抗精子抗体阳性大鼠精子凋亡及机制的研究

目的探讨抗精子抗体（AsAb）阳性人鼠精子凋亡率的变化及其可能的机制。方法建立AsAb阳性人鼠动物模型，HE染色观察人鼠附睾组织形态；采用3’-原位末端DNA标记（TUNEL）技术检测大鼠精子的凋亡率；应用化学比色法测定精了匀浆的MDA含量和总抗氧化能力；应用定磷法测定精予匀浆的Na^＋-K^＋-ATP酶和Ca24ATP酶活性。结果与正常组相比，AsAb阳性组大鼠精子凋亡率和MDA含量显著增加（P〈0．01：P〈0．01）；总抗氧化能力、Na^＋-K^＋-ATP酶和Ca^2＋-ATP酶活性显著降低（P〈0．01；P〈0．01；P〈0．05）。结论AsAb阳性大鼠精子凋亡率增加；可能与氧自由基含量增多、Na^＋K^＋-ATP酶和Ca^2＋-ATP酶活性降低有关。     

七氟烷后处理减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤与黄嘌呤氧化酶

目的：探讨七氟烷后处理减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注（I／R）损伤中黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）含量变化的意义。方法：40只SD大鼠,随机入假手术（Sham）组、缺血-再灌注（I／R）组、七氟烷后处理（PostS）组．IR＋别嘌醇（Adenock A,I／R＋A）组。各10只。大脑中动脉线栓（MCAO）法建立大鼠局灶性脑缺血损伤模型。观察缺血前、再灌注后各组血清XO．超氧化物岐化酶（SOD）活性．丙二醛（MDA）含量及脑组织Na^＋-K^＋-ATP酶（Na^＋-K^＋-ATPase）活性变化。实验结束后,处死大鼠。取脑组织经HE．TTC染色,观察各组脑组织梗死体积。结果：再灌注24h末,Sham组血清XO活性,MDA含量低于其它三组（p〈0．05）。SOD及脑组织Na^＋-K^＋-ATPase活性高于其它三组（p〈0．05）：I／R组与Posts组、I／R＋A组比较．XO活性升高（p〈0．05）,MDA含量增加（p〈0．05）,SOD、Na＋^-K^＋-ATPase活性降低（p〈0．05）;S组SOD、XO以及Na^＋-K^＋-ATPase活性均高于IR＋A组（p〈0．05）．MDA含量低于IR＋A组（p〈0．05）。结论：下调XO活性。可能是七氟烷后处理有效减轻大鼠脑缺血-再灌注损伤重要途径之一。     

妊高征大鼠颈交感神经干离断对胎鼠脑的保护作用

目的探讨妊高征（PIH）大鼠颈交感神经干离断（TCST）对胎鼠脑的保护作用。方法妊娠Wistar大鼠32只，随机分为4组，每组8只，对照组（A组）、PIH组（B组）、TCST组（C组）和假手术组（D组）。B组自孕14d开始皮下注射工广硝基精氨酸甲酯（L-NAME）12．5mg／100g，每天平均分两次注射，至孕20d，A组给予等量生理盐水；C组孕14d行右TCST，余同B组；D组孕14d行右颈交感神经干分离，但不离断，余同B组。各组于孕21d剖宫取仔，观察胎鼠脑组织超微结构，测定脑组织ATP、ADP、AMP的含量、腺苷酸池（ATP＋ADP＋AMP）及神经元细胞膜Na^＋-K^＋-ATP限酶及Ca^2＋-ATP酶活性。结果A、C组脑组织超微结构基本正常，B、D组脑组织超微结构严重受损。与A组比较。B、D组脑组织ATP、ADP、AMP的含量、腺苷酸池及神经元细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶及Ca^2＋-ATP酶的活性均降低；与B组比较，C组脑组织ATP、ADP、AMP的含量、腺苷酸池及神经元细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶及Ca^2＋-ATP酶的活性均升高（P〈0．01）。结论PIH大鼠TCST对胎鼠脑有一定的保护作用，可能与改善脑细胞的能量代谢及相关的离子泵功能有关。     

