联合应用神经营养素-4胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后经蛛网膜下腔置管局部联合应用神经营养素（NT）-4和外源性胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为3组,GDNF组、NT-4组和GDNF联合NT-4组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于第5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）和NT-4,不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行苏木素-伊红染色、尼氏体染色、胆碱酯酶染色。结果 GDNF联合NT-4组脊髓前角运动神经元的存活率、胆碱酯酶阳性颗粒面积均比前2组有明显提高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论周围神经损伤后通过蛛网膜下腔联合注入NT-4、GDNF较两者单独使用更有利于保护脊髓运动神经元。     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤后运动神经元的保护作用。 方法 :大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 GDNF组 ,改良 Allen法撞击致伤 T1 2 脊髓 ,蛛网膜下腔分别给予 NS和 GDNF,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片 ,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶 (Ch E)和酸性磷酸酶 (ACP)活性 ,并结合计算机进行图像分析。结果 :GDNF组较 NS组 Ch E活性显著增加 ,ACP活性显著降低 ;2 1d时 NS组的 ACP及 Ch E活性均高于及低于假手术组 ;GDNF组与假手术组 Ch E和 ACP活性差别不显著。 结论 :GDNF对脊髓损伤后的前角外侧核运动神经元有一定的保护作用     

坐骨神经切断后脊髓前角GDNF mRNA的表达变化及其意义

目的：探讨大鼠坐骨神经切断后,脊髓前角胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA的表达变化及其意义。方法：切断SD大鼠两侧坐骨神经,建立脊髓前角运动神经元损伤模型,应用半定量RT-PCR方法,观察大鼠L3-L5脊髓前角运动神经元GDNFmRNA的表达。结果：坐骨神经切断前,GDNF mRNA在脊髓前角少量表达,坐骨神经切断后1天表达减少20%,4天减少40%,7天减少70%,14天后减少80%。结论：脊髓前角运动神经元GDNF mRNA表达减少,是“细胞体-轴突-靶器官”轴质流中断所致,为应用外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

地塞米松对坐骨神经损伤后脊髓神经元形态的影响

目的 观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元形态学的影响.方法 27只成年Wis-tar 雄性大鼠随机分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:于神经损伤后局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5 mg/(kg·d);生理盐水组:在神经损伤后注射等量生理盐水;正常对照组:不做任何处理.手术后不同时间段分别取各组动物L4～L6节段脊髓,制做石蜡切片,观察脊髓运动神经元形态及数量的变化.结果 神经损伤组可见同侧脊髓前角运动神经元胞体变小,尼氏体数目减少,模糊不清.地塞米松组神经损伤后的脊髓前角运动神经元和尼氏体的形态明显改善,数量增加.结论 大鼠坐骨神经损伤后局部应用地塞米松可改善脊髓前角运动神经元的形态结构,恢复蛋白质合成功能.     

大鼠坐骨神经切断后GDNF mRNA在其向心端及脊髓表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA在其向心端及脊髓表达的变化及其意义。方法：在切断SD大鼠双侧坐骨神经后的不同时间采用半定量RT－PCR方法，观察坐骨神经向心端及T12－L1段脊髓GDNF mRNA表达的变化。结果：坐骨神经切断前，GDNF mRNA在坐骨神经及L12－L1段脊髓微量表达，切断后其向心端及T12－L1段脊表达逐渐减少，伤后1，7，14，28d分别减少10％，38％，45％，52％和20％，68％，80％，85％。结论：从骨神经切断后其向心端及T12－L1脊髓GDNF mRNA表达减少，推测是由于失去靶组织转运GDNF mRNA所造成，为外源性GDNF应用于治疗脊髓损伤提供了实验依据。     

