咪唑克生对体外血脑屏障炎症模型通透性的影响

目的:观察咪唑克生(idazoxan,IDA)对体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)炎症模型的通透性、紧密连接蛋白ZO-1表达和分布及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和MMP-9抑制物——金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法:采用培养7 d的小鼠脑微血管内皮细胞株b.End3建立体外BBB模型,采用TNF-α(10 nmol/L)处理24 h诱导BBB炎症模型,并对BBB炎症模型分别采用IDA 50、100、200μmol/L预处理6 h以观察IDA对BBB炎症模型的作用。通过检测异硫氰酸荧光标记的葡聚糖通过率来确立模型的通透性,采用Western blot法检测紧密连接蛋白ZO-1的表达,通过免疫荧光法观察ZO-1的分布情况,并通过RT-PCR法检测MMP-9/TIMP-1的表达。结果:培养7 d的b.End3细胞汇合成稳定的单层连接,有较好的屏障功能,而采用TNF-α处理24 h后诱导的BBB炎症模型的通透性明显升高,紧密连接蛋白ZO-1在膜上的表达明显减少、不连续,Western blot法显示ZO-1蛋白表达水平明显下降,MMP-9的表达明显升高;而采用IDA 50、100、200μmol/L预处理6 h能明显降低其通透性,增加ZO-1蛋白的表达和改善ZO-1的分布异常,降低MMP-9的表达,其中200μmol/L IDA作用最明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论:IDA能够直接作用于脑血管内皮细胞,降低TNF-α诱导的体外BBB炎症模型MMP-9的表达,增加紧密连接蛋白ZO-1的表达、修复紧密连接ZO-1的异常分布,从而改善其异常增高的通透性。     

MMP-2、MMP-9与溃疡性结肠炎患者肠黏膜通透性的相关性研究

目的：观察血浆基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达水平与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜通透性的联系,探讨UC的发病机制,为诊断提供较为可靠的参考指标。方法：纳入50例UC患者和30例健康志愿者,分别采集研究对象的外周静脉血,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆MMP-2、MMP-9的表达,高效液相色谱法检测口服乳果糖(L)和甘露醇(M)混合液6 h内尿液L、M的含量,并计算乳果糖/甘露醇比值(LMR)。结果：与健康对照组相比,UC组血浆MMP-2、MMP-9水平显著升高(t=13.843,P<0.001;t=14.165,P<0.001)。UC组血浆MMP-2、MMP-9表达与疾病病变严重程度、病变范围呈正相关;UC组患者尿LMR显著高于健康对照组(t=9.804, P<0.001),UC患者血浆MMP-2、MMP-9表达与肠黏膜通透性呈一定程度的相关性(r=0.832, P<0.001;r=0.847,P<0.001)。结论：UC患者血浆MMP-2、MMP-9表达升高,并能反映UC病变严重程度、病变范围,作用机制可能与肠黏膜通透性增高有关。     

咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9/TIMP-1的影响

 目的：观察咪唑克生（idazoxan,IDA）对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）时血脑屏障(BBB)通透性及脊髓内的MMP-9/TIMP-1表达的影响。 方法：选用36只8周左右的C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、EAE组和IDA干预组,每组12只,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导经典EAE模型,干预组采用IDA 2 mg/kg腹腔注射,每天2次,共15 d。观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分,采用HE染色和LFB髓鞘染色观察病理改变,采用伊文思蓝荧光定量方法检测BBB通透性的变化,并用Western blotting法检测MMP-9和TIMP-1的表达。结果：空白对照组无一发病,与EAE组比较, IDA干预组神经功能障碍评分明显下降,炎性病灶明显减少,BBB通透性明显降低,MMP-9的表达和MMP-9/TIMP-1比值明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：IDA可能通过下调MMP-9,降低MMP-9/TIMP-1比值,减轻血脑屏障的降解破坏,从而稳固BBB,降低BBB通透性,减缓小鼠EAE的发病。     

