尿足细胞中位数两两比较,Ⅰ-Ⅱ级组低于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组显著低于Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组低于Ⅳ级组和Ⅳ级组低于Ⅴ级组,但差异无统计学意义。尿足细胞阳性率在Ⅳ、Ⅴ级组最高（100%）,在LeeⅠ-Ⅱ级组最低（55%）。IgAN患者随着Lee分级升高,肾小球足细胞PCX表达下调,两两比较结果显示,Ⅰ-Ⅱ级组显著高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ、Ⅳ级组显著高于Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组稍高于Ⅳ级组（P > 0.05）。IgAN患者尿足细胞排泄数与肾小球PCX表达量呈负相关（r = -0.702,P < 0.01);与24 h尿蛋白量呈正相关（r = 0.465,P < 0.01）;与肾小球和肾小管病理积分均呈正相关（r = 0.233,r = 0.307,均P < 0.05）。肾小球PCX表达量分别与肾小球和肾小管病理积分呈负相关（r = -0.560,r = -0.377,均P < 0.05）;与24 h尿蛋白量呈负相关（r = -0.367,P < 0.05）。 结论 IgAN患者尿足细胞排泄量可反映肾组织足细胞缺失程度,肾小球足细胞损伤脱落可能参与IgAN的发生发展,其尿足细胞数有可能作为反映疾病进展的重要指标。     

调节性及辅助性T细胞在人类IgA肾病中的表达及意义

目的 探讨CD4+CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用。 方法 用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3（FOXP3）的表达。Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法。 结果 IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人[（2.14±0.82）％比（1.59±0.53）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.397，P ＜ 0.05），与eGFR呈负相关（r = -0.376，P ＜ 0.05）。IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[（2.57±0.72）％比（1.81±1.10）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.468，P ＜ 0.05）。IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（5.75±1.89比12.73±9.79，P ＜ 0.05），但与临床各指标间没有相关性。 结论 IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱。Treg在外周血中的增多以及以Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用。     

IgA肾病患者扁桃体B1a细胞和IgA1阳性细胞表达及相关因素分析

目的 研究B1a和IgA1阳性细胞在IgA肾病患者扁桃体中的表达及B1a细胞与血尿、蛋白尿和病理Lee分级的关系。 方法 肾活检确诊为原发性IgA肾病及非肾炎慢性扁桃体炎患者各8例为对象,用免疫荧光法和激光共聚焦显微镜对其扁桃体组织进行B1a及IgA1细胞定位和定量计算,并按蛋白尿程度和Lee分级标准与IgA肾病组B1a细胞数量行统计学分析。 结果 B1a细胞主要分布在扁桃体生发中心和小结帽;IgA1细胞主要分布在上皮内、上皮下,以上皮和淋巴组织交界区为多。与慢性扁桃体炎组比较,IgA肾病组两种细胞表达明显增多（P < 0.01）,且呈正相关（r = 0.778,P = 0.023）。在血尿伴蛋白尿和Lee≥Ⅲ级组B1a细胞显著高于单纯血尿和Lee<Ⅲ级组（P < 0.05）。 结论 IgA肾病患者扁桃体中IgA1可能是B1a细胞分泌的。B1a细胞数量随着患者蛋白尿的出现和病理严重程度的加重而增加,可能在疾病发生和进展过程中起着重要的作用。     

雷公藤多苷对IgA肾病CD4＋CD25high调节性T细胞及Th1、Th2影响

目的：探讨CD4＋CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用,以及使用雷公藤多苷（tripterygium wilfordii glycoside,TW）治疗后对IgAN 的 Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例影响.方法：用流式细胞分析仪检测30例IgAN患者,使用雷公藤多苷治疗前后的外周血Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例.并与健康对照组进行比较,两组间比较采用t检验.结果：IgA N患者外周血Treg的比例明显高于健康人（P＜0.01）;IgAN患者外周血中,Th2细胞比例显著高于健康对照组（P＜0.01）;IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（P＜0.01）.使用TW （1 mg·kg-1·d-1）治疗 IgAN 3个月后,可显著降低IgAN患者外周血Treg（P＜0.01）,但治疗后Treg仍高于健康对照组（P＜0.05）;显著降低Th2细胞比例（P＜0.05）,显著升高Th1/Th2比值（P＜0.01）;且治疗后IgAN的尿蛋白明显降低（P＜0.01）,血清白蛋白升高（P＜0.05）.结论：TW可改善IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱,对IgAN治疗具有一定作用.     

