耳鸣大鼠NMDA受体亚型1、2A、2B的表达研究

目的研究耳鸣大鼠听皮层NMDA（N-甲基-D-天冬氨酸,N-methyl-D-aspartate）受体亚型1、2A、2B（NR1、NR2A、NR2B）的表达变化,从而推测其在耳鸣的发生中可能的作用机制。方法按照随机化原则将动物分成3组,每组9只：A组为耳鸣模型组、B组为生理盐水组、C组为空白对照组。A组通过腹腔注射水杨酸钠并用食物抑制法进行验证。造模成功后运用核酸荧光染料SYBR Green实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应）方法检测NMDA受体三种亚型的表达情况。结果NR1在A组的表达显著低于C组（P〈0.05）,NR2A在A组的表达则显著高于C组（P〈0.05）,而A、C两组之间NR2B的表达差异比较无统计学意义（P〉0.05）。NMDA受体三种亚型B、C两组之间表达差异比较均无统计学意义（P〉0.05）。A组NR2A、NR2B与NR1表达量的比值较C组均增大。结论耳鸣大鼠听皮层NMDA受体调节亚基的调控作用增大,突触局部受体蛋白质合成改变,听皮层发生了与NMDA受体相关的可塑性变化,这可能是耳鸣产生的机制之一。     

耳鸣模型大鼠听皮层生长相关蛋白-43和细胞骨架活性调节蛋白的表达

目的检测神经元功能可塑性基因生长相关蛋白-43（growth associated protein,GAP-43）和细胞骨架活性调节蛋白（activity regulated cytoskeleton associated protein,ARC）在水杨酸诱导耳鸣大鼠听皮层中的表达,探讨其在耳鸣产生中的作用。方法将24只白色Wistar大鼠随机分为3组：水杨酸钠组（8只）、生理盐水组（8只）和空白对照组（8只）。前两组从条件反射建立前开始于每次条件反射训练前2小时分别腹腔注射10%水杨酸钠溶液（350mg/kg）和同体积生理盐水,至实验结束,空白对照组不做任何处理。通过行为学方法证实水杨酸钠组动物感受到耳鸣后,利用荧光定量PCR检测动物听皮层中GAP-43和ARC的表达。结果水杨酸钠组大鼠听皮层中GAP-43和ARC蛋白阳性神经元的表达（分别为2.17±0.72、4.90±2.13）明显高于生理盐水组（分别为1.05±0.20、1.13±0.42）和空白对照组（分别为0.96±0.97、1.07±0.70）（P〈0.01）,而生理盐水组和空白对照比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论耳鸣大鼠听皮层中神经元功能可塑性基因GAP-43和ARC蛋白阳性神经元的表达增加,推测它们可能在耳鸣的发生发展中起重要作用。     

长期注射水杨酸钠对大鼠听皮层酪氨酸受体激酶B及c－fos基因表达的影响

目的通过观察长期注射水杨酸钠后大鼠听皮层中酪氨酸受体激酶B(TrkB)及c-fos基因的表达,探讨其在水杨酸钠耳毒性机制中的作用。方法健康成年Wistar大鼠36只,分为正常组(不做任何处理)、慢性组(肌肉注射水杨酸钠175mg/kg,2次/天,时间间隔8小时,连续注射14天)、慢性恢复组(前期处理同慢性组,停药后恢复28天),每组12只。造模结束后各组大鼠均行听性脑干反应(ABR)检测,然后断头处死并迅速取出听皮层,运用实时荧光定量PCR技术及Western-blot技术分别检测三组大鼠听皮层中TrkB及c-fos的表达。结果正常组ABR反应阈为36±2.23dB SPL,慢性组反应阈升高为41.3±3.31dB SPL,与正常组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01);慢性恢复组ABR反应阈为38.6±5.51dB SPL,与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。慢性组听皮层c-fos mRNA表达为1.24±0.09,蛋白的表达为0.70±0.12,慢性恢复组听皮层c-fos mRNA的表达为1.23±0.04,蛋白的表达为0.68±0.08,两组均高于正常组(分别为1.12±0.05、0.50±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。慢性组听皮层TrkB mRNA表达为1.26±0.10,蛋白的表达为1.85±0.17,慢性恢复组听皮层TrkB mRNA表达为1.23±0.07,蛋白的表达为1.80±0.08,均高于正常组(分别为1.11±0.03,1.53±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期注射水杨酸钠后大鼠听皮层c-fos基因表达升高,可能与听觉中枢神经活动增强有关;长期注射水杨酸钠可能通过上调大鼠听皮层TrkB的表达,增强听皮层神经营养因子的功能促进听皮层功能重塑。     

