机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力（强度为1 000、2 000、4 000 μstrain，加力时间为0、0.5、1、4、8、12 h），采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后，人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调，这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致，机械力刺激越强，整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变，不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。     

张应力刺激下人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素、细胞骨架的变化

目的:研究不同动态张应力刺激下体外培养的人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素β1和细胞骨架的变化.方法:刮取牙根中1/3牙周膜组织,采用Ⅰ型胶原酶消化结合组织块贴附法进行人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)原代培养并传代.用四点弯曲加载装置,通过对体外培养的hPDLF分别施加不同动态的张应力,采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白和整合素β1亚单位mRNA表达的影响.经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张应力后细胞形态的变化.采用SPSS 13.0软件包对荧光定量PCR所得数据取常用对数后行ANOVA分析.结果:张应力的大小及加力时间都对hPDLF纤连蛋白mRNA表达产生影响.加力后,hPDLF整合索β1亚单位mRNA表达下调,这种下调变化与所施加应力大小和作用持续时间相关.机械力刺激越强,整合素β1表达越明显.加力后,细胞骨架形态发生变化.加力前呈梭形,排列呈漩涡状,F-actin纤维粗且分布均匀;加力后,形态不规则,沿力的方向排列整齐,F-actin纤维细且分布不均匀;加力12h后,形态恢复到加力前形态,细胞F-actin荧光染色强度也由正常到下降再到正常.结论:动态张应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进纤连蛋白、整合素βmRNA表达改变,hPDLF细胞骨架的形态结构也发生一定规律的变化.     

张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞早期增殖活性和差异表达基因的变化

目的对比在张应力和压应力两种不同性质力的刺激下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）增殖活性的变化,并对差异表达基因进行筛选,探讨不同应力作用后HPDLF增殖变化的分子机理。方法使用四点弯曲加力装置对细胞进行0.5 Hz、4 000 μstrain的应力加载,加载时间2 h,采用流式细胞术测定张、压应力刺激对HPDLF增殖活性的影响,应用基因芯片技术检测两种应力刺激下细胞的差异表达基因。结果在两种应力刺激作用下,S期细胞百分比和细胞增殖指数均降低;差异表达的基因最主要位于细胞核,集中在转录因子活性相关基因群,参与最多的生物过程为转录因子调控,其中压应力引起的差异表达基因和生物过程的数量较张应力更多。结论1）周期性张、压应力作用下,HPDLF增殖变缓、细胞周期阻滞。2）细胞增殖变缓和细胞周期阻滞可看成是细胞对外界刺激的适应和自我保护,有利于HPDLF有更多的时间决定如何应答外界应力刺激,其应答的结果首先是转录水平上基因表达的改变,最主要的生物学反应是核转录调控。3）HPDLF对周期性压应力更敏感。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架变化

目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化.方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1 000、2 000、4 000 μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12 h),经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张、压应力后细胞形态变化,细胞骨架荧光染色强度测定分析细胞骨架F-actin表达量的变化.结果:加力后细胞骨架形态和微丝蛋白发生规律性变化;细胞F-actin荧光染色强度正常→下降→正常;细胞骨架对张、压应力作用的反应敏感程度无明显差异.结论:在一定的张、压应力范围内人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的形态结构具有一定的稳定性.     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0 ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化。结果bFGF可促进人牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时。结论bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用。     