IgA肾病中足细胞损伤及其与蛋白尿的关系

目的 观察 IgA肾病（IgAN）患者足细胞损伤的各种表现，探讨其与蛋白尿的关系。 方法 收集35例伴有明显蛋白尿[尿蛋白量（24 h）>1.0 g]的IgAN患者肾活检组织作研究；以8例肾错构瘤患者术后切除肾和肾癌患者术后远离癌旁肾组织为正常对照。免疫组化方法观察肾组织细胞周期调节蛋白（p21、p27）、足细胞结构蛋白（nestin）、足细胞数目 （WT1）。用显微切割方法取出肾小球，通过实时定量PCR方法检测整合素（integrin）β1、nephrin和α辅肌动蛋白4（α-actinin 4）水平。电镜观察足细胞超微结构的改变。根据足细胞数目密度(Nv, n×106/μm3)将35例IgAN患者分为足细胞数目减少组（ Nv<52.49×106/μm3，n = 15）和足细胞数目正常组（Nv≥52.49×106/μm3，n = 20）。随访蛋白尿的转归情况，共18个月。 结果 （1）与正常对照组比较，IgAN患者肾小球内个别足细胞重新表达p21，而足细胞p27的表达明显降低（0.71±0.12比0.91±0.07，P < 0.05）。（2）IgAN患者足细胞nestin 蛋白表达比正常对照显著降低（13.40%±0.04%比 17.60%±0.04%，P < 0.05）；肾小球内integrin-β1 mRNA表达显著升高（12.54±5.20比1.02±0.30，P < 0.05），而nephrin及α-actinin4 mRNA无明显改变。（3）电镜下观察到明显的足突融合和足细胞从基底膜脱落。（4）IgAN患者足细胞数目密度比正常对照组显著减少(161.27±225.92比323.22±138.12，P < 0.05)，且与Lee氏分级相关。（5）足细胞数目密度、integrin-β1 mRNA与肾穿刺当时的尿蛋白量（24 h）呈负相关(r = -0.4483、-0.840, 均P < 0.05)。足细胞数目减少组较足细胞数目正常组的蛋白尿下降程度明显减少（P < 0.05）。 结论 伴蛋白尿的IgAN中存在足细胞的损伤，表现为足细胞周期调节蛋白、结构蛋白的改变，足突的融合及足细胞数目的减少，而足细胞损伤及足细胞数目减少会影响蛋白尿的发生和发展。     

Th17细胞在IgA肾病发病机制中的作用

IgA肾病是肾小球系膜区以IgA或IgA沉积为主的原发性肾小球病,是全球范围内最常见的原发性肾小球疾病,约20%~40%的成人患者在20年后会进展为终末期肾病[1].在过去的几十年中,对IgA肾病的研究已经取得了很大的进展,比较明确其临床特点、病理特征、预后等.但对于IgA肾病的发病机制尚未明了.Th17细胞是近来发现的一类新的CD4＋T辅助细胞亚群,是独立于Th1和Th2细胞之外的效应T细胞亚群,其产生的多种相关细胞因子[如IL-17A（IL-17）和IL-17F]在炎症和自身免疫反应起着关键性作用[2].在人类,Th17细胞可以引起多器官炎症反应、风湿性关节炎、炎症性肠病等[3].近年研究发现[4],Th17细胞引起的免疫反应在肾脏炎症性疾病的发病中也起到了重要作用.本文从Th17细胞及其分泌的主要细胞因子IL-17与IgA肾病自身免疫的相关性进行综述.     