热处理对回收血中肿瘤株细胞的杀伤作用和对红细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响

目的探讨不同温度热处理对回收血中肿瘤细胞的杀伤作用和对红细胞Na^＋-K^＋-ATP酶活性的影响。方法将培养好的SGC-170胃癌细胞株和LOVO大肠癌细胞株分别加入浓缩红细胞中，采用水浴法加温处理。根据加温温度不同分为5组：37℃组、42℃组、43℃组、45℃组、47℃组，加热时间均为40min。采用密度梯度离心法分离肿瘤细胞，台盼蓝染色计数存活肿瘤细胞；测定肿瘤细胞的克隆形成、DNABrdUrd标记情况，测定红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性。结果与37℃组比较，42℃-47℃组存活肿瘤细胞数均减少，肿瘤细胞克隆形成率减少，肿瘤细胞DNA BrdUrd标记率降低，43℃-47℃组红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性降低（P〈0．01），42℃组红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论42～47℃温度加热40min不能完全杀灭肿瘤细胞，43—47℃温度加热40min对红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性还有明显抑制作用。     

自体外周血造血干细胞移植对弥漫性大B细胞淋巴瘤患者PD-1、B7-H1表达及T细胞亚群的影响

目的研究自体外周血造血干细胞移植（auto-PBSCT）对弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者程序性死亡因子-1（PD-1）及其配体B7同系物1（B7-H1）表达及T细胞亚群的影响。方法选择浙江大学医学院附属第-医院血液科和温州市中心医院血液科2009年7月至2012年6月接受auto-PBSCT的27例DLBCL患者作为观察组,选择25例同期参加体检的健康人群作为对照组。流式细胞仪检测两组PD-1、B7-H1表达,并分析各组T细胞亚群。结果观察组移植后3个月PD-1阳性表达率低于初次诊断时[（4．6±1．0）％和（12．5±2．1）％],差异具有统计学意义（t=4．47,P〈0．05）。观察组两次检测结果均高于对照组,差异具有统计学意义（t=22．70和25．11,P均〈0．05）。观察组移植后3个月B7-H1阳性表达率低于初次诊断时[（5．7±1．4）％和（16．3±1．7）％],差异具有统计学意义（t=6．78,P〈0．05）。观察组两次B7-H1检测结果均高于对照组（t=25．15和38．06,P均〈0．05）。观察组移植后3个月CD3±T细胞百分比高于初次诊断时[（57±7）％和（44±4）％],差异具有统计学意义（t=6．29,P〈0．05）。观察组两次CD3±T细胞百分比检测结果均低于对照组（t=5．69和7．36,P均〈0．05）。观察组移植后3个月CD4＋T细胞百分比低于初次诊断时[（11±4）％和（29±3）％],差异具有统计学意义（t=5．47,P〈0．05）。观察组两次CD4＋T细胞百分比检测结果均低于对照组,差异具有统计学意义（t=4．61和7．11,P均〈0．05）。观察组移植后3个月CD8±T细胞百分比高于初次诊断时[（32．5±2．7）％和（16．4±3．2）％],差异具有统计学意义（t=9．73,P〈0．05）。与对照组相比,观察组初次诊断后CD8±T细胞百分比较低,而移植后3个月较高（t=10．62和14．71,P均〈0．05）。观察组初次诊断后CD4＋／CD8±比值高于移植后3个月（1．8±0．4和0．4±0．1）,差异具有统计学意义（t=8．57,P〈0．05）。移植后3个月CD4＋／CD8±比值明显低于对照组,差异具有统计学意义（t=11．73,P〈0．05）。结论DLBCL患者存在细胞免疫功能紊乱,auto-PBSCT可以影响DLBCL患者的PD-1、B7-H1表达及T细胞亚群百分比,在-定程度上纠正细胞免疫功能。     