补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元5-HT1B、2C受体表达的影响北大核心CSCD

目的探讨补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)中5羟色胺(serotonin,5-HT)1B、2C受体的表达及意义。方法 60只健康SPF级雄性大鼠随机分为正常组10只(生理盐水组),耳鸣模型组50只(采用水杨酸钠腹腔注射联合"饮水抑制"大鼠行为学实验方法建立大鼠耳鸣模型),耳鸣模型组造模成功后再分为水杨酸钠组10只、中药组30只(补肾活血化痰开窍方低、中、高剂量组各10只)、西药组(卡马西平组)10只,除水杨酸钠组给予生理盐水灌胃外,各组给予相应药物干预8周,造模成功后运用免疫组化法检测各组耳蜗SGN中5-HT1B、2C受体的表达。结果耳鸣造模成功并给予相应药物干预8周后,各组大鼠耳蜗SGN中均有5-HT1B、2C受体的表达,与生理盐水组相比,水杨酸钠组中5-HT1B表达减少,5-HT2C表达明显增多;与水杨酸钠组相比,中药各剂量组耳蜗SGN中5-HT1B表达增多,2C表达均明显降低。结论耳鸣大鼠耳蜗SGN中的5-HT1B受体表达减少、5-HT2C表达增加,应用补肾活血化痰开窍方后5-HT1B表达增多而5H2C表达降低,产生了拮抗作用,该方可能应用于耳鸣的治疗。     

隔声后听觉重塑模型中听皮质突触NR2A表达的变化

目的：观察隔声后听觉重塑模型中听皮质突触N甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚基NR2A表达的变化。方法：采用清洁级SD大鼠45只,分成隔声组、隔声后听觉重塑组及对照组各15只,Optiprep沉降梯度超速离心从初级听皮质提取高度纯化的突触体后,采用Western blotting蛋白质印迹检测技术对生后隔声14d组、28d组、42d组、隔声7d后再给予纯音暴露的各实验组听皮质突触体NR2A表达进行比较。结果：隔声使生后14d组和28d组动物听皮层NR2A表达水平明显下降（P〈0．05）,隔声7d后再给予纯音暴露则又使NR2A表达水平明显提高（P〈0．05）,呈现双向调节趋势。隔声和纯音暴露对生后42d组成熟大鼠听皮层NR2A表达不再产生明显调节作用（P〉0．05）。结论：在大鼠生后发育关键期,听觉经验可改变听皮层NMDA受体NR2A蛋白表达水平。研究结果为研究感觉功能发育可塑性的机制提供了重要的实验资料。     

早期耳鸣和持续耳鸣对大鼠听觉中枢GAP43和egr-1基因表达的影响及变化

目的 通过检测早期耳鸣与持续耳鸣大鼠听觉通路中GAP43和egr-1基因的表达情况来探讨耳鸣发生的中枢源性机制.方法 将48只大鼠随机分为6组,每组均8只:水杨酸钠组分为早期组与持续组,每次训练前2小时腹腔注射10%水杨酸钠溶液(400mg/kg),其中持续组在耳鸣模型建立成功后,继续每天同一时间腹腔注射相同剂量水杨酸钠溶液10天;盐水1组与盐水2组,每次训练前2/h时腹腔注射与水杨酸钠组相同体积生理盐水,其中盐水2组在造模成功后,继续每天同一时间腹腔注射同体积生理盐水10天;空白对照组也分为空白1组与空白2组.早期组、盐水1组、空白1组同时断头取标本,而盐水2组、空白2组与持续组一同断头取标本.再利用实时荧光(sybgreena染料法)相对定量PCR检测GAP43和egr-1的mRNA在听觉通路四个核团中的表达情况.结果 空白组与生理盐水组相比较,听皮层GAP43与egr-1的mRNA表达水平明显提高(P<0.01).耳蜗核中GAP43的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增加先下降(P<0.01),后又逐渐回升(P<0.01);egr-1mRNA明显下降(P<0.01).下丘GAP43、egr-1的mRNA表达水平均有明显提高.上撇榄核中,仅持续组GAP43的mRNA有明显降低(P<0.01);两组水杨酸钠组的egr-1的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增多而逐渐降低(P<0.05).结论 GAP43和egr-1基因表达水平的改变不但证实了由水杨酸钠诱导的耳鸣大鼠的听觉通路中听觉神经元发生了可塑性改变,并且能够维持这种可塑性改变,从而使大鼠耳鸣症状得以长期持续.     

