尤瑞克林对大鼠缺血-再灌注后缓激肽受体B1和B2表达的影响

目的观察不同剂量尤瑞克林对大脑中动脉闭塞(MCAO)的缺血-再灌注(I/R) SD大鼠缓激肽受体B1(B1R)、缓激肽受体B2(B2R)表达的影响。方法应用改良后Zea Longa线栓方法建立SD大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h时拔栓模拟缺血-再灌注,将制备成功的25只SD大鼠按随机抽样法分为假手术组、I/R模型组(I/R+等渗盐水组)、尤瑞克林低剂量治疗组(I/R+LDP组)、尤瑞克林中等剂量治疗组(I/R+MDP组)、尤瑞克林高剂量治疗组(I/R+HDP组),每组5只,术后30 min首次给予尤瑞克林(I/R+LDP组:3. 50×10~(-3)PNAU/kg; I/R+MDP组:8. 75×10~(-3)PNAU/kg; I/R+HDP组:17. 50×10~(-3)PNAU/kg)或等渗盐水尾静脉注射,连续注射7 d、每日定时注射1次,7 d后取材,运用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测梗死灶边缘区域B1R、B2R的mRNA相对表达水平,血管性血友病因子(v WF)免疫荧光测定梗死边界区域微血管密度。结果 (1) B1R mRNA表达:与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组B1R的mRNA表达水平均上调[(0. 34±0. 05)、(0. 35±0. 04)、(0. 47±0. 03)比(0. 23±0. 05),均P 0. 05];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组B1 R的mRNA表达水平均上调(均P 0. 05)。(2) B2R mRNA表达:与假手术组比较,I/R+等渗盐水组B2R的mRNA表达水平上调[(0. 33±0. 01)比(0. 23±0. 02),P 0. 05]。与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组B2R的mRNA表达水平均上调[分别为(0. 49±0. 02)、(0. 52±0. 04)、(0. 71±0. 03),均P 0. 05];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组B2 R的mRNA表达水平均上调(均P 0. 05)。(3)微血管密度:与假手术组比较,I/R+等渗盐水组的微血管计数明显增多[(169±6)比(74±12),P 0. 01];与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组的微血管计数均明显增多[分别为(240±9)、(252±9)、(349±17),均P 0. 01];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组微血管计数均明显增多(均P 0. 01)。结论一定剂量的尤瑞克林上调MCAO大鼠B1R、B2R表达,发挥促血管再生的作用,且高剂量的尤瑞克林对血管新生作用效果更为明显。     

缺血预处理通过减轻内质网应激保护全脑缺血大鼠

目的 探讨抑制内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用.方法 120只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组、全脑缺血组和缺血预处理组(缺血预处理3min,2d后全脑缺血15 min),设1、3和7d共3个时间点.应用Sugawara法观察大鼠行为学变化,TUNEL染色观察皮质神经元凋亡情况,免疫荧光染色和蛋白质印迹分析检测ERS相关蛋白CHOP、GRP78和胱天蛋白酶-12表达情况.结果 神经行为学评分显示,假手术组无神经功能缺损,全脑缺血组和缺血预处理组均出现明显的神经功能缺损,而且随着时间推移出现逐步改善,但全脑缺血组在模型制作后各时间点的神经功能评分均显著性低于缺血预处理组:1d时:(11.00±0.63)分对(14.33±0.33)分(t=21.74,P=0.001);3d时:(12.17±0.31)分对(15.17±0.48)分(t=27.93,P=0.000);7d时:(14.67±0.49)分对(16.33±0.33)分(t=7.81,P=0.020).TUNEL染色显示,缺血后7 d时,假手术组、全脑缺血组和缺血预处理组每mm2TUNEL染色阳性细胞计数分别为(4.83±1.85)个、(395.67 ±43.43)个和(146.17±27.38)个(F=23.62,P=0.001),缺血预处理组显著性低于全脑缺血组(P=0.001).免疫荧光染色显示,缺血后7d时,缺血预处理组CHOP [(26.50 ± 3.89)个对(82.33±4.25)个;P=0.000]、GRP78[(15.00±2.02)对(35.67±2.99)个;P=0.000]和胱天蛋白酶-12[(22.33 ±2.76)个对(66.50±7.25)个;P=0.000]阳性细胞数量均显著性少于全脑缺血组.蛋白质印迹法显示,缺血后7d时,缺血预处理组CHOP[(1.22±0.38)对(3.22 ±0.51);t=24.50,P=0.001]、GRP78[(1.78±0.45)对(3.16±0.76);t=14.29,P=0.005]和胱天蛋白酶-12[(2.89 ±0.53)对(5.96±0.67);t =77.73;P =0.000]表达显著性低于全脑缺血组.结论 缺血预处理对第2次致死性缺血表现出神经保护作用,其机制可能与ERS减轻,ERS相关蛋白表达下调有关.     