连续硬膜外阻滞对PIH大鼠FAS/FASL系统及CD4+、CD8+淋巴细胞免疫功能的影响

目的检测连续硬膜外阻滞（LCEB）对妊娠高血压综合征（PIH）大鼠子宫、胎盘FAS／FASL及CD4^＋、CD8^＋细胞的影响,从蛋白和分子水平探讨LCEB对PIH大鼠防治作用的免疫学机制。方法健康雌性Wister大鼠,建立PIH大鼠模型,在其妊娠的第14天随机分四组,每组10只。A组：每日皮下注射L-NAME50mg;B组：行硬膜外腔置管术,不给药,余同A组;C组：行硬膜外腔置管术,每日注入0．125％布比卡因25μl,余同A组;D组：每日皮下注射0．5ml生理盐水。检测子宫、胎盘组织CD4、CD8蛋白及FAS／FAsL mRNA的表达。结果各组在子宫、胎盘CD4与CD8蛋白均有阳性表达;C组与A、B、D组相比CD4的灰度值（AGV）、积分光密度（IOD）、阳性面积百分率（PCP）差异无统计学意义;C组与A、B组相比,CD8的AGV明显降低（P〈0．05）,IOD、PCP显著增高（P〈0．05）。C组与A、B组相比,FAS mRNA、FASL mRNA的AGV明显降低（P〈0．05）,IOD、PCP显著增高（P〈0．05）;C组与D组相比差异无统计学意义。结论LCEB可以增强PIH大鼠CD8^＋T细胞及FAS／FASL的表达,增强母胎免疫耐受能力。     

银芷肛肠熏洗剂对大鼠痔相近模型iNOS、VEGF、CD68表达的影响

为观察银芷肛肠熏洗剂对大鼠痔相近模型诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血管内皮生长因子（VEGF）、CD68表达的影响,本实验采用肛门外周注射冰醋酸法建立大鼠痔相近模型,造模成功后将50只大鼠随机分为空白对照组（A组）、马应龙金玄痔科熏洗散对照组（B组）和银芷肛肠熏洗剂低剂量组（C组）、中剂量组（D组）、高剂量组（E组）,每组10只,连续给予相应药物7d,于第8天处死大鼠,通过免疫组化染色法评估大鼠痔相近模型创面组织中iNOS、VEGF、CD68水平。结果显示,（1）iNOS：B～E组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．01;D、E组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞率评分明显低于B、C组,P〈0．01;而B、C组比较差异无统计学意义,P〉0．05。（2）VEGF：B～E组大鼠创面组织中VEGF阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．05或P〈0．01;D、E组大鼠创面组织中VEGF阳性细胞率评分均低于B、C组,P〈0．01;而B、C组比较差异无统计学意义,P〉0．05。（3）CD68：B～E组大鼠创面组织中CD68阳性细胞率评分明显低于A组,P〈0．05或P〈0．01;C～E组大鼠创面组织中CD68阳性细胞率评分均明显低于B组,P〈0．05或P〈0．01。结果表明,银芷肛肠熏洗剂能明显抑制大鼠痔相近模型iNOS、VEGF、CD68的表达,其对痔的治疗作用可能与抑制iNOS、VEGF、CD68表达有关。     

硬膜外阻滞对妊高征大鼠子宫、胎盘组织CD4+及CD8+T淋巴细胞的影响

目的观察硬膜外阻滞对妊高征（PIH）大鼠子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响。方法健康雌性Wistar大鼠,鼠龄3～4个月,体重230～300g,40只孕鼠于孕14d时随机分为4组（n=10）：对照组（A组）、PIH组（B组）、假手术组（C组）、治疗组（D组）。B组、C组、D组采用皮下注射甲基L-精氨酸甲酯的方法制备PIH模型,25mg/次,2次/d,连续7d；A组相同时点给予等容量生理盐水0．25ml；C组行硬膜外导管置入术；D组行硬膜外导管置入术,每天由导管注入0．125%布比卡因50μl,连续7d。孕22d时处死大鼠,测定子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋mRNA、CD8^＋mRNA的表达水平。结果各组CD4^＋表达和CD4^＋mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）；与A组比较,B组、C组CD8^＋表达降低（P＜0．05）；与B组和C组比较,D组CD8^＋表达和CD8^＋mRNA表达升高（P＜0．05）。结论硬膜外阻滞可增加PIH大鼠子宫、胎盘组织CD8^＋T淋巴细胞。     