耳鸣大鼠耳蜗核5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达的研究

目的通过检测耳鸣大鼠耳蜗核5-羟色胺受体1B(5-hydroxytryptamine receptor1B)和5-羟色胺受体2C(5-hydroxytryptamine receptor2C)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)、谷氨酸受体1(glutamate receptor1,GluR1))和谷氨酸受体2(glutamate receptor2,GluR2)表达情况,探讨其在耳鸣产生中所起的作用。方法将24只白色Wistar大鼠随机分为3组:Ⅰ组:空白对照组(8只)、Ⅱ组:生理盐水组(8只)和Ⅲ组:耳鸣模型组(8只)。将耳鸣模型组大鼠腹腔注射水杨酸钠造模并用行为学方法证实动物感受到耳鸣后,利用免疫组化方法检测各组动物耳蜗核5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达情况,并进行统计分析。结果8只注射水杨酸钠的耳鸣模型组大鼠全部造模成功。在耳鸣模型组5-HTR1B、γ-氨基丁酸(GABA)的表达显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01);5-HTR2C、谷氨酸受体1和谷氨酸受体2(GluR1/2)表达显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ组5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达差异无统计学意义(P<0.05)。结论耳鸣模型大鼠耳蜗核中神经递质及受体发生了改变,其功能失调可能是耳鸣发生的主要机制。     

水杨酸钠引起耳鸣大鼠听皮层突触形态改变的透射电镜观察

目的用透射电镜观察水杨酸钠引起耳鸣大鼠听皮层突触形态的变化。方法成年健康雄性白色Wistar大鼠32只,随机平分为2组。第一组腹腔注射水杨酸钠350mg/kg,第二组腹腔注射等量生理盐水,均在每天上午9点注射,持续30天。两组所处饲养环境（包括环境噪声、12小时昼夜节律、饮食等）完全相同。1月后快速处死,取双侧听皮层组织进行透射电镜观察。结果与对照组相比,水杨酸组突触数量明显增加,许多突触形态由平型变成凹型或U型,突触界面曲率增加,突触面积增大,活性区增加,每一活性区的长度增加,突触间隙明显增宽,突触后膜致密物质厚度增加。U型突触直径平均为（1.7&#177;0.23）μm,平直型突触直径平均为（0.53&#177;0.14）μm,二者比较有显著性差异（P〈0.05）。结论水杨酸钠能够引起听皮层突触形态的改变,这种改变与长时程增强现象（Long-term potentiation,LTP）非常相似,有可能是耳鸣与突触可塑性以及与学习记忆相关的有力证据,值得深入研究。     

