雷公藤内脂醇联合热疗对Hep-2细胞的增殖抑制作用

目的：探讨雷公藤内脂醇(TL)联合热疗对导人喉癌细胞株（Hep-2）的增殖抑制率、细胞凋亡率、及细胞周期增殖各时相的影响,旨在为人喉癌治疗提供理论依据。方法：对数生长期Hep-2细胞随机分为对照组、单纯热疗组、单纯TL组及TL联合热疗组,应用MTT（噻唑蓝）摄入法检测Hep-2细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期各时相细胞百分率变化及细胞凋亡率,电子显微镜观察亚细胞结构改变。结果：单纯热疗组、单纯TL组和TL联合热疗组Hep-2细胞增殖抑制率分别为21.2%、28.5%和54.5%,TL联合热疗组细胞增殖抑制率高于单纯热疗组和单纯TL组（P<0.01）。与对照组比较,单纯热疗组、单纯TL组和TL联合热疗组细胞周期进程发生明显改变,G1期细胞增多（P<0.01）,S期细胞减少（P<0.01）,而G2/M期细胞相对增多（P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.01）;与单纯热疗组、单纯TL组比较,TL联合热疗组上述各项指标变化差异均具有显著性（P<0.01）。电子显微镜观察,单纯热疗组、单纯TL组和TL联合热疗组Hep-2细胞核染色质趋边凝集,线粒体肿胀,可见凋亡小体改变;上述变化TL联合加热疗组轻于单纯热疗组、单纯TL组;对照组未见上述改变。结论：TL联合热疗可提高Hep-2细胞的增殖抑制率、抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

三氧化二砷对人喉癌细胞株增殖抑制作用的探讨

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)制剂对人喉癌细胞株(Hep-2)细胞的诱导分化机制,为喉癌治疗提供理论依据。方法:应用MTT染色法观察As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程变化及凋亡率,相差显微镜观察细胞形态学改变,电子显微镜观察经不同浓度的As2O3作用后Hep-2细胞超微结构改变。结果:As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率成剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡率升高;相差显微镜下实验组细胞帖壁不佳,细胞圆缩,数目减少;电子显微镜下可见线粒体肿胀,有空泡、细胞核染色质趋边凝集,可见凋亡小体。结论:As2O3对Hep-2细胞有显著的增殖抑制作用,可阻止Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

丁酸钠对Hep-2细胞生长、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察丁酸钠(SB)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用,探讨其对细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以MTT法检测0.625～10.000 mmol/L SB对Hep-2细胞生长的抑制作用;以TUNEL法检测1.250～5.000 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞凋亡情况;以琼脂糖凝胶电泳法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞DNA片段;应用流式细胞仪分析1.250 mmol/L、2.500 mmol/L、5.000 mmol/L SB作用24 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;采用免疫组织化学SP法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后细胞抗凋亡蛋白Survivin表达的变化.结果:SB对Hep-2细胞的生长抑制作用具有时间和剂量关系(不同时间组、不同剂量组间比较,P均＜0.01);细胞凋亡指数随SB剂量升高、作用时间延长而增加(P均＜0.01);琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随SB剂量升高而增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期;2.500 mmol/L SB作用72 h,Survivin表达阳性细胞的光密度值由作用前的0.164±0.009下降至0.045±0.006(P＜0.01).结论:SB能有效抑制 Hep-2细胞的生长,其机制可能与抑制细胞Survivin蛋白表达进而诱导细胞凋亡以及参与细胞周期调控有关.     

平阳霉素诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的 探讨平阳霉素(DYM)对体外培养的喉癌细胞凋亡的作用，并研究其作用的量-效关系。方法 取入喉鳞状细胞癌株Hep-2细胞进行细胞培养，PYM作用不同浓度不同时间后，以TUNEL，染色、电镜、流式细胞仪检测凋亡情况。结果 高浓度(100，1000μg/ml)PYM作用下，靶细胞呈典型凋亡改变。低浓度(1，10μg／ml)PYM作用下未见明显凋亡改变。在一定范围内，PYM诱导细胞凋亡作用呈浓度、时间依赖性。结论 PYM可诱导人喉癌Hep-2细胞出现凋亡。PYM诱导细胞凋亡浓度较高，诱导喉癌细胞凋亡可能是PYM化疗作用的重要机制之一。     

超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的 观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用.方法 金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24 h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72 h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况.结果 ①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P＜0.01).②抑制作用呈现时间的依赖性.③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1 μg/ml、72 h培养时抑制率最高,达82.83%.结论 超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长.     