可诱导性共刺激分子单抗联合细胞毒T淋巴细胞4Ig在大鼠胰腺移植中的作用

目的 探讨可诱导性共刺激分子（ICOS）单抗、细胞毒T淋巴细胞4ig（CTLA41g）阻断共刺激通路对于异基因大鼠胰腺移植的作用及其机制。方法 建立胰腺移植模型，分A组（对照组），B组（CTLA4Ig组），C组（抗ICOS单抗组），D组（联合CTLA4Ig和抗ICOS单抗组）。术后1、4,7d监测血糖，第7天取胰腺做苏木素-伊红染色，脾脏做流式细胞检测CD3^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞。结果 与A组比较：B、C、D组排斥反应较A组明显减弱，显著延长了移植物的存活时间。CD3^＋CD8^＋T细胞计数B、C、D与A组比较均有减少，差异有统计学意义（P〈0．01）。CD4^＋T细胞B、D与A组的差异有统计学意义（P〈0．05）。CD4^＋CD25^＋T细胞各组间逐渐升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 抗ICOS单抗和CTLA4Ig能有效地抑制大鼠胰腺移植排斥反应，延长移植物存活时间，且联合应用比单一应用更有效。其可能机制为诱导了CD4^＋CD25^＋T细胞的产生。     

丙泊酚对大鼠脑缺血-再灌注损伤后海马线粒体ATP含量和ATP酶活性的影响

目的观察丙泊酚对大鼠脑缺血-再灌注损伤后海马线粒体三磷酸腺苷（ATP）含量、ATP酶活性、脂质过氧化和超微结构的影响.方法采用大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型.40只Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血-再灌注对照组（B组）和缺血-再灌注丙泊酚预处理组,后者按丙泊酚用量又分为50 mg/kg（C1组）、100 mg/kg（C2组）和150 mg/kg（C3组）三个亚组.观察全脑缺血10 min再灌注60 min时海马线粒体的超微结构、ATP和丙二醛（MDA）的含量及Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）和谷光甘肽（GSH）活性的变化.结果与B组比较,丙泊酚各处理组海马线粒体的ATP含量、Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶、SOD和GSH的活性均有不同程度的增高（P〈0.05或0.01）,MDA含量有不同程度的降低（P〈0.05或0.01）,线粒体超微结构的损伤程度亦明显减轻.结论丙泊酚对脑缺血-再灌注损伤的保护效应可能与其抑制线粒体脂质过氧化反应,减轻线粒体的损伤,促进线粒体ATP含量和ATP酶活性的恢复有关.     

利用RNA干扰诱导产生的CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性

目的 探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8+ CD28-抑制性T淋巴细胞(Ts细胞)的免疫学特性.方法 取SD大鼠骨髓,培养分离树突状细胞(DC),设计、合成主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类小片段干扰RNA(siRNA),以MHC Ⅰ siRNA转染DC.先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCI siRNA的DC,然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8+T淋巴细胞共同培养,通过磁珠法分离出Ts细胞.分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞(反应细胞)和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞(刺激细胞)组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞,检测反应细胞增殖情况;分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白(OVA)刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞,然后再按不同比例加入Ts细胞,检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况;在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2(rrIL-2),观察IL-2对Ts细胞功能的影响;采用实时定量聚合酶链反应(PCR)测定Ts细胞中转化生长因子β(TGF-β和γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达,流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达.结果 Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之问的混合淋巴细胞反应(MLR)具有抑制作用,但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用.在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后,SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加(P＞0.05).与CD8+CD28+T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞比较,Ts细胞的TGF-β和IFN-γ mRNA的表达量明显升高(P＜0.01,P＜0.05),而CD25的表达量明显降低(P＜0.05).结论 采用经MHC I siRNA干扰的DC能够诱导CD8+T淋巴细胞产生CD8+ CD28-Ts细胞;Ts细胞在体外具有免疫抑制特性,其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转,且其免疫调节作用具有抗原特异性.     