听觉剥夺及耳蜗内电刺激幼鼠听皮层和下丘核CREB 和 NMDAR1蛋白表达变化

目的：观察耳聋幼鼠及其耳聋后单耳植入电极电刺激后幼鼠听皮层和下丘核环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cyclic AMP response element － binding protein ,CREB）和N －甲基－D－天冬氨酸受体－1（N －methyl－D－aspartic acid receptor one ,NMDAR1）表达水平的变化。方法将66只12天龄SD幼鼠随机分为2大组,分别为耳聋造模后4周组（33只）及耳聋造模后6周组（33只）。将耳聋造模后4周组再分为对照1组、耳聋造模后4周组（4周组）及耳聋造模后3周耳蜗内电刺激组1（刺激时间为1周,简称“电刺激1组”）,每组11只大鼠;将耳聋造模后6周组再分为对照2组、耳聋造模后6周组（6周组）及耳聋造模后5周耳蜗内电刺激组2（刺激时间为1周,简称“电刺激2组”）,每组11只大鼠;对照1、2组均正常饲养。除对照1、2组外,在其余4组幼鼠颈背部、两侧下腹部皮下注射庆大霉素（总量为350 mg／kg ）,半小时后于相同部位注射呋塞米（总量为200 mg／kg ）,两周后行ABR检测,于耳聋造模成功后第3、5周分别对电刺激1、2组的幼鼠植入电极,在耳蜗内进行电刺激,每天3小时,持续7天。于耳聋造模后4、6周分别处死4、6周组大鼠取听皮层和下丘组织,通过免疫组织化学方法,观察CREB和NMDAR1表达水平的变化。结果耳聋造模成功后幼鼠ABR阈值均大于93 dB SPL ,4周组听皮层、下丘CREB和NMDAR1的表达较对照1组增加,电刺激1组CREB和NMDAR1的表达较4周组增加。6周组听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达较对照2组下降,电刺激2组CREB和NMDAR1的表达较6周组增加。结论听觉剥夺可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1早期表达增加而晚期表达下降。耳蜗植入电极电刺激可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达增加,反映这两个部位神经元的可塑性变化。     

泪囊在鼻内镜泪囊鼻腔造口术中的解剖学研究及临床应用

目的 探讨经鼻内镜泪囊鼻腔造口术中泪囊在鼻腔外侧壁的解剖学定位.方法 对12具(24侧)成人尸头的泪囊在鼻腔外侧壁上的投影位置进行解剖学测量,为62例(85侧)慢性泪囊炎鼻泪管阻塞患者行经鼻内镜鼻腔泪囊造口术.结果 解剖学测量结果提示,15侧(62.5%)泪囊上界位于中鼻甲腋上方,9侧(37.5%)泪囊上界位于中鼻甲腋下方.临床结果:62例(85侧)术后随访6个月以上,治愈50例(70侧,82.3% ),好转8例(9侧,10.6%),无效4例(6侧,7.1%),总有效率为92.9%.结论 以中鼻甲腋前上0.7 cm为上界,腋前下0.3 cm为下界,钩突前缘向上延线为泪囊后界定位泪囊进行鼻腔泪囊造口为较佳选择.     

肠球菌属益生菌提取物LFK对变应性鼻炎小鼠血清IL-12的影响

目的 变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)小鼠模型经口途径给予经热处理及酶裂解的肠球菌faecalis FK-23菌株(lysed Enterococcus faecalis FK-23,LFK),观察对血清IL-12水平的影响,探讨LFK对实验性AR的抗变态反应作用。方法 BALB/c小鼠75只,随机分为阳性对照组、LFK干预组和阴性对照组。采用OVA腹腔注射及鼻腔激发建立小鼠AR模型,阴性对照组小鼠采用生理盐水代替OVA进行腹腔注射及滴鼻。用益生菌提取物LFK 0.5mL(60mg)对AR小鼠模型进行灌胃,共计21d;阳性和阴性对照组以生理盐水 0.5mL代替LFK灌胃处理。第22天取材,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清IL-12水平。结果 血清IL-12水平阳性对照组较阴性对照组显著降低(P＜0.001),LFK干预组较阳性对照组显著升高(P＜0.001),但与阴性对照组相比仍明显降低(P＜0.001)。结论 肠球菌属益生菌提取物LFK对细胞因子IL-12具有一定的调节作用,推测其与抗变态反应作用有关。     

口腔矫治器治疗对OSAHS患者焦虑抑郁及心理状态影响的研究

目的 探讨口腔矫治器治疗对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者焦虑抑郁情绪及心理状态的影响。方法 对48名轻、中度OSAHS患者采用下颌前移矫治器进行治疗,在治疗前及治疗6个月后采用多导睡眠图(PSG) 监测、白天过度嗜睡(EDS)、症状自评量表(SCL-90)、焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)对治疗的疗效及患者的心理状况进行评分并进行统计学分析。结果 OSAHS患者的主客观症状均有显著改善;患者治疗前SCL-90各因子评分均高于中国正常成人常模,在戴用口腔矫治器治疗6个月后,SCL-90各因子及焦虑、抑郁评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OSAHS患者心理健康水平较低,口腔矫治器治疗可以有效地改善OSAHS患者的心理状况。     

