幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性

幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50％以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌VacA基因(vac4)及其产物,以及不同基因型与疾病的关系,对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。     

硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响

目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性。进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响。结果12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变,鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深。结论硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组VacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用。     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素A与脑梗死关系的探讨

我国脑梗死的发病率正在逐年增加 ,其常见的危险因子 ,如吸烟、高血压、高血脂、高血糖仅能部分解释脑梗死的病因 ,临床及实验研究资料显示 ,炎症反应是急性缺血性脑卒中发病的一个重要危险因素 ,慢性幽门螺杆菌(HP)感染与高血压、冠心病、脑梗死有密切关系。幽门螺杆菌细胞空泡毒素A存在于细胞的外壁 ,具有很强的毒性 ,可使机体细胞大量空泡变性 ,在炎症的发展过程中 ,空泡毒素起着非常重要的作用 ,即能加速动脉硬化 ,又能影响血液的粘稠性。为此 ,我们利用分子生物学的免疫印迹技术 ,分别随机检测了 2 0 0 0年～ 2 0 0 1年入住我院的部…     

幽门螺杆菌Vac A基因m1b变异体的序列特点及其空泡毒素表达活性

目的调查分析来自浙江人群的Hp临床菌株Vac A基因m1b变异体的序列特点及其空泡毒素表达活性.方法取Hp临床菌株及标准菌标培养于改良的布氏肉汤,在倒置显微镜下观察空泡变性的细胞数.结果 Vac A基因存在于所有Hp菌株中,但只有部分菌株有空泡毒活性,其表达差异与Vac A基因型的不同有关,本研究中m2和 m1b型Hp菌株占优势,而m1型少见.结论 m1b型比m2型菌株更适于在人群定植.     

浙江地区幽门螺杆菌临床菌株空泡毒素基因的变异及其表达活性分析

目的 了解浙江地区消化性溃疡(PU)和慢性胃炎(CG)患者感染幽门螺杆菌(Hp)vacA基因的变异及其空泡毒素表达情况。方法 从70株Hp中选择部分菌株测定其vacA基因的s区和m区核苷酸序列。用细胞培养的方法检测Hp菌株的空泡毒性。结果 6株sla型Hp菌株的s区扩增产物与报道的sla型60190株核苷酸序列相似性为93．2％～98．3％，4株m2型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m2型87—203株核苷酸序列之间相似性为93．8％～97．6％。1株m1b型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m1型60190株相应序列相似性为87．3％，与m2型87—203株相应序列之间相似性为71．7％。所有5株sla／m1型Hp对HeLa、RK-13和SGC-7901三种细胞均有明显的空泡毒作用；仅27.9％(12／43)的sla／m2型菌株对HeLa细胞表现为空泡毒作用，但分别有65．1％(28／43)和62.8％(27／43)的菌株对RK-13细胞和SGC-7901细胞有空泡毒作用。所有sla／m1b和sla／m1b—m2型Hp菌株对三种细胞均有明显的空泡毒作用，以RK-13细胞计，81.0％(17／21)的sla／m1b型Hp菌株和1株sla／m1b—m2型有空泡毒性。PU组感染的Hp菌株空泡毒性(84．4％)强于CG组(60．5％)，差异有统计学意义(P＜0．05)。结论 浙江地区患者感染的Hp菌株vacA基因变异主要在于m区。vacA基因空泡毒性的表达在HeLa细胞中低毒性的sla／m2型菌株在RK-13和SGC-7901细胞中仍有较高的空泡毒性。m1b型Hp空泡毒性强度介于m1和m2型之间。PU患者感染的Hp菌株其空泡毒性明显强于CG组。     

幽门螺杆菌空泡毒作用-一种新发现的致病因素

目的用细胞毒实验对幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,ＨＰ）致病机制作进一步研究。方法６２株临床分离的幽门螺杆菌,４３株的肉汤培养滤液（０．２２ｕｍ微孔滤膜）作用于体外培养的Ｖｅｒｏ细胞,能使其产生胞浆空泡样变。随着作用时间延长,空泡数目逐渐增多,体积逐渐增大,４天后细胞逐渐死亡。据此将ＨＰ分为有空泡毒作用的ＨＰ（Ｔｏｘｉｎ＋）及没有空泡毒作用的ＨＰ（Ｔｏｘｉｎ－）。二类ＨＰ肉汤培养滤液的尿素酶活性无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结果ＨＰ的这种空泡毒作用不同于已知的ＨＰ的致病因素,而是一种新近发现的致病因素。ＨＰ相关消化性溃疡、十二指肠球部溃疡、胃炎患者,ＨＰ（Ｔｏｘｉｎ＋）分别占其ＨＰ感染总数７８．２６％、８４．３８％、４２．８６％。结论ＨＰ相关消化性溃疡与ＨＰ（Ｔｏｘｉｎ＋）感染密切相关     