MMP-9促进间充质干细胞穿越血脑屏障的作用研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）开放血脑屏障（BBB）,促进大鼠间充质干细胞（rMSCs）穿越BBB的作用.方法 构建体外BBB模型,运用Transwell细胞迁移率实验明确MMP-9对体外BBB模型的穿透效果.体内实验：4周龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、MMP-9处理组及MMP-9抑制剂（TIMP-1）干预组;HE染色观察各实验组不同时间点（0.5、1、3、7、14d）的大脑皮质病理变化和检测其脑含水量,EB值法检测BBB通透性;同时采用Western Blot测定大鼠皮质中MMP-9蛋白表达和免疫组织化学法测定大脑皮质内5-溴-2-脱氧嘧啶（Brdu）标记rMSCs阳性细胞数量.结果 Transwell细胞迁移率实验显示,缺氧状态下各组穿过小室的rMSCs数量均明显高于常氧,差异有统计学意义（P＜0.01）;MMP-9处理组穿过小室的rMSCs数量明显高于阴性对照组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01）.体内实验结果表明：与HIBD组相比,MMP-9处理组脑含水量、BBB通透性增加程度均有所提高;TIMP-1干预组的相应指标均有所降低.大鼠皮质中MMP-9蛋白表达水平具有时间依赖性,MMP-9处理组1～3 d时含量达到最高,明显高于HIBD组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）,之后表达开始回落,但仍有稳定表达.MMP-9处理组穿越BBB的Brdu阳性细胞数比HIBD组多,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）.结论 大鼠缺氧缺血后MMP-9表达升高,可介导开放BBB,促进rMSCs穿越BBB.     

颈淋巴管阻塞对脑缺血BBB通透性和MMP-9表达的影响

目的:探讨脑梗塞后给予大鼠颈淋巴管阻塞对缺血侧大脑皮质基质金属蛋白酶9表达水平及血脑屏障通透性和脑含水量等的影响。方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,以及行大鼠大脑中动脉阻塞15min后摘除双侧颌下腺的颈浅和颈深淋巴结,造成脑梗塞后颈淋巴管阻塞(MCAO+CLB)模型去检测缺血侧大脑皮质脑含水量、血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶9mRNA表达水平和免疫活性的变化。结果:在不同的时点,上述各指标在MCAO+CLB组大鼠明显高于MCAO组。结论:MCAO后,CLB通过上调梗塞侧皮质MMP-9的表达水平而加重脑水肿和提高血脑屏障通透性。     

电针预处理对MCAO大鼠模型血脑屏障和MMP-9的影响

目的:探讨电针(EA)预处理对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性及脑内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、单纯电针(EA)组、缺血(MCAO)组及电针预处理(EA+MCAO)组,每组24只。使用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血120 min再灌注48 h后处死取脑。分别采用干湿重法测定各组动物脑水含量,伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障通透性,Western Blot检测紧密连接蛋白(TJP)及MMP-9表达水平,同时明胶酶谱法检测MMP-9活性。结果:与Sham组相比,MCAO组大鼠脑水含量及EB含量增多(P0.05),缺血侧脑组织TJP水平下降(P0.05),MMP-9表达及活性明显升高(P0.05);与MCAO组大鼠比较,EA+MCAO组脑水含量及EB含量减少(P0.05),缺血侧脑组织TJP水平升高(P0.05),同时MMP-9表达及活性显著降低(P0.05)。结论:电针预处理通过抑制缺血后脑内MMP-9的表达及活性,维持BBB完整性,有效改善脑缺血后的脑水肿症状。     

两次线栓法构建脑缺血耐受模型大鼠血脑屏障通透性改变与基质金属蛋白酶9的表达

背景：诸多研究证实,短暂性脑缺血预处理可诱导脑缺血耐受。然而,脑缺血耐受的内源性保护机制尚未明确。 目的：观察脑缺血预处理诱导脑缺血耐受大鼠再灌注不同时间窗血脑屏障通透性改变及基质金属蛋白酶9表达的变化。 方法：将Wistar大鼠随机分为3组,缺血预处理组采用线栓法阻塞大脑中动脉10 min建立局灶性缺血预处理模型,分别在缺血预处理后1,3,7,14,21 d进行再次缺血2 h;模型组不进行缺血预处理,假手术组不阻塞血管。于再灌注22 h进行神经功能检测,采用TTC染色测定脑梗死体积,通过测定渗出血管外的伊文思蓝含量来评价血脑屏障通透性的变化,免疫组织化学和原位杂交法检测基质金属蛋白酶9蛋白及mRNA的表达。 结果与结论：与模型组比较,缺血预处理组1,3,7 d亚组的神经功能评分、脑梗死体积、血脑屏障通透性、脑含水量以及基质金属蛋白酶9蛋白和mRNA表达均明显减小/降低(P < 0.05或P < 0.01),其中以3 d亚组降低最为明显。提示缺血预处理诱导了脑缺血耐受,预缺血诱导的血脑屏障通透性改变以及基质金属蛋白酶9表达减低在脑缺血耐受中发挥重要作用。     

