受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402细胞Ca~(2+)浓度的影响

目的:研究甲胎蛋白(alpha-fetoproteinAFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响。方法:采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化。结果:在AFP作用4min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10min时降到正常水平。结论:AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Bel7402细胞内信息传递。     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402 细胞 Ca2+浓度的影响

目的研究甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响.方法采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化.结果在AFP作用4 min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10 min时降到正常水平.结论AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Be17402细胞内信息传递.     

甲胎蛋白促人肝癌Bel7402细胞增殖的机制研究

目的:观察甲胎蛋白促肿瘤细胞增殖的信号转导方式。方法:用从人脐带血清中提取的甲胎蛋白,作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,运用MTT染色计数法,流式细胞仪测定细胞周期和3H-脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等指标检测细胞增殖状况;放射受体分析细胞膜上甲胎蛋白受体存在和数目;免疫结合法检测细胞内cAMP浓度;Westernblot分析P21ras蛋白的表达。结果:甲胎蛋白(10～80mg·L-1)作用24h后,人肝癌Bel7402细胞有不同程度的促增殖作用;在人肝癌Bel7402细胞膜上存在2种不同的解离平衡常数(Kd)的甲胎蛋白受体,Kd分别为Kd1=1.3×10-9mol·L-1(89400位点/细胞)和Kd2=9.9×10-8mol·L-1(582000位点/细胞)。AFP能显著提高Bel7402细胞内的cAMP浓度,对P21ras的表达也有明显的促进作用。甲胎蛋白的单克隆抗体能阻断这种作用。结论:甲胎蛋白具有促人肝癌Bel7402细胞增殖的作用,这种作用是由受体介导的cAMP信号转导途径实现的。     

苦参碱对HeLa细胞粘附和移动的抑制作用及机制

目的:探讨苦参碱(Matrine)抑制HeLa细胞粘附和移动的作用及机制。方法:不同浓度苦参碱作用HeLa细胞24h后,粘附实验检测细胞粘附率,划痕损伤实验检测迁移速度,Westernblotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化水平,PKA试剂盒检测蛋白激酶A(PKA)活性。结果:5,50,100,250和500μg/ml苦参碱处理24h后,HeLa细胞粘附率分别为74.68%,48.97%,45.66%,40.68%和32.61%,总体呈下降趋势,50μg/ml组分别与5μg/ml和500μg/ml组比较差异有显著性(均为P<0.01);与100μg/ml和250μg/ml组比较差异无显著性(P>0.05)。50μg/ml苦参碱处理24h后HeLa细胞迁移速度明显降低(P<0.01),PKA活性明显降低(P<0.01),VASP处于非磷酸化状态。结论:苦参碱抑制HeLa细胞粘附和运动,并降低其PKA活性及抑制骨架调节蛋白VASP磷酸化,发挥了抑制肿瘤转移作用。     

17β-雌二醇对宫颈癌HeLa细胞增殖的促进作用

目的 :研究 17β 雌二醇 (E2 )对人宫颈癌HeLa细胞系增殖的影响 ,并探讨其可能的机制。　方法 :应用细胞培养、细胞计数、甲基噻唑基四唑 (MTT)、流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术。　结果 :E2 (10 - 6mol L)使细胞生长曲线上移 ;E2 (10 - 8～ 10 - 6mol L)呈剂量依赖性地促进宫颈癌HeLa细胞系的增殖。流式细胞术检测细胞周期发现 ,E2 (10 - 6mol L)可促进细胞周期由G1 期进入S期 ,G1 期的DNA含量由 70 .0 %下降到 5 5 .5 % ,S期的DNA含量由17.3%上升到 2 9.0 %。激光共聚焦检测到E2 (10 - 6mol L)可使细胞内Ca2 浓度显著升高。　结论 :E2 可以通过调节细胞周期和细胞内Ca2 浓度水平 ,从而调节宫颈癌HeLa细胞的增殖活动     

黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及可能机制。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测黄芩素对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法观察黄芩素对HeLa细胞凋亡的诱导作用;比色法测定黄芩素对HeLa细胞内caspase-3活性的影响。结果:不同浓度黄芩素作用24、36、48h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05~P<0.01);黄芩素作用24h后,HeLa细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内caspase-3活性增强(P<0.05~P<0.01)。结论:黄芩素能抑制HeLa细胞生长,其机制可能与诱导细胞凋亡及增强caspase-3活性有关。     