肾癌根治术患者手术前后CD8+CD28-T细胞表达及临床意义

【摘要】〓目的〓探讨肾癌根治术患者手术前后CD8+CD28-T细胞表达及临床意义。方法〓收集52例接受根治术的肾癌患者作为观察对象,采用流式细胞术检测手术前后外周血CD8+CD28-T细胞、白介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)含量;分析三者含量与肿瘤分期的相关性,并以肾错构瘤患者及正常人作为对照。结果〓肾癌患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均显著高于另外两组,但肾错构瘤患者与正常人之间均无统计学差异(P<0.05);术前III期患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1显著高于I及II期(P<0.05);术后各期肾癌患者CD8+CD28-T细胞及TGF-β1含量均显著低于术前(P<0.05),但IL-10却与术前无统计学差异;术后III期患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1显著高于Ⅰ及Ⅱ期患者(P<0.05),但术前及术后I及II期患者上述三项指标均无统计学差异。相关性分析显示CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1与分期均呈显著正相关性(P<0.05),其相关程度由大至小依次为CD8+CD28-T细胞>TGF-β1>IL-10。结论〓CD8+CD28-T细胞及其细胞因子表达含量增多可能是肾癌的一个新免疫机制,前者可在一定程度上鉴别肾癌与良性肿瘤,且可以评价手术效果。     

CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA及可溶性白细胞介素2受体检测在肾移植中的意义

目的 观察肾移植患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平及其表面特异性标志物Foxp3和可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）的变化，探讨其在诊断移植肾急性排斥反应中的作用和价值。 方法 选取42例维持性血液透析接受同种异体肾移植治疗的患者及30例健康体检对照者。在患者移植前、移植后1、2、4、8周或发生排斥反应时，以流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平；荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA表达；双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISB）检测血浆中sIL-2R水平。 结果 (1)移植后第1、2、4、8周急性排斥反应组CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA水平明显低于同期未发生排斥的肾功能稳定组，而sIL-2R水平却显著高于肾功能稳定组。(2)血液透析患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞[(9.22±3.53)%]、Foxp3 mRNA[（0.82±0.36）×10-3]及sIL-2R[（856.30±108.24） U/ml]水平与健康对照组[分别为(6.09±1.99)%、(0.50±0.28)×10-3、(247.35±11.24) U/ml]比较，差异均有统计学意义(P < 0.01)。(3)肾移植后随着肾功能的恢复，外周血CD4+CD25+调节性T细胞[(16.53±4.14)%]、Foxp3 mRNA[(4.97±1.94)×10-3]显著升高(P < 0.01)，而sIL-2R[（463.72±31.23）U/ml]水平明显降低(P < 0.01)。(4)当发生急性排斥反应时，CD4+CD25+调节性T细胞[(12.18±2.86)%]、Foxp3 mRNA[(3.15±1.22)×10-3]显著降低(P < 0.01)，而sIL-2R[(748.36±115.41) U/ml]水平明显升高(P < 0.01)，并且这些变化早于Scr的变化。(5)患者移植前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平均呈正相关（分别为r ＝ 0.904、0.932，P < 0.01），但与sIL-2R水平无相关。 结论 外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA及sIL-2R水平的测定均可以作为肾移植患者移植后发生急性排斥反应的早期预测指标，并可判断预后。     