L-硝基-精氨酸甲酯对严重烫伤早期大鼠血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对严重烫伤早期大鼠血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨L-NAME对血脑屏障的保护作用.方法:健康SD大鼠,随机分为正常对照组、假烫伤组、烫伤组、烫伤+L-NAME治疗组.烫伤后又设3、6、12、24、48h等5个时相点,用透射电镜观察BBB超微结构变化;紫外分光光度计检测脑伊文氏蓝(EB)含量;免疫组织化学观察脑MMP-9表达.结果:烫伤后脑EB含量明显增高,MMP-9表达升高,差别具有显著性.电镜显示烫伤后大脑皮质的神经细胞线粒体肿胀或溶解.脑毛细血管周围出现空泡化,内皮肿胀,基底膜厚薄不均.L-NAME始疗后,脑EB含量明显下降,MMP-9表达恢复至正常水平,脑毛细血管、神经细胞、突触及基底膜等超微结构基本恢复正常.结论:烫伤后血脑屏障通透性增高与脑内MMP-9表达升高密切相关,提示MMP-9是严重烫伤后血脑屏障损伤的关键因素.早期应用L-NAME能明显减轻烫伤对BBB的损伤,可能与L-NAME抑制MMP-9表达有关.     

低氧抑制猪肺动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的探讨低氧对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的影响。方法采用酶谱法测定PASMC培养基中MMP-2和MMP-9的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2和MMP-9的蛋白表达，免疫组化法测定细胞原位MMP-2和MMP-9的蛋白表达，RT-PCR法检测mRNA的表达。结果低氧后PASMC分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；MMP-9酶活性、细胞外蛋白表达量下降，而细胞内蛋白表达无变化。结论低氧可抑制PASMC分泌MMP-2和MMP-9的酶活性，其机制可能是低氧影响PASMC中MMP-2基因的转录、影响MMP-9蛋白表达后的分泌与活化，导致MMP-2和MMP-9酶活性的改变。     

脑出血患者血清MMP-3、MMP-9变化及临床意义

目的观察血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在脑出血患者不同时期的动态变化。方法49例脑出血患者作为脑出血组,随机取30例健康体检者为对照组,采用ELISA法分别检测脑出血组发病24、48 h、7 d及对照组血清MMP-3、MMP-9的含量变化。结果脑出血组血清MMP-3和MMP-9水平在发病24、48 h及7 d与对照组比较显著升高(P<0.05);MMP-3、MMP-9含量在不同血肿体积脑出血组中比较具有显著性差异(P<0.05)。在轻、中、重型神经功能缺损程度之间比较具有显著性差异(P<0.05)。结论脑出血患者MMP-3、MMP-9水平与血肿体积、发病时间和神经功能损伤程度都具有密切关系,可作为判定病情和评估预后的参考指标。     

大豆异黄酮对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响及其机制

目的 探讨大豆异黄酮(SI)对局灶性脑缺血再灌注大鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响及相关机制。方法 72只健康成年SD大鼠均分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SI预处理组(SI组),每组各24只。SI组每天按120 mg/kg体质量给予12 mg/mL SI灌胃1次,Sham组和I/R组每天用等体积生理盐水灌胃1次,均连续灌胃21 d。在实验第22天,I/R组和SI组大鼠用线栓阻断右侧大脑中动脉血流制作大脑中动脉缺血再灌注动物模型;Sham组不插入线栓,未阻断血流,其余手术操作与I/R和SI组一致。I/R组和SI组大鼠缺血2 h后,拔出阻塞的线栓恢复血流,再灌注24 h。根据Zea longa评分,选择造模成功的大鼠。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测大鼠脑梗死体积,干湿重法检测脑组织含水量,伊文思蓝(EB)示踪法检测BBB通透性,Western blot检测脑组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达。比较三组大鼠的测量数据,分析SI预处理对以上观测指标的影响。结果 SI组和I/R组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积、脑组织含水量和脑组织内EB含量均高于Sham组,而SI组低于I/R组,分别为(1.50±1.13)、(2.33±0.82)和(0.00±0.00)分,12.5%±2.34%、37.50%±2.28%和0.07%±0.03%,81.75%±0.86%、84.17%±0.54%和78.24%±0.41%,(46.50±1.41)、(55.44±1.37)和(3.83±1.49)μg/g,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。SI组和I/R组MMP-9、TIMP-1表达均明显高于Sham组,分别为0.81±0.23、1.15±0.14、1.15±0.14和2.31±0.20、1.62±0.21、1.62±0.21,差异均有统计学意义(P值均<0.01);与I/R组相比,SI组MMP-9表达减少、TIMP-1表达增加,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论 SI可能通过下调缺血再灌注后脑组织MMP-9蛋白表达和上调TIMP-1蛋白表达,降低BBB的通透性,减轻缺血再灌注后脑水肿的程度和脑组织EB的含量。     