针刺对大鼠脊髓损伤后脊髓前角运动神经元功能的影响

目的探讨针刺对脊髓损伤(SCI)大鼠前角运动神经元功能恢复的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,改良Allen法压迫致伤T8、T9,随机分为实验组和对照组,伤后分别给予电针刺激大鼠双下肢足三里和悬钟、伏兔和三阴交穴,取治疗2,4,6周伤段脊髓进行PCR扩增和组织切片。利用RT-PCR技术检测伤区脊髓胶质源性神经营养因子(GDNF)mRNA基因体内表达的变化;应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察大鼠SCI后伤区脊髓前角运动神经元存活的数目和乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化;采用斜板试验和BBB评分法观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果实验组较对照组AChE活性显著增加(P<0.01);实验组脊髓前角大、中型神经元的数目较对照组明显增加(P<0.05);实验组GDNF mRNA基因体内表达较对照组明显增加(P<0.01);大鼠SCI 3周后针刺治疗组后肢运动功能评分均明显高于对照组(P<0.05)。结论针刺治疗对脊髓损伤后前角运动神经元的功能恢复有一定的促进作用。     

大鼠坐骨神经移植后脊髓相应节段运动神经元中P-Erk1/2的表达和变化

目的 研究成年大鼠坐骨神经损伤后脊髓相应节段运动神经元中P-Erk1/2的表达和变化.方法 健康成年雄性Wister大鼠共50只,坐骨神经切断组,将动物模型于术后1W、2W、4W、6W、8W处死后取患侧L4～L6脊髓,Western-Blot方法 检测P-ERK1/2在脊髓中的表达变化,并将两组所得数值进行统计学分析.结果 脊髓前角运动神经元中的P-ERK1/2在假手术组仅有少量表达并维持在一定的水平;在坐骨神经切断组中,术后1W内表达增加、2W达高峰、8W恢复正常水平.结论 大鼠坐骨神经切断后可能是通过激活MAPK/ERK1/2信号通路的方式,对脊髓前角运动神经元的凋亡进行调控.     

慢性镉中毒致大鼠肌萎缩侧索硬化症样改变的研究

目的:探讨小剂量慢性镉中毒法建立大鼠肌萎缩侧索硬化症动物模型的可行性.方法:成年大鼠饮水慢性染镉.每天饮用含镉去离子水(150mg/L),记录每天饮水量,120 d后取材.采用神经电生理、光镜、电镜技术测定大鼠坐骨神经传导速度、股二头肌形态学变化、脊髓前角运动神经元形态学变化;同时采用原子吸收石墨炉法、生物化学技术测定脊髓内镉含量以及脊髓组织细胞内铜锌超氧化物歧化酶1(CuZn-SOD_1)活性、丙二醛含量的变化.结果:染镉后120d,大鼠运动神经传导速度减慢但股二头肌纤维直径变化不明显;脊髓前角运动神经元胞体平均截面积有变小、神经元胞浆内粗面内质网排列紊乱并出现核糖体脱颗粒现象;染镉后脊髓内镉含量增加、脊髓组织匀浆内CuZn-SOD_1酶活性降低,而丙二醛含量升高.结论:镉可以在成年大鼠脊髓内蓄积,导致前角运动神经元形态和功能损伤.提示慢性镉中毒法可用于建立大鼠肌萎缩侧索硬化症的动物模型.     

转化生长因子β1在大鼠周围神经再生过程中的作用

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠周围神经损伤后再生过程中的作用及是否参与了再生中脊髓前角运动神经元碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的调节。方法: 将48只成年SD大鼠在右侧坐骨神经压榨损伤术后随机分为TGFβ1组和生理盐水（NS）组。TGFβ1组在坐骨神经压榨损伤近心端注射TGFβ1 50μL(0.1μg/mL)，术后隔日在右侧下肢后群肌内注射TGFβ1 50μL, 对照组同样方法注射等量NS。实验动物分别存活3，7，14和21d后运用免疫组织化学方法检测TGFβ1对脊髓前角运动神经元bFGF蛋白的表达变化。存活21d的实验动物还用半薄切片和Fast Blue逆行荧光示踪方法观察TGFβ1对坐骨神经损伤后远端的再生情况。结果：TGFβ1组脊髓前角bFGF蛋白的表达高于NS组（P<0.05）；损伤远侧端再生轴突数目、直径与髓鞘厚度TGFβ1组均明显好于NS组（P<0.05）； TGFβ1实验组脊髓和背根节内荧光标记细胞数量明显多于NS组（P<0.01）。结论：外源性TGFβ1可以促进周围神经损伤后再生；TGFβ1上调周围神经损伤后脊髓前角运动神经元bFGF的表达。     