睫状神经营养因子对N-甲基-D-天冬氨酸引起海马神经元内钙离子浓度升高的影响

①目的　研究睫状神经营养因子 (CNTF)对谷氨酸 (Glu)受体激动剂N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)引起的海马神经元内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)升高的影响 ,并探讨G蛋白是否参与此作用。②方法　原代培养海马神经元 ,用活细胞内荧光探针Fura 2 /AM实时检测应用CNTF和G蛋白抑制剂百日咳毒素 (PTX)后由NMDA引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 的变化。③结果　用CNTF孵育经NMDA刺激的海马神经元后 ,细胞内 [Ca2 + ]i 升高的程度较单独NMDA刺激细胞引起的 [Ca2 + ]i 升高程度低 (t=2 .97～ 4 .86 ,P <0 .0 5 ) ,加入PTX可减弱CNTF的抑制作用。④结论　G蛋白可能参与CNTF调节NMDA引起的海马神经元内 [Ca2 + ]i 升高的快速作用途径     

甲状腺刺激性抗体对甲状腺细胞功能影响及其作用机制

目的　研究甲状腺刺激性抗体 (TSAb)对甲状腺细胞合成和分泌激素功能的影响以及通过的信号传导途径 ,初步探讨 Graves’病 (GD)发病的分子机制。　方法　应用原代培养人甲状腺细胞为研究对象 ,放射免疫法检测 TSAb刺激后培养介质 T3、T4 、甲状腺球蛋白 (TG)的生成 ,改良愈创木酚氧化法检测细胞的甲状腺过氧化物酶 (TPO)活性 ;同时应用信号传导抑制剂阻断各传导途径 ,观察蛋白激酶 (PKA)抑制剂、细胞内 Ca2 +鳌合剂 (BAPTA- AM)、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂——木黄酮对 T3、T4 、TG生成及 TPO活性的影响。　结果　 TSAb阳性组呈浓度和时间依赖性刺激 T3、T4 、TG生成及 TPO活性增加 ,T3、T4 、TG分泌高峰分别为2 mg/ m L TSAb 作用 4 8h,2 mg/ m L TSAb 作用 4 8h,3mg/ m L TSAb作用 72 h;TPO活性的高峰为 4 mg/ m LTSAb作用 4 8h。同时加 PKA抑制剂阻断环磷酸腺苷 /蛋白激酶 A (c AMP/ PKA )途径后 ,T3生成降低 6 3.3% ,T4 降低6 7.9% ,TG降低 5 1 .5 % ,TPO活性减少 79.2 % ;加 BAP-TA - AM鳌合细胞内 Ca2 + 阻断 PIP2 / Ca2 + 途径 ,能部分抑制T3、T4 、TG的生成 ,但对 TPO活性无明显作用 (P >0 .0 5 ) ;TPK通道抑制剂木黄酮对 T3、T4 、TG、TPO活性均无明显影响 (P>0 .0 5 )。　结论　 (1 ) TSAb可     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

甲胎蛋白对Hela细胞增殖的促进作用

目的 :采用由脐带血血清中提纯的胎蛋白 (Alpha-fetoprotein,AFP)作用于体外培养的Hela细胞。方法 :通过对MTT计数 ,3H -TdR掺入以及细胞周期时相改变等指标的检测。结果 :发现AFP(浓度大于10mg/L)对Hela细胞增殖有明显的促进作用。结论 :AFP具有促Hela细胞增殖的生理功能     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。     

维甲酸对宫颈癌细胞耐药株增殖及药物敏感性的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌耐药株HeLa/MMC的增殖及药物敏感性的影响及其作用的分子机制。方法:观察ATRA作用下HeLa/MMC细胞的增殖,MTT法观察ATRA对HeLa/MMC药物敏感性的影响,半定量RT-PCR检测mdr1基因的表达情况。结果:①ATRA对HeLa/MMC细胞的增殖有抑制作用,这一作用为非细胞毒抑制作用。②ATRA能提高MMC对HeLa/MMC细胞的杀伤作用,并呈剂量依赖性。③半定量RT-PCR结果显示,ATRA上调了HeLa/MMC细胞mdr1基因的表达。结论:表明ATRA能抑制HeLa/MMC的增殖,提高HeLa/MMC对MMC的敏感性,但这种作用与mdr1基因表达无关。     