EB1089对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的:探讨EB1089对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:以1,10,100nmol/LEB1089分别作用2,4,6和8d,采用平板克隆形成实验、细胞计数法及MTT法测定EB1089对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,并绘制生长曲线.流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡.结果:平板克隆形成试验及MTT提示,EB1089对HepG2细胞的增殖有显著抑制作用,抑制率为16.9%～74.3%,EB1089的IC50为8.2nmol/L;细胞计数法的结果提示与平板克隆形成试验结果一致.流式细胞仪检测结果显示,10nmol/LEB1089处理HepG2细胞4d,G1期细胞占71.0%,对照组G1期细胞为63.2%,呈降低趋势;处理组与对照组S期及G2期分别占28.9%和36.8%,呈增加趋势,且处理组有凋亡峰出现,凋亡细胞占21.4%.结论:EB1089能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡有关.     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 观察三氧化二砷（AS2O3）对喉癌Hep-2细胞株诱导细胞凋亡的作用和对细胞周期的影响。方法 体外培养的Hep-2细胞与不同浓度的AS2O3作用24、48、72h，通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率，用倒置相差显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变，检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果 As2O3可有效抑制Hep-2细胞的生长，呈时间和浓度依赖性特点。形态学观察发现，As2O3诱导Hep-2细胞凋亡。2μmol/L As2O3作用24h，S期细胞比例增高，72h后，S期细胞明显下降，细胞大量凋亡。AS2O3在低浓度时，阻滞细胞通过S期，高浓度时诱导S期细胞凋亡。结论 AS2O3可诱导Hep-2细胞的凋亡，与细胞周期阻滞有关。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

紫珠果实提取成分对Hep-2细胞株的抑制作用

紫珠属马鞭草科植物,为民间草药。经贵阳医学院中草药教研室鉴定。文献报道紫珠叶中含黄铜、缩合鞣质、中性树脂、糖类、羟基化合物及镁、钙、铁盐,临床常用于止血、止痛、散瘀消肿。2000年3月,我们利用MTT法测定了紫珠果实提取成分对Hep-2细胞株的抑制作用,结果显示所试样品在较高浓度(100mg／L)下对Hep-2细胞株具有很强的抑制作用,为紫珠进一步的药用研究提供了信息。     

多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用

目的:研究多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用。方法:应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法检测和观察分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制。结果:多西紫杉醇和顺铂分别及联合用药,在一定范围内均对骨肉瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且联合用药组作用明显强于单独用药组(抑制率≥59.34%,P<0.05;凋亡率18.31%,P<0.01)。结论:多西紫杉醇和顺铂联合用药比单独用药对骨肉瘤细胞株增殖抑制作用更强。     

氯丙嗪单独及与顺铂联合应用对人宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的:探讨氯丙嗪(CPZ)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:将氯丙嗪、顺铂单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪和顺铂联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05)。二者均可诱导细胞凋亡,联用凋亡率明显增加,并出现G0/G1期细胞阻滞。结论:氯丙嗪可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,且对顺铂有协同作用。     

塞来昔布诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨环氧化酶-2特异抑制剂-塞来昔布对喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及可能机制。方法以不同浓度的塞来昔布处理喉癌Hep-2细胞,以四甲基偶氮唑盐（Mar）法检测对细胞增殖的影响,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察细胞核的形态改变,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax及COX-2的表达,Western blot分析Caspase-3裂解激活。结果MTT结果表明塞来昔布抑制Hep-2细胞的增殖呈时间和浓度依赖;Hoechst33342荧光染色见随塞来昔布处理时间延长,细胞核逐渐出现凝集、碎裂等凋亡表现;流式细胞术检测细胞凋亡率见塞来昔布处理细胞24h,70、100μmol/L组凋亡率分男q为（28．9±2．74）％、（32．7±3．96）％;Western blot分析蛋白表达,见随药物处理浓度增加,COX-2、Bcl-2表达降低,Bax表达增加,随药物处理时间延长Caspase-3出现裂解片段。结论塞来昔布能够有效地抑制Hep-2细胞增殖和诱导Hep-2细胞凋亡。其诱导凋亡作用机制可能与Bax/Bcl-2比值升高,Caspase-3蛋白裂解激活有关。     