GDNF对大鼠脊髓损伤后细胞内钙含量及组织含水量的影响

目的:探讨胶质源性神经营养因子(GDNF)对损伤脊髓细胞内钙及脊髓含水量的影响.方法:SD大鼠分成对照组、生理盐水(NS)组及GDNF组,改良Allen法撞击致伤T12脊髓,蛛网膜下腔分别给予NS和GDNF,不同时间处死动物,取伤段脊髓用Fura-2法测定细胞内钙([Ca2+]i)及组织含水量.结果:NS组与GDNF组[Ca2+]i及组织含水量在24、72及168 h均明显超过对照组(P<0.01),在72 h达到高峰,其中GDNF组[Ca2+]i及组织含水量均显著低于NS组(P<0.01).结论:GDNF可能通过减少神经细胞内Ca2+积聚、缓解组织肿胀,对脊髓损伤起保护作用.     

GDNF在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化研究

目的观察坐骨神经损伤后胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的表达变化.方法分别制作成年SD大鼠坐骨神经夹伤（用血管钳压榨坐骨神经,达二度损伤）、切断伤（于梨状肌下孔下方1cm切断坐骨神经）动物模型,于损伤后第1、2、4、6、8周取材,按ABC法进行免疫组织化学分析.结果（1）正常坐骨神经中有较弱GDNF表达;（2）坐骨神经损伤后GDNF的表达增强;（3）坐骨神经损伤方式不同,GDNF的表达变化方式不完全相同;切断组神经组织GDNF的表达先增强后减弱,远段神经GDNF的表达于第2周达高峰,近段于第4周达高峰.夹伤组损伤远、近段神经组织GDNF表达变化基本相同,呈缓慢递增趋势,于第8周时表达最强.结论在损伤刺激下周围神经组织出现GDNF的高表达,并呈现出一定的规律性,参照此规律运用外源性GDNF治疗神经损伤可能会取得较好疗效.     

胶质细胞参与电针足三里对胃运动的调节作用

目的采用胶质细胞代谢阻断剂丙戊茶碱（propentofylline,PPF）予以干预,研究胶质细胞是否参与针刺足三里对胃运动功能调节作用的影响,探讨针刺对胃运动调节作用的神经机制。方法采用免疫荧光组织化学方法,观察大鼠中枢核团迷走复合体（DVC）中神经元被激活的标志c-fos以及星形胶质细胞（GFAP）、小胶质细胞OX42的表达变化。采用胶质细胞阻断剂丙戊茶碱予以干预,观察上述指标的变化。并同步测定大鼠胃电活动的变化。结果对照组大鼠DVC的c-fos呈现低水平表达,GFAP和OX42活化程度很低,胃电亦较为规律。电针足三里组大鼠DVC的c-fos表达水平、GFAP和OX42活化程度明显增加,胃电的波幅和频率均有显著增加。丙戊茶碱干预后电针足三里组大鼠DVC的c-fos表达水平、GFAP和OX42活化程度明显降低,胃电的波幅和频率也有显著的降低,与无干预组相比有显著性差异（P〈0.05）,与对照组相比也差异显著。结论电针足三里对胃运功的调节不但有神经元的作用,而且胶质细胞也参与这种调节作用。     

缝线粘附重组pcDNA3-GDNF-GFP质粒对周围神经损伤后神经元保护的实验

目的 研究周围神经损伤后新的修复方法和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用.方法 50只雌性Wistar大鼠制成右侧坐骨神经缺损动物模型,随机分为实验组和对照组.实验组使用粘附pcDNA3-GDNF-GFP的缝线,对照组使用粘附pcDNA3的缝线进行坐骨神经的缝合修复.术后1周、8周使用激光共聚焦显微镜检测GDNF在脊髓神经元的表达;术后12周行脊髓神经元尼氏染色和右侧坐骨神经电生理检查.结果 实验组神经元有绿色荧光表达,证明转染成功;尼氏染色发现神经元数目多于对照组,实验组神经的传导速度、动作电位的峰值及潜伏期分别是19.82±1.90 m/s、3.47±0.32 mV、0.36±0.03 ms,明显高于对照组.结论 使用携pcDNA3-GDNF-GFP重组质粒的缝线修复损伤的周围神经,可以对脊髓神经元产生营养保护作用并促进周围神经的再生.     