人组织激肽释放酶基因转移对球囊拉伤后大鼠颈总动脉内膜的影响

目的 探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶1(Ad-hKLK1)基因转移对球囊拉伤后的自发性高血压大鼠(SHR)颈动脉新生内膜增生的影响及其机制.方法 取SHR,雄性,采用球囊拉伤法建立大鼠颈动脉再狭窄模型,将存活动物随机分为4组,即假手术组(n=6)、单纯拉伤组(n=8)、拉伤+注射对照病毒组(n=8)、拉伤+注射Ad-hKLK1病毒组(n=8).4周后处死大鼠,测定各实验组再狭窄动脉内膜形态学相关指标.RT-PCR法检测缓激肽受体(B1R和B2R)表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期素激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达.结果 拉伤+Ad-hKLK1组大鼠颈总动脉的壁腔面积比W/L明显低于单纯拉伤组(1.056±0.149比1.641±0.194,P<0.001),抑制率达35.6%,内膜/中膜面积比值显著小于单纯拉伤组(0.77±0.09比1.26±0.051,P<0.01),抑制率达38.8%(P<0.001).拉伤+Ad-hKLK1组的周期抑制蛋白p27Kip1和p21Cip1表达明显高于单纯拉伤组(0.55±0.05比0.31±0.06,P<0.001和0.47±0.06比0.26±0.05,P<0.001).球囊拉伤后颈动脉的缓激肽B2R的mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),而各组间的缓激肽B1R的mRNA表达差异无统计学意义.结论 hKLK1基因转移可减轻SHR颈动脉球囊损伤后的新生血管内膜形成,注射外源性人组织激肽释放酶基因可上调缓激肽B2R mRNA表达和p27Kip1、p21Cip1的蛋白表达.     

自发性高血压大鼠脑出血急性期中枢和外周肾上腺素能受体表达与血压调控的相关性研究

目的 观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)脑出血后血压变化以及中枢(脑组织)-肾上腺素能受体(adrenergic receptor,AR)和外周(肾组织)α1A-AR的表达,探讨高血压脑出血急性期α1A-AR和α2A-AR与血压调控的相关性.方法 30只6月龄雄性SHR,随机分为假手术组和脑出血1 d、3 d、7 d和14 d组,每组6只.尾袖法测定血压;尾壳核注入Ⅳ型胶原酶建立脑出血模型;逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学染色法检测α2A-AR和α2A-AR mRNA和蛋白表达.结果 脑出血后1 d时血压为(195.4 ±8.39)mm Hg,显著高于出血前的(177.8±8.69)mm Hg(P=0.00)和假手术组的(184.1±3.76)mm Hg(P=0.002),3 d时为(185.3±9.22)mm Hg,较1 d时下降,7 d和14d时分别为(177.7±5.62)mm Hg和(176.67±6.06)mm Hg,基本恢复至出血前水平.肾组织α2A-AR mRNA和蛋白在脑出血后1 d时分别为(0.91±0.013)和(0.944±0.142)%,高于假手术组的(0.89±0.018)和(0.779±0.103)%,3 d时达高峰,为(0.93±0.015)(P=0.008)和(1.526 ±0.296)%(P=0.010);(3)脑出血3 d时脑组织俚α2A-AR mRNA和蛋白为(0.93±0.020)和(2.64±0.293)%,显著高于假手术组的(0.86 ±0.019)(P=0.001)和(1.070±0.155)%(P=0.020)以及脑出血1 d时的(0.87±0.029)(P=0.000)和(1.629±0.488)%(P=0.023).脑出血1 d组～7 d组血压变化与脑组织α2A-AR mRNA吸光度的相关系数r=-0.509(P=0.031),与脑组织α2A-AR蛋白表达容积分数的相关系数r=-0.473(P=0.047).结论 急性脑出血的血压调控可能与脑组织α2A-AR和肾组织α2A-AR表达上调有一定的相关性.     

