聚合酶链反应—增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光（ECL）检测结核分枝杆菌（MTB）。方法 同时应用聚合酶链反应（PCR）－ECL、PCR－比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本，比较结果。结果 PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%，其中PCR－ECL阳性率显著高于PCR电泳（P＜0.05)；对涂片阳性标本，阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%，差异无显著性（P＞0.05)；对涂片阴性标本，阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%，PCR－ECL阳性率高于PCR电泳（P＜0.05)。另外PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%，差异无显著性（P＞0.05)。结论 PCR－ECL灵敏度高，能提高临床标本MTB检出率，尤其是对涂片阴性痰标本，并且该方法操作简单，结果客观。     

应用聚合酶链反应检测胸水中结核分枝杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２８例胸水中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并将涂片镜检和分离培养作为参比方法。试验结果显示：ＰＣＲ直接检测胸水中结核分枝杆菌的灵敏为３１个菌体单位，敏感性为４２．３％，特异性为９６．８％，高于涂片镜检和分离培养的检出率（３８．２％和３５．１％）。该法具有敏感性高，特异性强和简便快速等优点，特别适合含微量结构分枝菌临床标本的检测，可用于结核性胸膜炎早期和鉴别诊断。     

应用聚合酶链反应-反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应(PCR)-反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌的价值.方法收集52例活动性肺结核病人和12例非结核病人的痰标本,以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查、结核菌培养、PCR-反相膜杂交技术,PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检查对比.结果涂片法、培养法,PCR-反相膜杂交法的敏感性分别为28.8%、42.3%、82.7%,PCR-反相膜杂交法的敏感性显著高于培养法和涂片法(P＜0.01).PCR-反相膜杂交法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为82.7%和84.6%,特异性分别为91.7%和83.3%,前者特异性与后者相比差异有显著性(P＜0.01).结论PCR-反相膜杂交技术可应用于临床检测结核分枝杆菌.     

聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌

目的 评价聚合酶链反应（PCR）分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌（结核菌）的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测142份结核病患者痰标本,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为35.2%(50/142),培养法阳性率为35.9%(51/142),PCR分子灯塔法阳性率为44.4%(63/142)。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为100％。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子交模式,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化,在单一管内完成,其简便、快速、防污染,敏感性较高、特异性强,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

聚合酶链反应检测稳定L型结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在结核分枝杆菌稳定L型检测的应用价值.方法采用结核分枝杆菌染色体基因重复保守序列为引物的PCR诊断试剂检测非高渗培养的结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA.结果结核分枝杆菌稳定L型的染色体DNA经PCR扩增后电泳可见2条DNA带,其中1条主带与其亲代细菌型一致,另1条为相对分子质量较小的次带.结论结核分枝杆菌稳定L型仍保留了与细菌型染色体PCR引物反应的特异性序列和出现1条相对小分子质量的带,但仍然可用结核分枝杆菌PCR对其进行特异性检测与鉴定.     

应用聚合酶链反应—反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌

目的：探讨应用聚合酶链反应（PCR）－反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌的价值。方法：收集52例活动性肺结核病人和12例非结核病人的痰标本,以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查、结核菌培养、PCR－反相膜杂交技术,PCR－琼脂糖凝胶电泳技术检查对比。结果：涂片法、培养法、PCR－反相膜杂交法的敏感性分别为28．8％、42．3％、82．7％,PCR－反相膜杂交法的敏感性显著高于培养法和涂片法（P＜0．01）。PCR－反相膜杂交法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为82．7％和84．6％,特异性分别显91．7％和83．3％,前者特异性与后者相比差异有显著性（P＜0．01）。结论：PCR－反相膜杂交技术可应用于临床检测检测结核分枝杆菌。     

聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值

目的探讨用聚合酶链反应(PCR)荧光定量法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对189例临床确诊的结核病患者(结核病组)和45例非结核呼吸系统疾病患者(对照组)的痰或支气管灌洗液标本,分别应用PCR实时荧光定量法、涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测,然后对3种方法的阳性检出率进行统计学分析。结果 PCR法检测结核病组标本的阳性检出率为74.1%(140/189),明显高于涂片抗酸染色法的24.9%(47/189)及结核杆菌培养法的43.9%(83/189)。3种方法检测45例对照组患者的结果均为阴性,特异度为100.0%(45/45)。结论 PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法,用于结核分枝杆菌的鉴定简便、快速、特异,适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。对于结核病的及早诊断、预防和疗效监测具有良好的临床应用前景。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