微波消融联合树突状细胞瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 观察微波消融联合树突状细胞(DC)瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 建立BALB/C小鼠皮下骨髓瘤模型,分为对照组、微波消融组、微波消融联合不成熟DC组、微波消融联合成熟DC组,分别于微波消融后第1、3、5、7、9及11天采用流式细胞仪检测各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群.结果 对照组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+值逐渐下降(P<0.05);微波消融组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+无明显改变(P>0.05);微波消融联合不成熟DC组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+在术后第3、5、7天明显减低(P<0.05),第9、11天恢复;微波消融联合成熟DC组小鼠CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+则在术后第3、5、7天明显增高(P<0.05),第9、11天下降.结论 微波消融联合成熟DC在一定时间内(约1周)能够增强实验小鼠的抗肿瘤免疫反应.     

CD8+CD28-T细胞在脑疝患者的动态变化与临床意义

【摘要】 目的 探讨脑疝患者外周血CD8+CD28-T细胞的动态变化与临床意义。方法〓收集36例脑疝组(A组)患者外周血,以41例未出现脑疝的重型颅脑损伤患者(B组)及32例健康人(C组)作为对照,采用流式细胞术检测外周血CD8+CD28-T细胞及其胞内转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素10(IL-10)百分含量。分别在伤后3 h、6 h及12 h观察A及B组患者外周血CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10变化。结果〓三组CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10总体差异均有显著性(P < 0.05),但B组与C组无统计学差异,而A组上述三者均显著低于另外B及C组(P < 0.05)。B组患者在伤后3 h、6 h及12 h的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10差异均无统计学意义|A组患者3 h、6 h及12 h的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10均呈进行性下降,表现为任意两个时间点的差异均有统计学意义(P < 0.05),且均显著低于B组(P < 0.05)。结论〓CD8+CD28-T细胞显著下降是脑疝患者的一个重要细胞免疫学特征,其伤后12h内进行性下降与病情进展密切相关。     

1-甲基色氨酸对胰腺癌荷瘤鼠中调节性T细胞数量变化的影响

目的 观察1-甲基色氨酸(1-MT)对胰腺癌荷瘤鼠中调节性T细胞(Treg)数量变化的影响,比较树突状细胞(DC)疫苗与1-MT联合应用前后抗肿瘤作用的强弱.方法 建立小鼠胰腺癌模型;利用流式细胞术检测荷瘤鼠应用1-MT前后肿瘤组织周围引流淋巴结(TDLNs)及脾脏中CD4~+ CD25~+T细胞占CD4~+T比例;荧光定量聚合酶链反应(PCR)测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平;利用肿瘤细胞裂解物冲击DC制备DC疫苗,并根据是否与1-MT联合应用分组(各组均为n=8);观测各组肿瘤体积的差异.结果 应用1-MT后,荷瘤鼠CD4~+ CD25~+ T细胞占CD~+T细胞的比例明显低于未应用组(TDLNs)分别为(16.01±2.21)%和(25.00±2.16)%(P<0.05);脾脏分别为(13.11±1.93)%和(22.14±2.33)%(P<0.05,P<0.01);应用1-MT组Foxp3 mRNA表达水平显著低于未应用组,应用1-MT组相对表达值:TDLNs0.947±0.216、脾细胞1.198±0.347,而未应用组分别为:1.927±0.256、1.798±0.237(P<0.05);1-MT+DC疫苗组肿瘤生长显著受到抑制,第36天肿瘤体积为(789.0±111.0)mm~3;显著小于DC疫苗组、1-MT组及对照组,肿瘤体积分别为:(1768.0±251.3)、(1854.0±192.1)、(1899.0±201.2)mm~3(P<0.01).结论 1-MT可以有效抑制胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结及脾脏CD4~+ CD25~+ Treg细胞的数量增加,从而增强DC疫苗抗肿瘤作用.     