脑缺血预处理对脑缺血大鼠血管生成素-1及其受体Tie-2 mRNA表达的影响

目的 探讨脑缺血预处理对脑缺血大鼠血管生成素-1(angiop oietin-1,Ang-1)及其受体Tie-2 mRNA表达的影响.方法 99只Wistar大鼠随机分成假手术组(n=9)、非缺血预处理组(nonischemic preconditioning,NIP)(n=45)和缺血预处理组(ischemic preconditioning,IP)(n=45),后两组再随机分为缺血再灌注1d、3d、7d、14 d和21 d等5个亚组(每组n=9).线栓法建立短暂性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型进行局灶性缺血预处理(缺血10min后恢复灌注).2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法测定脑梗死体积.原位杂交法检测Ang-1/Tie-2 mRNA表达水平.结果 IP组1d、3d和7 d亚组梗死体积显著小于NIP组相应亚组(P均＜0.01),IP组3d和7 d亚组Ang1 mRNA以及1d、3 d和7 d亚组Tie-2 mRNA表达较NIP组显著性上调(P均＜0.05).IP组3 d亚组梗死体移缩小最显著(P＜0.05),7d亚组Ang-1 mRNA表达显著上调,而其受体Tie-2 mRNA表达高峰出现在IP后3d,并持续至7 d.Pearson相关性分析显示,IP组Ang-1/Tie-2 mRNA表达水平与梗死体积呈显著性负相关(P＜0.01).结论 Ang-1和Tie-2 mRNA在缺血预处理后产生脑缺血耐受时间窗内(预处理后1～7 d)表达上调,其中Ang-1可能主要作用于脑缺血耐受的后期阶段.     

外源性H2S通过核因子-κB介导的炎性反应通路减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的 探讨外源性硫化氢(hy drogen sulfide,H2S)对脑缺血再灌注后脑损伤和炎性反应的影响.方法 48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(ischemia/rep erfusion,I/R)组、H2S 30 ppm组和H2S 60 ppm组(1 ppm=1 mg/L),每组12只.采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠局灶性脑缺血2h再灌注24 h模型.再灌注24 h后应用胶带剔除实验进行神经功能评价,应用2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法测定脑梗死体积百分比,采用酶联免疫吸附法测定缺血脑组织白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6水平,采用蛋白质印迹法测定缺血脑组织诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)和细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的转位激活情况.结果 与I/R组比较,吸入H2S能以剂量依赖性方式缩短胶带剔除所需的时间[I/R组与H2S 30 ppm组和H2S 60 ppm组比较:180 s对130(113～157)s对110(87～138) s;P ＜0.05],缩小脑梗死体积(48.8％±9.1％对23.3％±5.1％对17.3％±3.5％;P＜0.05)],下调缺血脑组织IL-1β[(39.53±6.02)pg/mg蛋白对(30.17±3.46)pg/mg蛋白对(22.69±6.09)pg/mg蛋白;P＜0.05]和IL-6[(54.65±10.68)pg/mg蛋白对(37.89±4.54) pg/mg蛋白对(27.00±3.08)pg/mg蛋白;P＜0.05]表达水平,显著降低NF-κB胞核/胞质比[4.40±1.05对3.07±0.82对2.30±0.60;P＜ 0.05)],抑制iNOS(4.22±0.67对3.14±0.90对2.08±0.35;P ＜0.05)和ICAM-1(5.45±1.08对3.45±0.67对2.21±0.39;P＜0.05)]表达.结论 吸入外源性H2S能以剂量依赖性方式缩小脑缺血再灌注后的脑梗死体积和改善神经功能,其机制可能与抑制NF-κB激活,下调其下游的iNOS和ICAM-1表达以及降低IL-1 β和IL-6水平有关.     