幽门螺杆菌vacA基因分型和cagA基因检测

〔目的〕建立检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ基因及其基因型的方法,观察ｖａｃＡ基因型与ｃａｇＡ状态的相关性。〔方法〕应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１７２份Ｈｐ阳性标本进行Ｈｐ ａｃｇＡ和ｖａｃＡ基因检测及其基因型分析。〔结果〕１７２份Ｈｐ阳性标本中,ｖａｃＡ阳性数１７２（１００％）,ｃａｇＡ阳性数９３（５４．０７％）;４９例萎缩性胃炎患者中,ｃａｇＡ阳性菌株感染４７例（９５．９２％）,６４例浅表性胃炎患者中,ｖａｃＡ阳性菌株感染２８例（４３．７５％）,两者有显著差异（ｐ〈０．０５）;ｖａｃＡ中间区域型ｍ１和ｍ２分别为８０和９２例,两者无明显差异（ｐ〉０．０５）,信号序列型ｓｌａ、ｓｌｂ、ｓ２分别为８２、６８、２２例,ｓｌａ与ｓｌｂ无明显差异（Ｐ〉０．０５）,ｓｌａ、ｓｌｂ、ｓｌ（ｓｌａ＋ｓｌｂ）均显著多     

幽门螺旋杆菌空泡/细胞毒素的研究现状

幽门螺旋杆菌感染呈全球性分布，多数地区感染率约为５０％，但并非所有人发生慢性胃炎和消化性溃疡，这与该菌产生细胞毒素的能力有关。本文综述了幽门螺旋杆菌产生的空泡／细胞毒素（ＶａｃＡ）和细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）的性质及与临床的关系、ＣａｇＡ阳性菌株在中国人中的流行情况。根据ＶａｃＡ和ＣａｇＡ基因，及它们表达活性产物与否，可将该菌分为两大类型：Ⅰ型具有编码ＣａｇＡ的基因，表达ＣａｇＡ蛋白和空泡毒素，Ⅱ型没有编码ＣａｇＡ的基因，不表达ＣａｇＡ蛋白和空泡毒素，其中Ⅰ型菌株毒力和致病力强，与溃疡产生有关     

幽门螺杆菌毒力因子的研究进展

幽门螺杆菌与多种胃部疾病有密切的关系,人群感染率在50％以上。幽门螺杆菌可表现为多重感染,感染后治愈较为困难,可能与其复杂的多因素致病机制相关。虽然疾病的发生和严重程度与宿主、环境因素有关,但其各种毒力因子的遗传多样性亦起到重要作用。现已发现幽门螺杆菌有多种毒力因子,分别由不同的基因编码。对该菌全基因测序工作的完成,为探讨毒力基因及其相关功能提供了研究基础。cagA、vacA、ure是非常重要的毒力基因,分别编码细胞毒素相关蛋白、细胞空泡毒素和尿素酶。在不同菌株中,几种基因的表达各不相同,从而表现出不同的毒力,引起不同的临床表现。     

具有细胞毒素相关蛋白和细胞空泡毒素的幽门螺杆菌与消化性溃疡的相关性研究

目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）与细胞空泡毒素（ＶａｃＡ）的幽门螺杆菌（ＨＰ）与消化性溃疡的关系。方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学Ｇｉｅｍｓａ染色证实ＨＰ阳性的血清标本共１１２份,其中慢性胃炎６５份,消化性溃疡４７份。观察两种疾病中ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ检测结果。结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ感染率分别为３３．８５％和５９．５７％,差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论具有ＣａｇＡ与ＶａｃＡ的ＨＰ菌株与消化性溃疡发病密切相关     

幽门螺杆菌研究的现状与展望

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)感染作为消化性溃疡、慢性胃炎等胃十二指肠疾病的主要病因已基本得到医学界的公认，近几年的研究又表明其与循环、呼吸、血液等其他系统疾病的发生也有着一定相关性，故其一直受到大家的关注，该文对HP的致病因素及疫苗研究问题作一简要综述，为HP感染防治的研究提供一些有价值的理论资料。     

