流式细胞术外周血样品的直标法及其全血用量的探讨

流式细胞术(FCM)以其快速、简便和准确的检测, 而广泛应用于细胞生物学、肿瘤学与免疫学等领域.特别是多种识别白细胞抗原的单克隆抗体的出现, 使FCM在外周血白细胞分析的基础研究和临床诊断中得到了广泛的应用[1],因而优化一种快速、简便和准确的外周血白细胞的FCM免疫荧光标记法显得尤为重要.本文通过对三种直接荧光标记法的比较及其样品用血量的探讨, 旨在建立一种用于FCM的最佳直接荧光标记法.     

流式细胞术细胞周期分析样品保存条件的研究

流式细胞术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ）是一种对单细胞自动定量分析的新技术,具有敏感性高、速度快、信息量大和统计学精度高等优点［１］,已在细胞生物学、肿瘤病理学和体细胞遗传学等众多领域得到了广泛应用［２］。在检测细胞周期的变化、ＤＮＡ含量及细胞凋亡等方面,ＦＣＭ可为细胞周期的动力学研究提供有力的分析手段。然而,在细胞周期分析过程中,由于受到实验设计方案和临床诸多因素的影响,采样与上机检测的时间往往不能紧密衔接,因此,集中检测样品实属必要。本研究旨在探索样品的固定时间和保存样品的实验条件,…     

软组织平滑肌肉瘤的流式细胞术研究

目的　研究软组织平滑肌肉瘤 (LMS)中DNA倍体与S期分数 (SPF)及二者与临床病理的联系。方法　应用流式细胞术 (FCM )检测 33例LMS的DNA指数及SPF。结果　LMS中异倍体率为 39 4 % ,平均SPF值为 12 2 36。低分化LMS组的异倍体率 (70 0 % )高于高分化LMS组 (2 6 1% ) (P <0 0 5 ) ;异倍体LMS组的SPF均值 (15 5 92 )高于二倍体组 (10 0 5 5 ) (P<0 0 5 ) ;瘤体最大径 >6cm组的SPF均值 (13 6 36 )明显高于 <6cm组 (9 4 36 ) (P <0 0 5 )。结论　LMS的SPF与DNA倍体和体积均呈现出相关关系。LMS的DNA倍体与肿瘤的分化程度具有相关性     

三色流式细胞术在检测人外周血CD4+CD25+CD62L+调节性T细胞的应用

随着流式细胞术(FCM)在淋巴细胞亚群分析及免疫状态分型技术领域的应用日益成熟,多参数FCM分析,已能区分不同的细胞亚群,由间接免疫荧光标记法,过渡到采用直接免疫荧光标记且从单色荧光发展到双色及多色荧光标记.     

流式细胞术鉴定人外周血滤泡辅助性T细胞

目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)鉴定正常人外周血单个核细胞(PBMC)中滤泡辅助性T(Tfh)细胞, 以便对其功能进行进一步研究.方法:密度梯度离心法分离人PBMC, 采用不同荧光素标记的抗CXCR5、 CD4及CD19抗体进行染色FCM分析, 鉴定出表型为CD4+CXCR5+的T细胞亚群.结果:外周血可以检测到CD4+CXCR5+T细胞亚群, 占CD4+T淋巴细胞百分比为(11.09±0.38)%, MFI值为25.78±0.72, 低于B细胞膜表面CXCR表达水平(MFI值为99.6±8.1).结论:健康人外周血存在一定比例的Tfh细胞, 应用FCM可以成功鉴定Tfh细胞, 为进一步研究其功能提供了良好的技术平台.     

流式细胞术检测细胞毒方法的建立

目的：建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法：用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞，再用碘化丙碇(PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为100：1—6．25：1，共孵育时间为1-6小时，流式细胞仪收集1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果：CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料，18小时后也能很好地区分效靶细胞；靶细胞的自然死亡率低于5％；杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4小时。结论：CFSE／PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点：避免放射性试剂的应用，敏感性增强，单细胞水平的分析。     

直标法流式细胞术测定人红细胞表面CD35水平的方法学研究

为研究直标法流式细胞术测定红细胞表面CD35免疫分子水平的方法,抽取健康献血员静脉血,采用直标法流式细胞术测定红细胞CD35水平,研究测试后数据分析方法的可靠性和测试前抗凝剂、标本放置时间和抗体用量等因素对测定结果的影响.结果显示:M1界值选择对CD35阳性红细胞(CD35+-E)百分率计算结果有很大影响,CD35几何平均荧光强度(CD35-GMFI)随FL2通道电压升高而增加,而CD35相对几何平均荧光强度(CD35-rGMFI)不受电压影响;EDTA-2K、肝素锂、枸橼酸钠三种抗凝剂以及标本放置72h内CD35+-E百分率和CD35-rGMFI结果均无明显差异(P＞0.05);取5×105个人红细胞反应时,最适合的鼠抗人CD35单克隆抗体量为7μL.可见,CD35-rGMFI是描述红细胞表面CD35水平的最理想指标,抗凝剂、标本放置时间对测定结果无明显影响,当红细胞数量为5×105时,最佳抗体用量为7μL.     

多色流式细胞术对骨髓增生异常综合征患者外周血免疫表型的分析

目的了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血细胞免疫表型特征。方法采用多色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门方法,对38例MDS组患者及24例Non-MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群免疫表型进行分析。结果 MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群均存在异常免疫表型。MDS组和Non-MDS组外周血原始细胞群中CD34+细胞聚集的患者为16例和3例,比例分别占42.1%和12.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组中,外周血原始细胞群表达CD11b+细胞的患者为10例(26.3%)和1例(2.6%)。MDS组高于Non-MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDS组粒细胞群中侧向散射光(SSC)的平均荧光强度和CD10的几何平均荧光强度(G-MFI)分别为7.4±2.8,4.0±3.4;Non-MDS组分别为9.5±2.7,8.2±6.6,MDS组均明显低于Non-MDS组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MDS患者外周血细胞上存在异常的免疫表型,其特点有助于MDS与Non-MDS疾病的鉴别。     

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4 ),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8 ),B淋巴细胞(CD19 ),NK(CD16 CD56 ) 细胞的绝对数和百分率等的变化.方法 收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4 细胞、CD8 细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析.结果 四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P＜0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P＜0.05); 但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P＞0.05).结论 云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性.     