原发性干燥综合征患者外周血B细胞FcγRⅡb的表达及临床意义

目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)患者外周血B细胞FcγRⅡb的表达及其临床意义.方法 流式细胞术检测19例pSS患者、15名健康对照外周血B细胞FcγRⅡb的平均荧光强度(MFI);酶联免疫吸附试验( ELISA)方法测定19例pSS患者血清抗SSA、SSB抗体水平,统计学分析采用t检验、单因素方差分析、SNK-q检验及Pearson相关分析.结果 pSS患者CD 19+CD27+记忆性B细胞亚群的百分率[(20.8±2.7)％,19例]显著低于健康对照组[(37.8±2.2)％,15名](t=-4.002,P＜0.01);活动期pSS患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI[( 74±8),13例]低于非活动期组[(132±11),6例]及健康对照组[(139±12),15名](F=10.699,P＜0.01);pSS患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI与pSS疾病活动指数(SSDAI)呈负相关(r=-0.744,P=0.0003);抗SSA、SSB抗体阳性组pSS患者CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI[分别为(75±3),12例;(48±7),5例]显著低于抗SSA、SSB抗体阴性组[分别为(122±11),7例;(108±9),14例](t分别为-4.336和-3.776,P均＜0.01);抗SSA抗体阳性组pSS患者CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI与抗SSA抗体滴度呈负相关(r=-0.685,P=0.014).结论 pSS患者活动期外周血记忆性B细胞FcyRⅡb表达与SSDAI呈负相关,并与抗SSA抗体呈负相关.FcγR Ⅱb表达异常可能在pSS免疫发病机制中起重要作用.     

不同术式治疗原发性脾囊型包虫病的效果及安全性分析

目的分析并比较脾切除术和保脾手术(内囊摘除术或外囊次全切除术)治疗原发性脾囊型包虫病的安全性及效果,以明确最佳的术式选择。方法收集2002年4月-2017年6月收治于新疆医科大学第一附属医院并手术治疗的29例原发性脾囊型包虫病患者的临床和病理资料。按术式分为A组(脾切除术)和B组(保脾术),分析不同术式的手术耗时、术中出血量、术后肛门首次排气时间、术后带管时间、术后住院天数、住院费用、残腔并发症及复发情况。计量资料两组间比较采用t检验,计数资料两组间比较采用χ2检验。结果 A组手术耗时[(167. 50±41. 85) min vs (125. 84±28. 88) min,t=3. 41,P=0. 002)]和术中出血量[(189. 00±50. 65) ml vs (113. 16±59. 73) ml,t=3. 15,P=0. 004]明显高于B组。A组术后带管时间[(5. 00±2. 36) d vs (3. 16±1. 34) d,t=2. 70,P=0. 012]和术后住院天数[(7. 90±1. 91) d vs (5. 47±1. 61) d,t=3. 42,P=0. 004]明显高于B组。两组的术后首次排气时间、住院费用、残腔积液发生率比较差异均无统计学意义(P值均 0. 05)。结论保脾手术(内囊摘除术、外囊次全切除术)治疗原发性脾囊型包虫病较脾切除术更为安全有效。     

库普弗细胞Toll样受体2在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的探索库普弗细胞Toll样受体2(TLR2)在肝脏缺血再灌注损伤中的表达变化,分析库普弗细胞TLR2信号通路参与肝脏缺血再灌注损伤的机制。方法动物分假手术对照(SH)组、缺血再灌注(I/R)组及氯化钆处理(Gd)组,复制小鼠肝脏部分缺血1 h再灌注4 h损伤模型,结束再灌注后,取缺血叶肝脏组织及其库普弗细胞,提取总RNA及膜蛋白质分析TLR 2 mRNA及蛋白的表达,同时提取缺血肝叶组织核蛋白分析核因子(NF—κB),并检测门静脉血中肿瘤坏死因子(TNF α)、丙氨酸氨基转移酶(ALT) 及内毒素水平。结果再灌注4 h,(1)I/R组缺血肝叶TLR2 mRNA及蛋白表达水平较SH组高,△Ct值分别为1.06±0.91和5.08±1.32,t=7.80,P<0.01;A值分别为433.91±25.53和102.86±13.58,t=28.04, P<0.01。Gd组缺血肝叶TLR2 mRNA及蛋白表达水平较I/R组下降,△Ct值分别为4.22±0.84和1.06±0.91,t=7.56,P<0.01;A值分别为125.89±15.49和433.91±25.53,t=25.27,P<0.01。(2)I/R组缺血肝叶库普弗细胞中TLR2 mRNA及蛋白表达水平较SH组高,△Ct值分别为0.52±0.23和2.61±0.1 8, t=17.47,P<0.01;A值分别为379.70±34.16和114.98±21.90,t=15.98,P<0.01。Gd组缺血肝叶库普弗细胞中TLR2 mRNA及蛋白表达水平则较I/R组下降,△Ct值分别为1.90±0.14和0.52±0.23,t= 12.     

缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察脑缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响,探讨星形胶质细胞活化在脑缺血耐受中的意义.方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为缺血预处理再缺血组、缺血组和对照组,每组12只,前2组分别在2 h大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)前3 d给予10 min的MCAO预处理或假手术,第2次MCAO后24 h处死,对照组仅给予2次间隔3 d的假手术.比较各组脑梗死体积、组织病理学变化和GFAP表达.结果 缺血预处理后再缺血组和缺血组梗死体积分别为(136.85±14.51)mm3和(281.37±29.93)mm3,前者较后者显著缩小53.15%(P=0.007);同时,缺血预处理再缺血组神经元变性坏死显著减轻,并伴有GFAP表达显著上调(2组免疫组化染色平均吸光度分别为102.66±8.39和86.28±6.19,P=0.009).结论 缺血预处理可诱导脑缺血耐受,促进GFAP表达,星形胶质细胞活化可能是脑缺血耐受产生的机制之一.     

组织因子和组织因子途径抑制物1对无复流作用的实验研究

目的 观察缺血再灌注时兔心肌组织和血浆中组织因子(TF)和组织因子途径抑制物1(TFPI-1)水平的变化,研究外源性TFPI-1对无复流严重程度的影响,探讨TF激活的外源性凝血系统及TFPI-1抑制途径在无复流发病过程中的作用.方法 40只新西兰大白兔随机分为4组(每组10只):缺血再灌注组(IR组,结扎回旋支120 min,再灌注60 min)、缺血再灌注TFPI-1组(TFPI-1组,再灌注时rTFPI-1 100 ng/kg静脉注射,1ng·kg~(-1)·min~(-1)静脉滴注)、缺血组(结扎回旋支180 min)和假手术组,每组10只.用硫磺素S和Evan's蓝活体染色区分无复流区和缺血区.无复流严重程度用无复流面积/缺血面积表示.用逆转录-聚合酶链反应方法测定无复流区、缺血区及正常区心肌组织TF和TFPI-1 mRNA表达水平,ELISA方法测定开胸前、冠状动脉结扎前即刻及结扎120 min、再灌注10和60 min血浆TF和TFPI-1水平.结果 开胸前、冠状动脉结扎前即刻及结扎120 min,各组血浆TF、TFPI-1水平差异无统计学意义(P>0.05);再灌注10和60 min时,IR组血浆TF水平均显著高于缺血组和假手术组[10min:(20.7±4.1)pg/ml比(13.9±2.2)pg/ml(P<0.001),(20.7±4.1)pg/ml比(13.2±2.6)pg/ml(P<0.001);60 min:(15.8±2.6)pg/ml比(13.5±1.6)pg/ml(P<0.05),(15.8±2.6)pg/ml比(12.1±0.7)Pg/ml(P<0.001)].再灌注10 min时,IR组血浆TFPI-1水平较缺血组及假手术组无明显变化(P>0.05);60 min时,血浆TFPI-1水平[(9.7±1.6)ng/ml]反而显著低于缺血组[(11.6±1.6)ng/ml,P<0.05]及假手术组[(10.1±1.3)ng/ml,P<0.01].IR组无复流区心肌组织TF mRNA表达高于缺血组及假手术组(P<0.05或P<0.001);TFPI-1 mRNA表达较缺血组无明显变化(P>0.05).TFPI-1组无复流严重程度明显低于IR组(0.39±0.11比0.54±0.06,P<0.01).结论 无复流区心肌组织TF转录水平及再灌注过程中TF血浆蛋白水平表达明显上调;而无复流区心肌组织TFPI-1转录水平无明显变化,再灌注过程中血浆蛋白水平反而相对降低;外源性rTFPI-1可以减轻无复流严重程度.TF激活的外源凝血途径在无复流发病过程中起到重要作用.     