幽门螺杆菌粘附素及其致病性

幽门螺杆菌粘附于胃粘膜是其致病的首要步骤，粘附素是其粘附定居的物质基础，本文就幽门螺杆菌粘附素及其致病性，以及粘附素在幽门螺杆菌疫苗研究中的应用作了综述。     

球形幽门螺杆菌vacA基因表达质粒构建及表达

目的构建球形幽门螺杆菌vacA基因的重组表达质粒,初步观察其在E.coli中的表达。方法采用亚克隆技术,用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD-18T-vacA上切下vacA基因,插入表达载体pET32a（＋）质粒,转化大肠埃希菌BL21,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定。重组质粒pET32a（＋）-vacA转化大肠埃希菌,（IPTG）诱导表达后进行（SDS-PAGE）电泳和凝胶扫描定量分析。结果重组质粒酶切和PCR鉴定与预期结果相符,成功构建携带vacA基因的重组原核表达质粒pET32a（＋）-vacA。核酸序列测定及同源性分析证实,表达质粒pET32a（＋）-cagA中所含vacA基因与GenBank中的vacA序列同源性达到99.2%。vacA基因在大肠埃希菌中诱导表达后获得约156 kD蛋白,蛋白含量占全菌体蛋白含量15.5%。结论成功构建球形H.pylori vacA基因重组表达质粒,并获得高效表达,为研究该基因蛋白的生物学特性及DNA疫苗研制奠定了基础。     

幽门螺杆菌毒力因子的研究进展

幽门螺杆菌与多种胃部疾病有密切的有关系。人群感染率在50％以上。幽门螺杆菌可表现为多重感染，感染后治愈较为困难，可能与其复杂的多因素致病机制相关，虽然疾病的发生和严重程度与宿主，环境因素有关，但其各种毒力因子的遗传多样性亦起到重要作用。现已发现幽门螺杆菌有多种毒力因子，分别由不同的基因编码，对该菌全基因测序工作的完成，为探讨毒力基因及其相关功能提供了研究基础。 cagA,vacA,ure是非常重要的毒力基因，分别编码细胞毒素相关蛋白、细胞空泡毒和尿素酶。在不同菌株中，几种基因的表达各不相同。从而表现出不同的毒力，引起不同的临床表现。     

幽门螺杆菌分型与妊娠剧吐相关性研究

目的 探讨幽门螺杆菌分型与妊娠剧吐的相关性.方法 选择60例妊娠剧吐孕妇为研究组,65例正常孕妇为对照组,用免疫印迹法进行幽门螺杆菌分型检测,观察两组孕妇不同类型幽门螺杆菌感染构成比的差异.结果 妊娠剧吐孕妇Ⅰ型(毒力型)幽门螺杆菌感染的比率显著高于对照组(χ2=12.67,P＜0.01).结论 Ⅰ型幽门螺杆菌感染与妊娠剧吐有显著的相关性.     

幽门螺杆菌粘附素及其致病性

幽门螺杆菌粘附于胃粘膜是其致病的首要步骤,粘附素是其粘附定居的物质基础,本文就幽门螺杆菌粘附素及其致病性,以及粘附素在幽门螺杆菌疫苗研究中的应用作了综述。     

幽门螺杆菌vacA s1m2基因型与胃黏膜肠上皮化生关系

目的 探讨幽门螺杆菌（H.pylori） vacA s1m2基因型与胃黏膜肠上皮化生（IM）的关系,为萎缩性胃炎治疗及胃癌预防提供依据。方法 选取H.pylori阳性胃镜活检的石蜡包埋标本271例,包括浅表性胃炎76例（伴IM 18例）、萎缩性胃炎56例（伴IM 37例）和胃溃疡139例（伴IM 30例）;提取标本中DNA,经巢式PCR方法及琼脂糖凝胶电泳对H.pylori的细胞空泡毒素基因（vacA）基因型进行检测。结果 萎缩性胃炎组中vacA s1m2亚型的检出率为53.6%（30/56）,明显高于浅表性胃炎组和胃溃疡组;在271例H.pylori阳性病例中,伴IM组vacA s1m2亚型检出率为62.4%（53/85）,明显高于无IM组;萎缩性胃炎病例中伴IM组vacA s1m2亚型检出率为75.7%（28/37）,明显高于无IM组,同时高于浅表性胃炎伴IM组和胃溃疡伴IM组。结论 幽门螺杆菌vacA s1m2基因型与胃黏膜肠上皮化生密切相关,vacA s1m2基因型幽门螺杆菌为萎缩性胃炎相关高致病性菌株。     