促红细胞生成素对大鼠坐骨神经损伤后背根神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠坐骨神经损伤后背根神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响及其作用机制,为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据.方法 ♀ SD大鼠36只,制备大鼠左侧坐骨神经缺损模型,随机分为3组:EPO组、神经生长因子(NGF)组和生理盐水(NS)组.3组分别腹腔注射EPO、NGF和NS.术后第7...     

GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在慢性收缩性损伤（CCI）所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1：24只SD大鼠,随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=8）。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bennett法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天（基础值）及术后第1、3、5、7、14、21天（Naive组则在相对应的时间点）大鼠同侧（本实验为右侧）后足机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（PWL）。实验2：18只SD大鼠随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=6）。CCI组制备CCI模型,术后第7天处死大鼠,取同侧L4背根神经节;Naive组不做任何手术,直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经,术后第7天处死大鼠,直接取右侧L4背根神经节。采用Western blot法检测脊髓L4背根神经节GDNF的蛋白表达。结果实验1：与Sham组相比,CCI组大鼠从术后第3天开始至术后21天内各时间点MWT和PWL均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。实验2：与Sham组相比,CCI组在L4背根神经节的GDNF表达明显减少（P〈0.01）。结论CCI大鼠的L4背根神经节的GDNF表达减少,可能参与CCI所致神经病理性疼痛的发病机制。     

蛇毒神经生长因子促进周围神经再生的诱发电位观察

目的:研究蛇毒神经生长因子（sNGF）对大鼠坐骨神经损伤后诱发电位的影响,评价蛇毒种经生长因子在促进周围神经再生中的作用。方法:建立大鼠坐骨神经钳夹模型,局部滴加药物和术后肌注sNGF,通过脊髓诱发电位（SEP）、运动诱发电位（MEP）评定,观察坐骨神经修复情况.结果:sNGF治疗可使伤后SEP、MEP提早出现,结论:蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用.     

神经生长因子对损伤坐骨神经的修复作用

目的 探讨神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｒ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）对损伤神经的修复作用。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠４５只,制备坐骨经夹损模型。术后每日分别局部给予一定的ＮＧＦ和等渗不共１４天,检测大鼠趾间距和诱发电位,以观察其神经功能的恢复情况。结果 ＮＧＦ治疗组大鼠的趾间距及诱发电位在２～３周就已人武部恢复正常,而员伤组和盐水治疗组则到术后４周才恢复正常。结论 外源性ＮＧＦ能明显改善损伤坐骨     

改良肠系膜下神经丛毁损术治疗左下腹晚期癌痛的临床观察

目的观察改良肠系膜下神经丛毁损术治疗左下腹晚期癌痛的可行性及疗效。方法左下腹部晚期癌痛患者36例,随机分为试验组及对照组,试验组18例在CT引导下经蛛网膜下腔及L3～4椎间盘穿刺以无水乙醇行肠系膜下神经丛毁损,对照组18例给予阿片类等药物止痛,两组分别于治疗前,治疗后1 d、1个月、3个月对患者行视觉模拟评分(VAS)评分、口服阿片药日用量、便秘的缓解、生活质量评分及阻滞相关并发症方面的评价。结果阻滞后治疗组患者VAS、阿片日用量和生活质量评分显著低于对照组,便秘缓解情况显著优于对照组,两组间差异均有统计学意义(P<0.05),治疗组无明显并发症发生。结论改良系膜下神经丛毁损治疗顽固性左下腹晚期癌痛可行且安全有效。