The protective effect of CD8+CD28- T suppressor cells on the acute rejection responses in rat liver transplantation

Regulatory T cells (Tr) or T-suppressor cells (Ts), which include CD4+CD25+ T cells and CD8+CD28- T cells respectively, have been shown to be essential for the induction and maintenance of immune tolerance. We have investigated the effect of CD8+CD28- Ts and CD4+CD25+ Tr on acute rejection responses in rat liver transplantation (OLT). METHODS: CD8+CD28- Ts/CD4+CD25+ Tr were obtained from inbred and na?ve rats that show spontaneous tolerance to OLT. Adoptive transfers were performed in acute rejection models of various strain combinations with survival times observed to evaluate suppressive effects. Donor-specific blood transfusion (DST) was used to induce CD8+CD28- Ts in na?ve rats, which were assayed in vitro using carboxyfluorescein diacetate succinimidyl easter-labeled one-way mixed lymphocyte reactions. Secondary adoptive transfers of DST-induced CD8+CD28- Ts were also performed in an acute OLT rejection model. RESULTS: CD8+CD28- Ts from tolerant OLT model rats possessed immunosuppressive activity in allogeneic recipients; adoptive transfers of these cells alleviated the acute rejection responses. However, CD4+CD25+ Tr derived from tolerant or na?ve rats failed to do so. In vitro DST-induced CD8+CD28- Ts inhibited alloantigen T-cell responses in na?ve syngeneic rats in an antigen-specific manner. Secondary adoptive transfer of DST-induced CD8+CD28-Ts further reduced acute rejection but not chronic rejection responses. CONCLUSIONS: CD8+CD28- Ts cells protected allogeneic recipients from acute rejection in rat OLT. Furthermore, this activity was not present in CD4+CD25+Tr. DST was observed to be an effective method to generate functional CD8+CD28-Ts in na?ve rats.     

脾切除对心脏移植大鼠外周血淋巴细胞凋亡及调节性T淋巴细胞的影响

目的 探讨脾切除对同种异体心脏移植大鼠外周血淋巴细胞凋亡及调节性T淋巴细胞的影响.方法 以Wistar大鼠为供者、SD大鼠为受者,进行腹部异位心脏移植,同时切除受者的脾脏(心脏移植切脾组),并以不切脾者为对照(心脏移植对照组),另设不行任何处理的对照组和单纯切脾的单纯切脾组.术后第1、3、5、7天.取各组受者的移植心脏和外周血,观察移植心脏的组织学变化和细胞超微结构改变情况,以流式细胞仪检测外周血淋巴细胞的凋亡率及CD4+ CD25+ T淋巴细胞的变化,逆转录聚合酶链反应检测CD4+ CD25+ T淋巴细胞上Foxp3 mRNA的表达情况,记录移植心脏的存活时间.结果 心脏移植对照组移植心脏存活时间为(7.47±2.24)d,心脏移植切脾组移植心脏存活时间为(17.63±4.54)d,二者间的差异有统计学意义(P<0.05).心脏移植对照组的移植心脏肿胀,质硬,色暗,间质水肿、出血,弥漫性炎症细胞浸润,大量心肌细胞坏死、溶解,横纹不清;心脏移植切脾组的移植心脏质软,色红,局部灰白,外膜下以及细胞间局灶性水肿,炎症细胞浸润,心肌细胞结构完整,横纹清晰;心脏移植切脾组的细胞超微结构改变轻于心脏移植对照组.心脏移植切脾组术后第5天和第7天的淋巴细胞凋亡率分别为(7.62±2.15)%和(9.41±3.82)%,明显高于心脏移植对照组(P<0.05,P<0.05).心脏移植切脾组术后第3、5、7天时的CD4+ CD25+ T淋巴细胞明显多于心脏移植对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),其Foxp3 mRNA的表达也较心脏移植对照组明显上调.结论 脾切除使心脏移植大鼠外周血淋巴细胞凋亡率增加,调节性T淋巴细胞增多,其Foxp3 mRNA表达上调,这些变化与移植心脏病理改变呈负相关.     