幽门螺杆菌中国菌株致病相关基因cagA、iceA、vacA及HP0519分布分析

目的分析中国不同人群及不同胃部疾病病例来源的幽门螺杆菌致病相关基因cagA、iceA、vacA及HP0519的分布.方法采用特异引物聚合酶链式反应（PCR）方法分析150株幽门螺杆菌上述基因的多态性分布特点,并对其分布作初步统计分析.结果93%（139/150）中国菌株cagA基因3′端重复序列的PCR产物具有东方菌株特征.75%（113/150）菌株iceA基因为iceA1,19%（29/150）为iceA2,不同地区间iceA基因的分布差异无统计学意义.云南菌株iceA1、iceA2的分布与菌株分离个体的种族特点及临床疾病类型无显著关系.96%中国菌株（144/150）vacA基因s区的等位基因为s1;m区等位基因m2、m1b和m1b-m2的比例分别为57%（85/150）、27%（41/150）和11%（16/150）,仅2株福建菌株为m1a.不同地区间vacA s1、m2、m1b分布的差异无统计学意义.云南菌株m1b-m2的分布高于福建和北京菌株.云南菌株vacA s区等位基因的多样性与分离个体的种族及临床疾病类型无显著关系.vacA m区等位基因的多样性与分离个体的临床疾病类型无显著关系,但不同民族间m2的分布有显著差异,白族人群m2的分布显著少于汉族和纳西族.93%（140/150）的中国菌株HP0519基因具有24 bp和15 bp DNA插入和缺失的多态性特点.不同地区间HP0519基因的多态性无显著不同.云南菌株HP0519的多态性与菌株分离个体的临床疾病类型无显著关系,但来源不同民族菌株的HP0519基因存在差异.结论幽门螺杆菌中国菌株cagA 3′端JF/TR特异引物的扩增结果具有东亚菌株特点.中国菌株vacA基因多为s1,其分布与菌株分离个体的临床疾病类型无关.中国菌株vacA基因m区的分布具有多样性.中国菌株HP0519基因具有24 bp和15 bp插入和缺失的多态性特点.     

淮南地区矿工幽门螺杆菌vacA、cagA基因分布特征

[目的]研究淮南地区煤矿工人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)vacA、cagA基因分布特征。[方法]选择经胃镜及病理组织检查诊断证实有相关胃、十二指肠疾病的349名矿工为研究对象,取其胃窦部活检黏膜作H.pylori的分离培养,利用聚合酶链反应技术(PCR)测定分离培养出H.pylori菌株的vacA、cagA基因,并进行分型。[结果]349份样本中共分离培养出244株H.pylori菌株,其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡幽门螺杆菌培养阳性率分别为61.61%(69/112)、61.54%(48/78)、75%(72/96)及87.30%(55/63);基因测定结果显示,244株H.pylori菌株临床分离株中,84.84%(207/244)含vacA基因,73.36%(179/244)含cagA基因;其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡cagA、vacA基因检出率分别为66.67%(46/69)、50.72%(35/69)、85.42%(41/48)和70.83%(34/48)与93.06%(67/72)、84.72%(61/72)、96.36%(53/55)和89.09%(49/55),4种疾病间差异均具显著性(P<0.01)。进一步分型发现,慢性胃炎、萎缩性胃炎,胃溃疡及十二指肠溃疡患者中vacA 、cagA 分别为44.93%(31/69)、66.67%(32/48)、79.17%(57/72)、87.27%(48/55),差异具显著性(χ2=30.80,P<0.01)。vacA 、cagA 菌株主要多见于损害较严重的胃黏膜表面,如萎缩性炎症、炎性坏死等,23例腺体不典型增生的胃黏膜表面均为vacA 、cagA 菌株。[结论]淮南地区矿工H.pylori感染多为vacA 、cagA 菌株,vacA 、cagA H.pylori菌株为高毒力菌株,且与较严重的胃黏膜病理改变有关,可能是导致矿工慢性胃炎、消化性溃疡的重要因素,临床应充分重视H.pylori菌株毒力因子的监测。     

浙江地区幽门螺杆菌优势基因型研究

目的研究浙江地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的优势基因型并探讨各基因在不同胃十二指肠疾病患者中Hp的差异。方法从胃十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养到Hp 129株,抽提基因组DNA后用PCR检测Hp的cagA、vacA、iceA及babA2等基因的分布,用卡方检验分析各基因在不同胃十二指肠疾病中Hp的差异。结果129株Hp中cagA的阳性率为99.2%(128/129),vacA sla基因型阳性率为94.6%(122/129),vacA m2为83.7%(108/129),iceA1为84.5%(109/129),iceA2为46.5%(60/129),babA2阳性率为81.4%(105/129)。消化性溃疡患者Hp的vacAm2基因阳性率高于慢性胃炎患者Hp(P<0.05),其余基因在不同类型疾病中的分布无统计学差异(P>0.05)。结论浙江地区Hp菌株的优势基因型为cagA,vacAsla/m2,iceAl,babA2;消化性溃疡患者Hp的vacAm2基因阳性率明显高于慢性胃炎患者。