动态张应力下黏着斑激酶对人牙周膜成纤维细胞转录因子c-fos和c-jun mRNA表达的影响

目的 研究动态张应力刺激下体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLF)转录因子c-fos和c-jun mRNA的变化以及黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)对c-fos和c-jun mRNA表达的影响,为进一步探索人PDLF中力学信号转导途径提供依据.方法 刮取牙根中1/3牙周膜组织,采用Ⅰ型胶原酶消化结合组织块贴附法进行PDLF原代培养并传代.用四点弯曲加载装置对体外培养的第六代PDLF分别施加动态张应力,以加入FAK抗体作为抗体组,不加入FAK抗体作为对照组,采用实时荧光定量PCR法研究动态张应力下FAK对人PDLF转录因子c-fos和c-jun mRNA表达的影响.对实时荧光定量PCR所得数据取常用对数后行单因素方差分析.结果 抗体组加力0、0.5、1、2、4h后c-fos mRNA表达量分别为(1.64±0.20)、(1.67±0.28)、(1.57±0.18)、(1.44±0.26)、(1.33±0.29) lg拷贝数/μg;c-jun mRNA表达量分别为(1.56±0.67)、(1.60±0.21)、(1.46±0.31)、(1.41±0.13)、(1.38±0.14) lg拷贝数/μg.c-fos和c-jun mRNA表达量在加力后上调,0.5h达到峰值,0.5h后出现持续性下调.抗体组细胞c-fos和c-jun mRNA表达变化规律与对照组相似,但同一时段抗体组较相应对照组高,1h后差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转录因子c-fos和c-jun可能在牙周膜对机械力刺激的反应中发挥作用,FAK可能是人PDLF中力学信号转导途径的重要分子.     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

3种髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞毒性的体外研究

目的对三氧化矿物凝聚体（MTA）、Z350纳米复合树脂、银汞合金3种常用髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）毒性进行体外比较研究。方法采用甲基噻唑基四唑（MTT）法研究3种材料对HPDLF增殖的影响,并采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法研究材料对细胞碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）mRNA表达的影响。结果MTA的毒性最小,并能上调HPDLF中ALP mRNA和OC mRNA的表达;Z350的毒性级为1级,能够促进细胞ALP mRNA的表达,对细胞OC mRNA的表达基本无抑制;银汞合金对细胞增殖的抑制作用最大,毒性级为3级,具有中度细胞毒性,对细胞ALP mRNA和OC mRNA表达的抑制最强。结论MTA对HPDLF的毒性最小,并且能促进HPDLF的成骨功能和分化,Z350纳米复合树脂次之,银汞合金的毒性最大,并抑制牙周膜成纤维细胞的分化。     

周期性牵张力对人牙周膜细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的:观察周期性牵张应力对人牙周膜细胞(HPDLF)的MMP-1 mRNA表达的影响.方法:对培养在弹性膜培养板上的HPDLF施加0.2 Hz、12%形变率的周期性牵张力,利用原位杂交和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术观察HPDLF的MMP-1 mRNA的表达.结果:体外培养的HPDLF正常情况下表达MMP-1 mRNA,加载周期性牵张力12 h、24 h、48 h后,随着作用时间的延长,HPDLF的MMP-1 mRNA有持续增强的趋势.结论:周期性牵张力作用下,HPDLF的MMP-1 mRNA的表达增强,加速ECM的代谢活动.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞多配体蛋白聚糖-4基因表达的影响

目的 通过研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLC)多配体蛋白聚糖-4 mRNA水平表达的影响,探讨bFGF在人PDLC迁移中的作用.方法 收集正畸拔除的12～18岁青少年健康前磨牙68颗,体外原代培养人PDLC,用外源性bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检...     

硝苯地平和机械力对人牙周膜成纤维细胞基质金属蛋白酶的表达影响

目的研究机械静态拉伸作用下,硝苯地平对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）基质金属蛋白酶（MMP）-10和MMP-13的表达影响。方法按弹力形变不同将细胞随机分为4组,分别为0%、8%、12%、16%形变组,每组再按照硝苯地平浓度不同分为4个亚组,分别为0、10、30、50 μm亚组。硝苯地平孵育1 h后,给予细胞12 h静态拉伸,免疫组化染色检测细胞胞浆中MMP-10和MMP-13的表达。结果弹性形变为0%时,各亚组中MMP-10和MMP-13的表达无明显变化,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当硝苯地平浓度为0 μm时,8%、12%、16%形变组胞浆内MMP-10和MMP-13均呈高表达,且随形变的增大,表达呈上升趋势（P<0.001）;当加入硝苯地平后,随硝苯地平浓度的增加,MMP-10和MMP-13表达均呈下降趋势（P<0.001）。结论硝苯地平对机械力诱导的MMP-10和MMP-13表达有抑制作用,提示钙离子通道参与机械力对HPDLF中MMP-10和MMP-13的诱导表达。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞表皮生长因子受体基因表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜细胞（PDLC）表达表皮生长因子受体（EGFR）的影响,探讨bFGF在牙周组织分化再生中的意义。方法体外原代培养人PDLC,有限稀释法形成单细胞克隆,用外源性bFGF刺激单细胞克隆,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测克隆细胞内EGFR基因表达的变化。结果bFGF促进人PDLC内EGFR mRNA的合成,并且随着质量浓度的增加促进作用增强。结论bFGF对EGFR的促进作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为牙周组织分化再生提供部分理论基础。     