Role of tissue kallikrein in response to flow in mouse resistance arteries

BACKGROUND: Tissue kallikrein, an essential enzyme in the formation of vascular kinins, contributes to flow-dependent dilatation (FDD) in large arteries. We hypothesized that the vascular kinin-kallikrein system may be involved in shear stress signalling in small resistance arteries, which have a key role in the systemic regulation of blood pressure. OBJECTIVE: To investigate the role of the vascular kallikrein-kinin system in mesenteric resistance arteries of mice during acute changes in blood flow. DESIGN: Arteries from wild-type mice (TK) and mice lacking tissue kallikrein (TK) were mounted in an arteriograph for the recording of changes in outer diameter during step increases in flow rate. RESULTS: Responses to phenylephrine, acetylcholine or sodium nitroprusside were not different between the two strains. FDD was significantly reduced in arteries of TK mice compared with that in mesenteric arteries of TK mice exposed to phenylephrine (P = 0.04). FDD was no longer different between TK and TK mice when experiments were performed in the presence of the nitric oxide synthase (NOS) inhibitor N-nitro-l-arginine methyl ester (l-NAME; P = 0.26), l-NAME plus diclofenac (P = 0.73), or l-NAME plus diclofenac plus potassium chloride (P = 0.31), indicating that inactivation of tissue kallikrein preferentially affects the contribution of nitric oxide to flow response. However, expression of endothelial NOS was comparable between TK and TK mesenteric arteries. Finally, the bradykinin B2 receptor antagonist, HOE-140, significantly decreased FDD in TK but not in TK arteries (P = 0.03 and P = 0.82, respectively). CONCLUSION: These results demonstrate the specific role of the tissue kallikrein in flow-induced dilatation, which is mediated by nitric oxide and bradykinin B2 receptor activation in resistance arteries.     

超声微泡包裹单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶自杀基因靶向治疗小鼠肝癌的效果

目的 观察超声微泡携单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶(HSV1-TK)基因在小鼠肝癌细胞H22移植瘤组织中的转染效果及联合更昔洛韦(GCV)后对肿瘤的抑瘤效应.方法 建立小鼠肝癌(H22)皮下移植瘤模型40只,随机分成4组,分别经鼠尾静脉注射入等量磷酸盐缓冲液(A组),HSV1-TK(B组)、HSV1-TK(C组)、HSV1-TK+微泡(D组),每次注射200μl,每隔3 d注射1次,共注射3次;对C组、D组小鼠分别给予1 MHz、2 W/cm~2、5 min超声辐照.首次注射HSV1TK 48 h后采用Western blot检测肿瘤组织中TK蛋白的表达情况,且各治疗组分别从腹腔注射GCV 0.2 ml(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续注射14 d.测肿瘤大小,计算抑瘤率,治疗结束后处死动物行病理学检查.数据采用重复测量资料的方差分析,两两比较采用LSD-t法.结果 在超声引导下微泡包裹的HSV1-TK基因可以准确定位于肿瘤组织并靶向释放,在处理组中均有TK蛋白的表达,其中D组表达量明显高于其他各组(P＜0.05).抑瘤率在A组、B组、C组、D组中分别为0、3.90%±1.80%、22.70%±2.86%、41.25%±3.20%(C组、D组与B组相比,P值均＜0.05;D组与C组相比,P＜0.05).HE染色结果显示D组较A组的坏死病变程度明显减轻.结论 超声辐照可破坏包裹HSV1-TK基冈的微泡以定位释放,既增加了肝癌基因治疗的靶向性,又提高了外源基因的转染效率,从而增强了自杀基因对小鼠肝癌的杀伤效果.     