RIFO杂交和限制性片段长度多态性检测耐利福平和异烟肼的结核分枝杆菌

目的评价利福平寡核苷酸探针杂交技术（RIFO杂交）和PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）在结核分枝杆菌（MTB）耐利福平（RIF）和异烟肼（INH）快速检测中的应用价值。方法选取121株北京地区MTB菌株，分别采用RIFO杂交技术和PCR—RFLP检测RIF耐药相关基因rpoB核心区和INH耐药相关基因katG315位点突变，并对所有菌株的rpoB基因核心区进行测序验证。结果RIFO杂交检测发现，91，5％（65／71）的RIF耐药株和92．9％（52／56）的耐多药菌株（至少对RIF和INH耐药）存在rpoB基因核心区突变，而RIF敏感株中未发现突变；RIFO杂交与测序结果完全一致，测序结果中有突变的位点在RIFO杂交中均有相应的野生型杂交信号缺失；PCR-RFLP结果显示，INH耐药株中katG315突变率为60.6％（40／66）。结论rpoB基因核心区可作为RIF耐药检测的分子标志及耐多药的筛选指标；RIFO杂交技术是检测MTB耐RIF的快速、准确的实验方法，具有推广及潜在的临床应用价值；PCR—RFLP可检测出大部分INH耐药株，可作为临床INH耐药性检测的辅助手段。     

刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性

目的用刃天青显色法检测结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药性,并探讨该法的临床应用价值。方法来自河南省3家结核病医院的共240株结核分枝杆菌分别用刃天青显色法检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、硫酸链霉素(SM)的耐药性,并与比例法作比较。结果刃天青显色法检测平均时间为8d,与比例法相比结果一致性好,INH、RFP、EMB、SM 4种药物的折点浓度分别为0.25、2.0、4.0、2.0μg/mL。结论刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。     

焦磷酸测序技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性研究

目的利用焦磷酸测序技术，建立一种高通量结核分枝杆菌利福平耐药性快速基因检测方法。方法应用生物素标记的引物扩增rpoB基因片段，经链亲和素标记的磁珠分离制备单链模板，设计2个测序引物在焦磷酸测序仪上检测rpoB基因耐药突变区的81bp序列突变情况，与H。Rv序列比对后判断耐药结果。结果通过建立的基于焦磷酸测序技术的结核分枝杆菌rpoB基因突变检测平台，32株利福平耐药株均在rpoB基因片段上检测到突变，22株利福平敏感株未检测到突变，检测结果与直接测序符合率达100％。结论本方法可快速、准确、高通量检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。     

Differentiation of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis BCG by a polymerase chain reaction assay

Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis are closely related species which carry different numbers of the repetitive DNA element IS6110. A polymerase chain reaction assay was developed to assess the copy number of IS6110 in a strain and thereby differentiate these two important human pathogens.     

Detection and diagnosis of Mycobacterium tuberculosis

Tuberculosis continues to be a major health problem worldwide, affecting millions of people each year. Accurate and rapid diagnosis is key to controlling the disease, yet the traditional tests for TB produce results that are either inaccurate or take too long to be definitive. A fast and reliable diagnostic method that would differentiate between active and latent TB infection is also lacking. The current routine diagnostic tests for TB – chest x-ray, tissue culture, tuberculin skin test (TST) and acid-fast staining – all have their limitations. A chest x-ray alone is inconclusive; a tissue culture takes too long to produce a result; the TST lacks specificity and reliability; and acid-fast staining depends on a large number of bacteria in the sputum to give an accurate reading. Serological tests using different TB antigens to detect Mycobacterium tuberculosis infection are fast but lack the desired sensitivity. New methods have been developed, such as nucleic acid amplification technology which, although specific, can yield false-positive results. Immunologic tests (QuantiFERON and T-SPOT.TB), which measure the production of IFN-γ by TB-specific T lymphocytes after encountering M. tuberculosis antigens, have certain advantages over the conventional tests, but they also have their disadvantages and unanswered questions. The need remains for a cost-effective, accurate and rapid method of diagnosing both active and latent TB infection.     

Determination of ethambutol MICs for Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium isolates by resazurin microtitre assay

OBJECTIVES: To test susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis (MTB) isolates to ethambutol by the L?wenstein-Jensen (LJ) proportion method and resazurin microtitre assay (REMA) and to evaluate REMA for the determination of ethambutol MICs for MTB and Mycobacterium avium isolates. METHODS: A total of 50 MTB and 20 M. avium isolates were tested to determine the MICs of ethambutol by REMA and agar dilution method. MTB isolates were also tested by the LJ proportion method. RESULTS: REMA provided ethambutol susceptibility results for all the isolates within 8-9 days. For MTB isolates, REMA showed 96.7% sensitivity, 100.0% specificity and 98.0% accuracy when LJ proportion results were taken as 'gold standard'. For both MTB and M. avium isolates, the MICs determined by REMA were lower than those determined in agar medium, indicating that MIC values determined by REMA are closer to the actual MICs for the isolates. CONCLUSIONS: REMA can be used as a rapid and inexpensive method for mycobacterial drug susceptibility testing against ethambutol. In comparison with the agar method, the MICs determined by REMA can more accurately be correlated with achievable plasma concentrations of antimycobacterial agents.     

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的 探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值.方法 应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原.结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%:64.例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性.特异性为92.19%.结论 检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值.     

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原。结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%;64例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性。特异性为92.19%。结论检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值。