周围性面瘫的MRI增强扫描检查和损伤节段观察及预后相关性分析

目的 探究周围性面瘫的MRI检查和损伤节段观察及预后相关性。方法 周围性面瘫患者15例,用Siemens Magnet V1.5 T超导型磁共振,头线圈,扫描双侧颞骨,单侧面瘫扫描双侧面神经,健侧为阴性对照。常规T1WI、T2WI轴面及冠状面薄层扫描后,行T1WI-vibe横断位、T2WI-TSE冠状位、T2WI-SPACE横断位、增强后T1WI-Vibe横断位及T1WI-TSE冠状位扫描及钆喷替酸葡甲胺(Gd-DTPA)增强扫描(对比剂剂量0.1mmol/kg),延时30min对病变进行MRI扫描及图像多平面重建。结果 ①与手术相关者3例,面神经MRI重建显示面神经全程完整1例,没有中断、水肿。3个月后恢复,为H-B 1级。术前就发生面瘫的岩部巨大胆脂瘤患者1例,显示全程水肿,但没有中断,术后恢复十分缓慢,为H-B 3级。第3例巨大听神经瘤患者,MRI重建显示面神经仍连续,与术中观察一致。术前面瘫H-B 6级,术后仍为6级;②Bell氏面瘫者6例中,显示内听道段至鼓室段均有强化1例,强化在膝状神经节至乳突段2例,只在内听道段2例,在内听道段、迷路段、膝状神经节及鼓室段1例,术后均痊愈,H-B分级全部达到1级;③HUNT综合征患者6例中,未见面神经异常1例,强化在内听道2例,另膝状神经节强化3例,其中2例伴内听道内强化,只有1例还涉及乳突段,伴有耳蜗增强改变5例,治疗后H-B分级全部达到1级。结论 MRI增强和重建,可以很好地显示面神经损伤的节段和范围,也能为预后判定提供一些信息。     

低温等离子射频消融治疗常年性变应性鼻炎合并支气管哮喘的疗效及安全性评价

目的 探讨低温等离子射频消融治疗常年性变应性鼻炎合并支气管哮喘的疗效及安全性。方法 选择80例常年性变应性鼻炎合并支气管哮喘患者的临床资料,其中,观察组40例采用低温等离子射频消融术进行治疗,对照组40例采用微波治疗,比较两组的临床效果。结果 观察组支气管哮喘总有效率为90%,其常年性变应性鼻炎总有效率为95%,均明显高于对照组(P<0.05)。观察组鼻结膜炎生存质量问卷(RQLQ)评分、视觉模拟量(VAS)评分以及成人哮喘生存质量问卷(AQLQ)评分均较对照组明显改善(P<0.05)。结论 低温等离子射频消融术治疗常年性变应性鼻炎合并支气管哮喘疗效显著,改善了患者生活质量,值得临床应用。     

Assessment of Nutrient Supplement to Reduce Gentamicin-Induced Ototoxicity

Gentamicin is an aminoglycoside antibiotic used to treat gram-negative bacterial infections. Treatment with this antibiotic carries the potential for adverse side effects, including ototoxicity and nephrotoxicity. Ototoxic effects are at least in part a consequence of oxidative stress, and various antioxidants have been used to attenuate gentamicin-induced hair cell death and hearing loss. Here, a combination of nutrients previously shown to reduce oxidative stress in the hair cells and attenuate hearing loss after other insults was evaluated for potential protection against gentamicin-induced ototoxicity. Guinea pigs were maintained on a nutritionally complete standard laboratory animal diet or a diet supplemented with β-carotene, vitamins C and E, and magnesium. Three diets with iterative increases in nutrient levels were screened; the final diet selected for study use was one that produced statistically reliable increases in plasma levels of vitamins C and E and magnesium. In two separate studies, significant decreases in gentamicin-induced hearing loss at frequencies including 12 kHz and below were observed, with less benefit at the higher frequencies. Consistent with the functional protection, robust protection of both the inner and outer hair cell populations was observed, with protection largely in the upper half of the cochlea. Protection was independently assessed in two different laboratories, using two different strains of guinea pigs. Additional in vitro tests did not reveal any decrease in antimicrobial activity with nutrient additives. Currently, there are no FDA-approved treatments for the prevention of gentamicin-induced ototoxicity. The current data provide a rationale for continued investigations regarding translation to human patients.     