糖尿病通过抑制VEGF/VEGFR2通路加重大鼠缺血性脑损伤

目的 探讨缺血皮质血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和VEGF受体2(VEGF receptor 2,VEGFR2)表达对糖尿病大鼠缺血性脑损伤的影响.方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑缺血组和糖尿病脑缺血组.腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病模型,然后再应用栓线法建立大鼠永久性局灶性脑缺血模型.在缺血后24 h进行神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑染色测量梗死体积,TUNEL法检测凋亡细胞,实时荧光定量聚合酶链反应检测VEGF和VEGFR2 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测VEGF和VEGFR2蛋白表达水平.结果 假手术组无神经功能缺损,无梗死灶,仅有少量凋亡细胞以及少量VEGF和VEGFR2mRNA和蛋白表达.糖尿病脑缺血组神经功能评分[(4.25±0.54)分对(2.86±0.73)分;t=5.303,P ＜0.001]、梗死体积[(51.69 ±2.26)mm3对(30.15 ±2.08)mm3;=23.166,P＜0.001]和凋亡细胞数量[(24.22±1.34)个/HP对(13.28 ±0.37)个/HP;t =27.261,P＜0.001]均较脑缺血组显著增高和增加,而VEGF和VEGFR2 mRNA以及蛋白表达水平则较脑缺血组显著降低(VEGF mRNA:4.74±0.54对6.71 ±0.91,P＜0.001;VEGFR2 mRNA:4.06±0.60对6.16±0.96,P＜0.001;VEGF蛋白:0.99 ±0.13对1.55 ±0.23,P＜0.001;VEGFR2蛋白:4.12±0.74对6.23±0.76,P＜0.001).结论 VEGF/VEGFR2信号通路参与了糖尿病加重脑缺血损伤的过程,VEGF和VEGFR2表达下调可能是糖尿病加重脑缺血损伤的机制之一.     

早期神经功能恶化急性卒中患者的颈动脉粥样硬化超声特征

目的 探讨早期神经功能恶化(early neurological deterioration,END)急性卒中患者的颈动脉粥样硬化超声特征.方法 END定义为人院第7天时国立卫生研究院卒中量表评分较入院时至少增加2分.128例入院24 h内接受颈动脉超声检奁的急性缺血性卒中患者中,38例出现END的患者作为END组,40例危险因素相匹配的非END患者作为非END组.比较两组颈动脉粥样硬化超声特征.结果 END组斑块积分[(16.7±4.4)mm对(13.3±3.5)mm,t=2.673,P=0.009)、内膜-中膜横截面积[(26.4±8.5)mm2对(20.5±6.8)mm2,t=3.394,P=0.001]、动脉僵硬指数(28.94±4.29对21.22±5.85,t=6.618,P:0.000)以及小稳定斑块(66.7%对43.3%,χ2=9.164,P=0.003)、偏心性斑块(62.8%对45.6%,χ2=5.008,P=0.025)、狭窄≥50%(71.1%对37.5%,χ2=8.828,P=0.003)和负性重构(28.9%对7.5%,χ2=6.087,P=0.014)的构成比均显著高于非END组,而扩张系数[(14.74±8.66)×10-6/Pa对(19.16±9.35)×10-6/Pa,t=2.163,P=0.034]和顺应系数[(0.49±0.13)×10-4mm2/Pa对(0.58±0.11)×10-4 mm2/Pa,t=3.307,P:0.001]均显著低于END组.结论 斑块积分、内膜-中膜横截面积、动脉僵硬度、不稳定斑块、偏心性斑块、狭窄≥50%、负性重构、扩张性和顺应性等超声特征可能有助于预测急性卒中的END.     

组织激肽释放酶对酸敏感离子通道1a介导的大鼠酸中毒神经元氧化应激的影响

目的探讨组织激肽释放酶（TK）对酸中毒损伤神经元的保护作用及对酸敏感离子通道1a（ASIC1a）介导的氧化应激反应的影响。方法取原代培养8～10 d的新生SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组,酸中毒组（pH=6.0的细胞外液处理4 h）,TK（100 nmol/L）、缓激肽B2受体（B2R）激动剂（缓激肽,100 nmol/L）、ASIC1a阻断剂（狼蛛毒素,100 ng/ml）及B2R拮抗剂（HOE140）预处理组。TK、B2R激动剂、ASIC1a阻断剂预处理组在给予酸性液处理前,先给予相应药物预处理30 min;B2R拮抗剂预处理组,在TK干预前30 min,给予HOE140（500 nmol/L）,30 min后给予酸性液处理。采用活细胞计数试剂盒（CCK-8）测定各组神经元的存活率。应用不同的荧光探针标记细胞内活性氧（ROS）,一氧化氮（NO）,线粒体膜电位（MMP）以及细胞内游离Ca2＋,采用荧光酶标仪测定上述各组细胞内各荧光物质的相对强度,计算各物质的相对含量。结果①正常对照组,TK、ASIC1a阻断剂及B2R激动剂预处理组的神经元存活率分别为（96.6±2.6）%、（79.7±5.9）%、（74.2±4.6）%、（77.7±5.0）%,与酸中毒组的（59.0±6.0）%比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。B2R拮抗剂预处理组为（64.6±3.8）%,与TK预处理组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。②与正常对照组比较,酸中毒组细胞内ROS、NO及游离Ca2＋水平显著增高（P〈0.01）,MMP水平显著下降（P〈0.01）;与酸中毒组比较,TK、ASIC1a阻断剂及B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO及Ca2＋水平显著下降,MMP水平显著增高（P〈0.01或P〈0.05）;而与TK预处理组比较,B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO含量,游离Ca2＋水平明显增高,MMP水平明显下降,P〈0.01。结论在酸性环境下,ASIC1a激活介导了神经元内氧化应激反应,诱导神经元损伤;TK通过B2R能够减轻ASIC1a介导的氧化应激性损伤。     