间质干细胞与血脑屏障通透性的研究进展

间质干细胞可通过脑实质、血液和脑脊液等移植方式进入脑组织,修复损伤组织,促进神经功能恢复,是治疗中枢神经系统疾病的理想种子细胞;但血脑屏障存在着特殊结构,研究间质干细胞与血脑屏障通透性的相关性,使更多间质干细胞穿过血脑屏障。综述了间质干细胞与血脑屏障通透性的最新研究进展。     

人血脑屏障体外实验模型的建立及缺氧-复氧对其通透性的影响

目的建立人血脑屏障体外实验模型，并探讨缺氧-复氧对血脑屏障模型通透性的影响。 方法将分离、纯化的人脑微血管内皮细胞（HB-MVEC）在细胞插入器上培养至汇合状态，以液面试漏试验确定血脑屏障模型的形成，并通过形态学检查、跨内皮细胞电阻（TEER）测定和辣根过氧化物酶（HRP）通透率对血脑屏障模型进行鉴定；以未达汇合状态的HB-MVEC及培养至汇合状态的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为对照。观察缺氧-复氧处理（缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h）和缺氧-复氧时存在白细胞激活产物（缺氧2h后在有白细胞激活产物存在情况下复氧1h）对血脑屏障模型通透性的影响，以及前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3对血脑屏障模型的保护作用。各项实验均观察3孔细胞。 结果HB-MVEC在细胞插入器培养至汇合状态后，液面试漏试验呈阳性；扫描电镜观察显示细胞间无间隙，透射电镜检查证实细胞间存在紧密连接。血脑屏障模型、未达汇合状态HB-MVEC和HUVEC的TEER分别为（46.0±1.3）、（30.8±1.4）、（7.5±2.1）Ω/cm^2；向细胞插入器内加入含HRP的培养基培养1h后，HRP通透率分别为0.17%±0.03%、0.26%±0.04%和0.94%±0.07%；缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h HRP通透率分别为3.97%±0.94%、6.06%±0.75%、7.17%±0.18%、7.96%±0.47%、8.57%±0.62%、10.37%±0.78%。血脑屏障模型缺氧2h后在有白细胞激活产物的情况下复氧1h，其HRP通透率为8.87%±0.76%，明显高于无白细胞激活产物组（7.20%±0.87%）；而前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3能够减弱这种情况下的血脑屏障模型通透性增加，3组的HRP通透率分别为7.08%±0.89%，6.01%±0.57%和5.53%±0.62%。 结论应用HB-MVEC可以构建血脑屏障体外模型，缺氧-复氧明显增加血脑屏障模型的通透性，前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3具有保护血脑屏障     