稳定高表达ANO1对Hep-2细胞生物学性状的影响

［摘 要］目的：建立外源性ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,并观察其对 Hep-2 细胞生物学性状的影响。方法：设计引物,提取头颈鳞癌患者的临床标本DNA,并以其为模板行PCR,得到ANO1基因序列片段,将ANO1片段插入到PSG-5质粒,转染入Hep-2细胞株,将稳定高表达ANO1的Hep-2细胞株设为实验组,空白质粒转染的Hep-2细胞株设为对照组。并利用Western blotting法和免疫荧光实验检测已转染细胞,观察ANO1的表达情况。利用Boyden小室侵袭实验和黏附实验检测Hep-2细胞生物学性状的变化。结果：成功构建含ANO1片段的pSG-5质粒,Western blotting法检测结果显示,各组均出现目的条带,实验组的相对分子质量为100 000处条带明显较浓。间接免疫荧光实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞内显现出亮绿色荧光,而空白质粒转染的Hep-2细胞内仅有较暗、较浅的绿色荧光。Boyden小室侵袭实验和黏附实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞穿膜细胞百分比和黏附细胞百分比均明显高于对照组,两组结果比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：成功建立了ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,稳定高表达ANO1提高了Hep-2细胞的迁移能力。     

睾酮对喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响

目的研究睾酮对人喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对Hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/L睾酮作用48 h,人喉癌细胞Hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进Hep-2细胞的分裂增殖。睾酮作用前后Hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义。端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义。结论HEP-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌Hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义。     

加热联合紫杉醇对人喉癌细胞Hep-2体外增殖抑制及凋亡的影响

目的 探讨加热(hyperthermia,HT)联合紫杉醇(Taxol)对人喉癌细胞系(Hep-2细胞)体外增殖抑制及凋亡的影响.方法 将Hep-2细胞分为实验组与对照组,实验组用不同浓度(0.1、1.0及10.0μmol/L)的Taxol预处理后联合热疗(39、41及43℃1h)处理不同时间(24、48及72h)后,采用Wright-Gimsa染色法观察Hep-2细胞凋亡的形态学变化;以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,以细胞增殖率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率.结果 加热41℃组细胞增殖率与其他不同温度同剂量组比较均显著降低(P＜0.01);39℃组与对照组37℃组比较差异无统计学意义(P＞0.05);热疗联合Taxol组处理细胞48h后,细胞出现凋亡形态学改变.与热疗和Taxol单药组相比,热疗联合Taxol组对细胞的抑制率显著增强(P＜0.01),其作用呈时间和剂量依赖性;热疗联合Taxol组诱导细胞凋亡率与单药组及单热疗组相比较均增高(P＜0.05);而单药紫杉醇组与单独热疗组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 热疗和Taxol单药体外均可抑制Hep-2细胞增殖并诱导其调亡.热疗和Taxol联合应用对Hep-2细胞体外增殖抑制其诱导凋亡作用显著增强;诱导凋亡可能是细胞增殖抑制的作用机制之一.     

塞来昔布联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的协同作用及其机制

目的: 观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法: 将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫杉醇组(含不同浓度紫杉醇的培养基)和塞来昔布联合紫杉醇组(含不同浓度塞来昔布和不同浓度紫杉醇的培养基)。Hoechst 33258染色观察各组MCF-7细胞凋亡形态;MTT法检测各组MCF-7细胞存活率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达量。结果: Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7凋亡细胞数增多,塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7凋亡细胞最多,并随塞来昔布浓度增加而增加。MTT法检测,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7细胞存活率均随药物作用时间的延长而降低;而在相同时间段内,50mg·L^-1塞来昔布与30μg·L^-1紫杉醇联合应用组MCF-7细胞存活率低于单独使用两药时的细胞存活率(P<0.05)。流式细胞术检测,塞来昔布组细胞阻滞于G₀/G₁期,紫杉醇组细胞阻滞于G₂/M期;与空白对照组比较,塞来昔布联合紫杉醇组细胞周期分布改变最明显,在G₀/G₁期及G₂/M期的细胞比例均有明显升高,S期细胞比例下降。AnnexinⅤ/PI双染,药物刺激细胞6h后,塞来昔布组和紫杉醇组细胞早期凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),塞来昔布联合紫杉醇组细胞早期凋亡率高于其他组(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,塞来昔布组、紫杉醇组和塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7细胞中bcl-2蛋白和p-ERK蛋白表达量均下调,塞来昔布联合紫杉醇组下调最明显;而ERK2蛋白表达量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 塞来昔布和紫杉醇在促乳腺癌MCF-7细胞凋亡方面有协同作用,其机制可能与下调bcl-2和p-ERK蛋白表达水平有关。