流式细胞术和微量细胞毒法检测HLA-B27的比较

人白细胞相关抗原 (ＨＬＡ Ｂ2 7)分子 (简称Ｂ2 7)的生理功能是携带提呈的细菌多肽 ,并激活ＣＤ8+ Ｔ细胞。Ｂ2 7因与强直性脊柱炎 (ＡＳ)等脊柱关节病 (ＳＰＡ)的关联 ,是所有疾病与ＨＬＡ相关中最为密切的 ,多年来一直是风湿病学界研究的热点之一[1] 。分析Ｂ2 7的表达对ＡＳ的发病机制、诊断、预防及预后判断都有重要意义[2 ,3 ] 。既往采用微量细胞毒法检测ＨＬＡ Ｂ2 7表型 ,本文采用流式细胞术进行检测 ,并比较了两种方法的优缺点。1　材料和方法1.1　材料　微量细胞毒法用倒置显微镜产自重庆光学仪器厂。标准羊抗人血清、Ｂ2 7抗原…     

流式细胞仪全血白细胞样品制备试剂的研究

流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒ,ＦＣＭ）以快速、准确、灵敏度高等优点,已广泛用于医学基础和临床研究〔１〕。特别是近年来,由于已获得多种抗白细胞膜表面抗原的单克隆抗体（ｍＡｂ）,以及这些ｍＡｂ荧光直接标记物的出现,使ＦＣＭ对外周血白细胞表面标志物的分析,已成为临床、基础研究和诊断的一项重要指标［２～４］,如淋巴细胞亚群分析、白血病分型和免疫功能测定等。但由于供ＦＣＭ分析的样品,一般是经荧光染色的单细胞悬液,且全血样品中除有测定的细胞外,还含有其它细胞,因此,对全血样品的制备乃是ＦＣＭ分析的…     

流式细胞仪检测人外周血和脾LAK细胞的研究

流式细胞仪检测人外周血和脾ＬＡＫ细胞的研究陈宝安周振英朱敏生高雪芝金宝翠邵泽叶临床上使用淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）治疗恶性肿瘤，取得良好效果，但在疗效判断上，仍缺乏有效客观的手段。流式细胞仪（Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是一种先进的...     

流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群研究

目的 探讨肿瘤患者T淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 采用流式细胞术检测27例肿瘤患者和25例正常对照组的T淋巴细胞亚群。结果 肿瘤患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD4^＋／CD8^＋比值明显低于对照组并有统计学意义，而CD8^＋T细胞显著高于对照组（P〈0．01）。结论 肿瘤患者的免疫功能下降。流式细胞术对肿瘤患者的免疫功能的检测具有快速、敏感、准确的特点，对于评价疗效、判断预后具有重要价值。     

流式细胞术检测过敏性紫癜患儿外周血调节性T细胞的研究

目的了解过敏性紫癜（HSP）患儿外周血调节性T细胞数量的改变及其在过敏性紫癜患儿免疫功能紊乱中的调控作用。方法应用四色流式细胞术,对35例过敏性紫癜患儿和35例正常儿童的CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞、CD19^＋B淋巴细胞、CD3^-CD16^＋ 56^＋NK细胞进行测定。结果HSP患儿外周血CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3-CD16^＋56＋NK细胞的百分率下降均明显低于对照组;CD19^＋B淋细胞的百分率则显著增高;而两组间CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞的变化差异无统计学意义。结论HSP患儿体内存在细胞及体液免疫功能紊乱,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其数量下降可能是导致过敏性紫癜发病的重要原因之一。     

运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度

目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.     

多发性硬化患者外周血淋巴细胞CD56的表达

目的 探讨CD56^ 淋巴细胞在多发性硬化（MS）的变化。方法 流式细胞仪测定32例复发缓解型MS患者（复发发期23例,缓解期9例）及13例复发期MS患者予糖皮质激素治疗后外周血淋巴细胞CD56表达的阳性百分率。结果 复发期和缓解期MS患者CD56的表达均高于对照组,15例复发期MS患者CD56的阳性百分率与血脑屏障受损呈正相关,复发期MS患者CD56的水平与距发作时间、整个病程、EDSS伤残评分无关。缓解期MS CD56的水平与病程无关,激素对CD56的表达我影响。结论 CD56^ 淋巴细胞涉及MS的发病机制。     

MTT法与流式细胞术检测肺炎合剂促进T淋巴细胞转化的实验研究

目的：探讨肺炎合剂对小鼠T淋巴细胞转化的影响，并试图为药研究淋巴细胞转化提供检测方法依据。方法：通过病毒性肺炎患儿淋巴细胞转化率降低的机体，用氢化可的松建立免疫低下小鼠模型，以不同剂量药液灌胃给药后，采用MTTI法和流式细胞仪检测法对比观察肺炎合剂对ConA诱导的小鼠脾T淋巴细胞转化的作用。结果：肺炎合剂使正常和免疫低下小鼠脾T淋巴细胞增殖能力显著增强。结论：肺炎合剂对小鼠脾T淋巴细胞增反应的促进作用，可能是该药作用机理之一。并认为流式细胞术是测定淋巴细胞转化的一种准确而可靠的方法。