心肌组织TF表达对兔无复流作用的实验研究

目的：观察无复流区心肌组织因子（TF）mRNA表达,探讨心肌组织局部TF激活的外源凝血途径在兔实验性无复流（NR）中的作用。方法：将13只新西兰大白兔随机分为TF组（n=10）和对照组（n=3）：均予结扎回旋支（LCX）中段120min,再灌注60min,建立急性心肌梗死（AMI）后再灌注NR模型。在再灌注末,从左心房注入6％硫磺素S1ml／kg使复流区着色,NR区不着色;再于原位重新结扎LCX,TF组从左心房注入Evan’s蓝,使结扎区外着蓝色,缺血区不着蓝色,对照组不予Evan’s蓝。采用RT-PCR法检测TF组NR区、缺血区和正常区心肌组织TF mRNA表达;对照组光镜下观察不同心肌组织血栓形成和心肌损伤情况。结果：TF组NR区TF mRNA表达明显高于缺血区和正常区心肌组织（0．488±0．190对0．310±0．148对0．200±0．091,P〈0．05）,但缺血区和正常区心肌组织TFmRNA表达无统计学差异（P〉0．05）。对照组NR区心肌组织可见较多血栓形成,心肌损伤程度明显加重。结论：NR区心肌组织局部TF表达增强,并在NR发病过程中起到重要促进作用。     

松龄血脉康预处理对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 探讨松龄血脉康预处理对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响.方法 45只雄性SD大鼠,随机分为松龄血脉康(SL-xmk)预处理组、假手术组和生理盐水对照组.SL-xmk预处理组采用SL-xmk悬浮液(937.5 mg/kg)对大鼠...     

糖尿病大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达及其对转化生长因子β1的影响

目的 探讨糖尿病（DM）大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）的变化及其对转化生子因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）鼠尾静脉注射建立DM大鼠模型20只,随机数字表法分为DM组10只和氯沙坦干预组（LST组）10只,LST组予以氯沙坦30 mg·kg＾-1·d＾-1灌胃12周,设正常对照组（NC组）10只.免疫组织化学检测各组大鼠肺组织AT1R表达,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting检测比较各组肺组织AT1R、TGF-β1表达.采用单因素方差分析比较组间差异,两两比较采用LSD检验,组间比较采用单因素方差分析.结果 与NC组相比,DM组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著升高（AT1R mRNA：0.04±0.03比0.29±0.15,t=5.252; AT1R蛋白：0.62±0.05比0.77±0.05,t=6.736;TGF-β1 mRNA：0.10±0.05比0.73±0.16,t=12.377;TGF-β1蛋白：0.47±0.05比0.70±0.05,t=10.66;均P＜0.05）,LST组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著低于DM组（AT1R mRNA：0.292±0.148比0.068±0.024,t=4.741;AT1R蛋白：0.77±0.05比0.63 ±0.04,t=7.396;TGF-β1 mRNA：0.74±0.16比0.19±0.09,t=9.563;TGF-β1蛋白：0.702±0.047比0.439±0.018,t=16.601;均P＜0.05）.结论 DM大鼠肺组织可能存在局部肾素-血管紧张素系统组分的激活,促进了TGF-β1表达的增加,可能参与了肺细胞外基质的改变.