顺铂上调STAT1蛋白抑制宫颈癌细胞增殖

目的研究Stat1蛋白对宫颈癌Hela细胞生长、增殖及顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法采用蛋白印迹法（Western
blot）检测不同浓度DDP处理Hela细胞后Stat1蛋白表达差异;转染Stat1-siRNA后,通过Western blot验证干扰效果;应用四甲
基偶氮唑蓝（MTT）法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）观察转染Stat1-siRNA后Hela细胞对DDP敏感性变化,并检测Stat1相关细
胞因子c-Myc的表达变化。结果随着DDP浓度的增加,Hela细胞中Stat1蛋白的表达量逐渐增加,DDP浓度为5 mg/L时,Stat1
蛋白表达上调1.5倍,DDP浓度为10 mg/L时,Stat1蛋白表达上调近2倍;特异性Stat1-siRNA 使Hela细胞中Stat1的表达下调
70%,促进细胞生长和增殖;Stat1-siRNA可以降低DDP对Hela细胞生长和增殖的抑制效应,削弱DDP对c-Myc的抑制作用。
结论Hela细胞中c-Myc是STAT1发挥抑癌作用的靶点基因之一;STAT1/c-Myc通路介导了DDP抑制Hela细胞生长、增殖的作
用;STAT1可增强Hela细胞对DDP的敏感性。
     

Ｔｏｌｌ 样受体９ 在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的：研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9（TLR9）的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hela细胞中TLR9 mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术（FCM）检测CpG-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果①TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用CpG-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。②MTT比色法检测显示, TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50（223．092±3．850）ng／mL。③流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂CpG-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为（15．32±2．46）％,与无CpG-ODN预刺激组[（43．49±2．04）％]相比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR9特异性激动剂CpG-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。     

全反式维甲酸对白血病NB4细胞PRAM蛋白的影响

目的:探讨在NB4细胞增殖过程中PRAM蛋白表达情况,并且用全反式维甲酸（ATRA）进行干扰,观察其对PRAM蛋白的影响。方法:①细胞增殖抑制实验:体外培养NB4细胞共5天,用台盼蓝染色法筛选ATRA有效干预浓度后,选取ATRA(1×10^-6mol/L)为目的干预浓度。②Western blot:ATRA(1×10^-6mol/L)持续干扰NB4细胞1、2、3天后检测PRAM蛋白的相对表达量。结果:①与对照组比较,4种浓度ATRA组细胞与NB4细胞的增殖率呈量效与时效关系;浓度越大,抑制率越高;于培养第4天出现最强抑制。②选取1×10^-6mol/L ATRA干扰NB4细胞共3天,对照组及ATRA组PRAM蛋白的表达在时间上有规律性:第2天表达最强烈。③1×10^-6mol/L ATRA使PRAM蛋白在第2天的相对表达量较对照组低（P<0.05）。④1×10^-6mol/l ATRA使NB4细胞PRAM蛋白在第2天出现最大表达量,同时该组细胞出现生长抑制。结论:ATRA能通过PRAM位点来达到抑制APL增殖分化的目的。     

p21ras在绝经前、后子宫内膜腺癌中的表达分析

目的 :探讨 p2 1 ras在绝经前、后子宫内膜腺癌中的不同表达及意义。方法 :ABC免疫组织化学方法。结果 :子宫内膜腺癌组织中 p2 1 ras阳性表达率为 59.38%,而正常组织仅一例弱阳性 ;绝经后妇女子宫内膜腺癌组织中 p2 1 ras阳性表达率 ( 69.57%)及表达强度明显高于绝经前妇女( P<0 .0 5)。结论 :提示 p2 1 ras有作为子宫内膜腺癌尤其是绝经后子宫内膜腺癌诊断标志物及临床应用的可能性     

NF-κB圈套寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响

目的 探讨NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术（NF-κB decoy ODN ）联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响。 方法 培养人肺癌细胞A549:⑴用脂质体瞬时转染法介导NF-κB全硫代圈套寡核苷酸(decoy ODN)和全硫代错义圈套寡核苷酸(scramble decoy ODN)处理A549 细胞;⑵分为对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组(1 000 ng/mL)和NF-κBdecoy ODN +紫杉醇组,RT-PCR法测COX-2mRNA水平表达;⑶免疫组织化学法测VEGF蛋白表达。 结果 ⑴NF-κB decoy ODN、紫杉醇干预后A549细胞的COX-2 mRNA水平表达下降,各组浓度分别是：0.71、0.44、2.51、0.34μg/μL（F＝7.8,P＜0.05）。⑵NF-κB decoy ODN、紫杉醇干预后A549细胞的VEGF蛋白表达下降,各组细胞阳性率分别是：85%、63%、57%、21%（F＝21,P＜0.05）, 结论 NF-κB decoy ODN 联合紫杉醇可明显抑制肺癌细胞血管生成,该作用可能与COX-2、VEGF 表达相关。