雷公藤甲素对IgA肾病患者外周血单个核细胞炎性反应及凋亡的影响

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞（PBMC）炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP) 对其调节的相关机制。 方法 取IgAN患者（n=29）及健康人（n=16）外周血,分别通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和硝酸还原酶法（Griess法）检测血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和一氧化氮(NO)表达情况。体外培养IgAN患者PBMC,以不同浓度TP刺激PMBC,四唑盐比色间接法（MTT）检测TP对细胞生长的抑制效应。根据MTT结果,分别分为IgAN患者PBMC组、植物血球凝集素（PHA,10 mg/L,促细胞分裂原）模型组和PHA（10 mg/L）+TP（12.5 μg/L、25 μg/L）处理组。ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况;Griess法检测上清液中NO含量;流式细胞仪分析细胞凋亡率;RT-PCR法、Western印迹法检测PBMC中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬蛋白酶（caspase）-9、caspase-3基因和蛋白表达变化。 结果 IgAN患者血浆TNF-α[（131.57±50.61） ng/L比（30.24±18.93） ng/L,P < 0.01],IL-6[（76.36±25.21） ng/L比（35.08±16.59） ng/L,P < 0.01]和NO[（46.36±12.93） μmol/L比（26.61±10.87） μmol/L,P < 0.01]均显著高于健康人,PBMC凋亡率亦显著高于健康人[（16.88±5.66）%比（8.67±3.87）%,P < 0.01]。TP可抑制IgAN患者PBMC分泌 TNF-α、IL-6 和NO,诱导其凋亡;也可抑制Bcl-2表达,增加Bax、caspase-9、caspase-3表达。 结论 IgAN患者体内PBMC处于高度活化状态,并且凋亡率增高。TP能有效抑制IgAN患者PBMC的炎性活化状态,并可能通过线粒体途径改变Bcl-2蛋白家族抗凋亡因子和促凋亡因子平衡而诱导IgAN患者PBMC凋亡。     

甲状腺肿瘤患者中辅助性T细胞22及白细胞介素-22的变化及意义

目的 检测甲状腺肿瘤患者外周血及肿瘤组织中辅助性T细胞22 (Th22)及白细胞介素(IL)-22的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系.方法 选择56例原发甲状腺肿瘤患者和30例健康志愿者,采用流式细胞仪检测外周血Th22细胞水平,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中IL-22表达水平,应用免疫组织化学双染色分析正常组织及肿瘤组织中Th22阳性细胞的浸润程度,分析这些参数与临床病理特征间的关系.结果 甲状腺肿瘤患者外周血中Th22细胞及IL-22水平分别为(1.74±0.27)％和(162.7±32.2) ng/L,显著高于对照组[(0.57±0.14)％,t=15.72,P＜0.01;(64.2 ±20.7) ng/L,t=11.31,P＜0.01];甲状腺癌患者的Th22细胞比例及IL-22水平明显高于甲状腺瘤患者[(2.21±0.34)％比(1.39±0.22)％,t=9.14,P＜0.01;(199.1±34.1)ng/L比(129.8±31.3) ng/L,t=6.79,P＜0.01].甲状腺肿瘤患者组织中Th22阳性细胞浸润率为56.25％,而对应正常组织为8.33％,差异有统计学意义(x2=8.167,P＜0.01);甲状腺癌组织中Th22细胞浸润率为78.6％,甲状腺瘤组织为38.9％,差异有统计学意义(x2=5.039,P＜0.05).外周血Th22细胞比例、IL-22的表达水平和肿瘤组织中Th22阳性细胞浸润程度与临床分期、淋巴结转明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、病理类型无明显相关(P＞0.05).结论 甲状腺肿瘤患者外周血Th22细胞比例及血浆中IL-22水平显著升高,且与临床分期等病理特征明显相关,表明Th22细胞及IL-22参与甲状腺肿瘤的发生发展.     

Efficient peripheral construction of functional human regulatory CD4(+)CD25(high)Foxp3(+) T cells in NOD/SCID mice grafted with fetal human thymus/liver tissues and CD34(+) cells

Regulatory T cells, especially CD4(+)CD25(+) regulatory T cells are critical regulators of immune tolerance in humans and mice. Mice with humanized immunity have been developed by various transplantation strategies of human tissues or cells related to immunity, which are being extensively applied in biomedical research. However, it is unclear whether human CD4(+)CD25(+) regulatory T cells can normally develop in human thymic grafts and efficiently populate in the periphery in NOD/SCID mouse recipients. In human thymic grafts, high percentage of mature human CD4(+)CD25(high) regulatory T cells was detected. Human CD4(+)CD25(+) regulatory T cells maturing in fetal human thymus grafts could subsequently output to the periphery of NOD/SCID mouse recipients. Importantly, these cells exhibited Foxp3(+)CD45RO(+)CTLA4(+)CD127(-) phenotype, similarly to those in healthy individuals. In addition, human CD4(+)CD25(+) regulatory T cells maturing in human thymic grafts suppressed proliferative response of CD4(+)CD25(-) T cells to allogeneic antigens, though the peripheral CD4(+)CD25(+) regulatory T cells in fetal human thymus-grafted NOD/SCID mice showed somewhat decreased immunosuppressive ability compared with normal CD4(+)CD25(+) regulatory T cells. Thus, this humanized animal model is suitable for examining development and function of human CD4(+)CD25(+) regulatory T cells in vivo.