Observational support for an immunoregulatory role of CD3+CD4+CD25+IFN-gamma+ blood lymphocytes in kidney transplant recipients with good long-term graft outcome.

There is evidence that interferon-gamma (IFN-gamma)-dependent interactions of dendritic cell (DC), T regulatory (Treg), and T suppressor (Ts) subpopulations contribute to allograft acceptance. We measured DC subsets, CD3+CD4+CD25+ (Treg phenotype) and CD3+CD8+CD28(-) (Ts phenotype) peripheral blood lymphocytes (PBL) expressing Foxp3, Th1 or Th2 cytokines, peripheral T- and B-cell counts, and plasma cytokines in 33 kidney transplant recipients with a serum creatinine of < or =1.8 mg/dl and 32 recipients with a serum creatinine of > or =2.0 mg/dl more than 100 days post-transplant. Cell subsets were measured in whole blood using four-color flow cytometry. Patients with increased creatinine had less frequently detectable CD3+CD4+CD25+IFN-gamma+ PBL than patients with good graft function (P = 0.017). In patients with good graft function, CD3+CD4+CD25+IFN-gamma+ PBL were associated with high Foxp3+, IL-2+, IL-12+, IL-4+, and IL-10+ CD3+CD4+CD25+ T PBL (P < 0.001), low CD3+CD8+CD28(-)Foxp3+ (P = 0.002), CD3+CD4+DR+ (P = 0.002), CD3+CD8+DR+ T (P = 0.005) and CD19+ B PBL (P = 0.005), and low lineage(-)HLA-DR+CD11c+CD123(-) DC1 (P = 0.006). Patients with impaired graft function did not show these associations. Additional flow cytometric analysis confirmed strong co-expression of IFN-gamma and Foxp3 by CD4+CD25+ PBL particularly in patients with good graft function. Our data support an immunoregulatory role of CD3+CD4+CD25+Foxp3+IFN-gamma+ cells in a subgroup of transplant recipients with good graft acceptance.     

西罗莫司预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的 探讨西罗莫司(SRL)预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 将SD大鼠随机分为4组,每组12只.假手术对照组:开腹后仅用生理盐水纱布覆盖切口60min,关腹;假手术SRL组:手术方式同假手术对照组;实验对照组:开腹后夹闭肝门静脉左支、肝动脉左支及左肝管,60 min后开放血管;实验SRL组:手术方式同实验对照组.两SRL组大鼠术前2周开始给予SRL 2 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,术前6 h加用1次.而两对照组同期仅给予等体积无菌生理盐水灌胃.术后24 h分别采集各组大鼠的血液和肝组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,光镜下观察肝组织的病理学变化,采用流式细胞术检测肝组织中CD4~+ CD25~+ T淋巴细胞占单个核细胞的比例.采用实时聚合酶链反应检测肝组织中Foxp3 mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清巾转化生长因子-β(TGF-β)和白细胞介素10(IL-10)的含量.结果 假手术对照组和假手术SRL组血清ALT和AST均处于较低水平,而实验SRL组和实验对照组明显升高,且实验SRL组低于实验对照组(P<0.05).假手术对照组和假手术SRL组肝组织结构正常,实验对照组可见明显的片状坏死,实验SRL组肝小叶结构基本完整,未见明显细胞坏死.假手术对照组、假手术SRL组、实验对照组和实验SRL组CD4~+ CD25~+ T淋巴细胞占单个核细胞的比例分别为(6.12±1.87)%、(22.36±6.75)%、(4.53±1.02)%和(13.29±3.16)%.假手术SRL组Foxp3 mRNA的相对表达量以及血清中TGF-β和IL-10的含量明显高于假手术对照组(P<0.05),实验SRL组明显高于实验对照组(P<0.05).结论 SRL可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与SRL诱导体内CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ 调节性T淋巴细胞的分化以及增加TGF-β和IL-10的分泌抑制炎症反应有关.