柚皮苷对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(naringin,NRG)对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响。方法以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100μg/mL)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)损伤,采用MTT法检测NRG对LPS诱导HPDLF损伤的保护作用,利用ELISA法和Western blotting法检测NRG对LPS诱导的HPDLF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β等炎症因子蛋白表达的影响,同时利用Real-time PCR方法检测NRG对LPS诱导的HPDLF组IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子基因表达的影响。结果经LPS(100μg/mL)刺激后,HPDLF增殖受到抑制,与CON组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞周期进程受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NRG(40,20,10μg/mL)可显著抑制LPS诱导的HPDLF损伤,并可降低细胞内炎症因子表达;与LSP组比较,LPS+NRG 40μg/mL组、LPS+NRG 20μg/mL组、LPS+NRG 10μg/mL组HPDLF存活率显著提升,细胞周期进程加快,抑制IL-6、IL-8、IL-1β蛋白及基因表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NRG对LPS诱导的HPDLF损伤具有保护作用,并可通过抑制LPS诱导的HPDLF中IL-6、IL-8、IL-1β的蛋白及基因表达水平,促进HPDLF增殖。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

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目的研究盐酸米诺环素对脂多糖（LPS）作用下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。方法本研究于2011年10月至2012年2月在井冈山大学医学院重点实验室进行。培养HPDLF并分为以下5组：对照组（未加药）、高剂量组（0．01g／LLPS＋0．2班盐酸米诺环素）、低剂量组（0．0lg／LLPS＋0．05g/L盐酸米诺环素）、中剂量组（0．01g／LLPS＋0．1g／L盐酸米诺环素）、模型组（0．0lg／LLPS）,每组均复种3孔。实时荧光定量PCR检测各组HPDLF中的IL-6mRNA表达情况。结果对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组、模型组的IL-6mRNA相对表达量分别为：0．61±0．08、0．62±0．10、0．88±0．17、0．49±0．21、1．88±0．07。模型组IL-6mRNA的相对表达量高于对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组,且差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组及低、中、高剂量组的IL-6mRNA相对表达量两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下HPDLF中的IL-6mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炙的作用机制之一。     

bFGF真核表达载体的构建及骨髓基质细胞转染

目的：探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞的方法及可行性。方法：构建bFGF基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染骨髓基质细胞,通过免疫组织化学、RT-PCR及Western blot方法检测bFGF基因转染骨髓基质细胞的成功性。结果：bFGF基因成功转染大鼠骨髓基质细胞,并能持续稳定地分泌bFGF蛋白。结论：bFGF基因可以转染骨髓基质细胞,并能在骨髓基质细胞内稳定表达。     

表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞分化的影响

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。方法确定EGF与bFGF最大效应浓度后,对细胞分组,根据EGF和bFGF单独或联合应用,分为4组:EGF组、bFGF组、EGF联合bFGF组、不加任何生长因子的对照组。作用1、3、5、7、14 d后,采用ALP活性检测法(酶动力法)检测hDPSCs细胞ALP活性。结果 1～14 d bFGF组ALP活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在5、7、14 d,EGF组和EGF联合bFGF组ALP活性显著高于对照组(P<0.05);EGF联合bFGF组的ALP活性明显高于bFGF组(P<0.05),但EGF联合bFGF组ALP活性与EGF组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 bFGF单独应用不能诱导hDPSCs分化,EGF在hDPSCs的分化中发挥作用,EGF和bFGF无明显协同作用。