Evaluation of airway obstruction using virtual endoscopy

OBJECTIVES: This study examines the use of virtual endoscopy (VE) in the evaluation of patients with upper airway obstruction. The utility of VE compared with actual endoscopy was investigated with respect to accuracy of diagnosis and reproduction of endoscopic images. STUDY DESIGN: A random cohort of 30 patients with various causes of airway obstruction was examined. METHODS: The computed tomography (CT) data were reconstructed using a proprietary VE software program, FreeFlight, blind to the actual endoscopic findings. The cause of obstruction was identified and compared with actual endoscopic findings. This included 21 patients with airway stenoses, 8 patients with laryngotracheomalacia, 3 tracheal tumors, 2 glottic webs, 5 patients with innominate artery compression, 2 tracheal granulomas, and 7 patients with impaired true vocal cord mobility. RESULTS: Virtual endoscopic evaluation was accurate in assessing stenosis width and length of fixed airway lesions. Correlation of stenosis shape and contour between actual endoscopy and VE was excellent. The stenosis-to-lumen ratios were compared between VE and actual endoscopy and were found to be within 10% (SD = 8). However, virtual endoscopic evaluation could not illustrate one of the glottic webs, half of the cases of tracheomalacia, or any of the cases of impaired true vocal cord mobility. CONCLUSIONS: Virtual endoscopy was not as sensitive as actual endoscopy in detecting the cause of airway obstruction that was based on dynamic movement. However, VE was excellent for the measurement and definition of fixed airway lesions.     

慢性鼻-鼻窦炎的组织重塑研究进展

慢性鼻-鼻窦炎的病理特点是鼻腔及鼻窦黏膜存在持续炎症浸润,依据是否存在鼻息肉,被分为伴息肉及不伴息肉型。现有的研究表明,慢性鼻-鼻窦炎的发生、发展中存在组织重塑,其中TGF-β及基质金属蛋白酶是影响重塑最重要的细胞因子。研究重塑过程中的细胞因子及其作用机制,有助于选择最佳的治疗靶点。未来研究应进一步明确慢性鼻-鼻窦炎组织重塑复杂径路。     

离体培养时Wnt3a对椭圆囊毛细胞再生的影响

目的 在小鼠椭圆囊体外培养模型上,通过Wnt3a激活经典WNT信号,与DMSO共同作用,研究其对椭圆囊毛细胞再生的影响。方法 40只小鼠随机分成8组。实验第一部分：小鼠椭圆囊经4mmol/L新霉素处理后,在不同浓度(0、25、100、200ng/mL)Wnt3a的培养液中继续培养1d,培养结束后对β-catenin,毛细胞纤毛及细胞核进行免疫荧光染色。实验第二部分：小鼠椭圆囊经4mmol/L新霉素处理后,在含25ng/mL Wnt3a的培养液中培养6d,分别在空白对照组,50μmol/L DAPT、0.1%DMSO、50μmol/L DAPT+25ng/mL Wnt3a培养液中继续培养7d,共培养14d。在所有培养过程中均加入10μmol/L Brdu。培养结束后Brdu,Myocin7a及细胞核进行免疫荧光染色。结果 实验第一部分：在25ng/mL Wnt3a组中可见β-catenin在支持细胞胞浆中有阳性表达,β-catenin阳性细胞数与其他各组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。实验第二部分：DMSO组中可见Myosin7a染色阳性细胞,对照组、Wnt3a+DAPT组及DATP组中可见大量Brdu阳性细胞而未见Myosin7a染色阳性细胞,DMSO组中Myosin7a阳性细胞数与其他3组相比较,组间差异具有显著性(P<0.01)。结论 顺序联合应用Wnt3a和DMSO可通过激活经典WNT信号途径,促使椭圆囊内细胞向毛细胞样细胞转分化。