星形胶质细胞与淋巴细胞在体外血脑屏障中的相互作用

目的 本实验旨在探讨多发性硬化(MS)发病中血脑屏障(BBB)中星形胶质细胞(AS)与淋巴细胞(LCs)的相互作用.方法 分离原代鼠脑血管内皮细胞(rBMECs)和SD鼠AS并建立体外BBB模型,对rBMECs与AS共培养和rBMECs常规培养进行跨内皮细胞电阻(TEER)和渗透率的比较.用荧光定量法检测rBMECs单独培养、rBMECs与AS共培养、rBMECs和LCs共培养、rBMECs与AS及LCs三重培养四种模式的神经生长因子(NGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、白细胞介素(IL)-17,干扰素(IFN)-γ,Foxp3的水平.结果 rBMECs和AS共培养比rBMECs单培养的TEER高,而其LCs渗透率却很低;与rBMECs单培养相比,rBMECs、AS和LCs三重培养可降低NGF、IL-17、IFN-γ的表达(P=0.036),MMP-2和Foxp3的表达增加(P=0.0216);与rBMECs和AS共培养相比,rBMECs、AS、LCs三重培养能有效降低NGF、IL-17和IFN-γ的表达(P =0.0451).与rBMECs和AS的共培养相比,rBMECs、AS、LCs三重培养能增加MMP-2的表达(P =0.021),而MMP-9在四种模式中表达无差异.结论 在体外BBB中原代鼠脑rBMECs和AS共培养比rBMECs单培养的TEER高,AS与LCs共培养可能增加MMP-2的表达,降低IL-17和IFN-γ的表达.     

大鼠脑缺血/再灌注损伤后梗死灶周围水通道蛋白4与血脑屏障通透性的动态变化

目的： 研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤对梗死灶周围脑组织水通道蛋白4（AQP4）的表达及血脑屏障通透性的影响。〖HJ1.7mm〗方法: 健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为脑缺血/再灌注6 h、24 h、48 h、7 d组及相应时点的假手术组，每组各6只。采用线栓法阻塞大脑中动脉（MCAo）建立局灶性脑缺血/再灌注模型，于相应时点进行神经症状评分后断头取脑，采用免疫组织化学方法检测大鼠脑缺血/再灌注后不同时点梗死灶周围AQP4的表达及IgG的渗出以评价血脑屏障通透性的改变。结果: (1)大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状较假手术组明显（P<0.01），6-48 h呈逐渐加重趋势，72 h后有所缓解，7 d恢复正常；(2)大鼠脑缺血/再灌注6 h时AQP4表达增加不明显，至再灌注24 h后表达明显增加（P<0.05），7 d仍处于表达高峰；(3)再灌注6 h时IgG渗出不明显，再灌注24 h后开始增加（P<0.05），于再灌注48 h IgG渗出达高峰后开始下降; (4)大鼠脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障通透性的增强与AQP4表达的增加呈显著相关(P<0.01)。结论: 大鼠脑缺血/再灌注损伤后AQP4表达增加与血脑屏障通透性增强密切相关，两者是脑缺血/再灌注损伤后脑水肿发生的重要因素。     

全反式维甲酸通过作用于JNK/P38 MAPK信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注引起的血脑屏障损伤

目的:观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对脑缺血再灌注(cerebral ischemia-reperfusion,CIR)损伤大鼠血脑屏障的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将SD雄性大鼠随机分组为假手术(sham)组、模型(CIR)组及CIR+ATRA(10、30和90 mg/kg)组。采用MCAO线栓法建立大鼠CIR损伤模型,缺血1. 5 h,再灌注24 h后,进行神经功能行为学评分及脑梗死体积、脑含水量和伊文思蓝含量的测定;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性; Western blot法检测脑组织中紧密连接蛋白(claudin-5、occludin和ZO-1)、JNK、p-JNK、P38、p-P38和MMP-9的蛋白水平。结果:与CIR模型组相比,ATRA(30 mg/kg)可明显改善大鼠神经功能,减少脑梗死体积,降低脑含水量和伊文思蓝含量,降低缺血区紧密连接蛋白的降解(P 0. 01),降低缺血脑组织中MMP-9的活性及蛋白的表达(P 0. 01),抑制JNK/P38 MAPK通路中JNK和P38的磷酸化并减少p-JNK和p-P38的蛋白水平(P 0. 01)。结论:ATRA能够减轻CIR对大鼠脑组织的损伤和血脑屏障的破坏,其保护作用可能与抑制JNK/P38 MAPK信号通路和MMP-9的激活有关。     

Increased permeability of blood-brain barrier on the hippocampus of a murine model of senescence

SAMP8 mice show several indicative characteristics of accelerated aging and have been used to study the physiological and physiopathological processes that take place during senescence. There is some controversy about the presence of a functional blood-brain barrier (BBB) disturbance on these animals, which could be related to the oxidative stress or the amyloidosis present in their brain. In order to elucidate BBB status in the hippocampus of SAMP8 mice, in this study we have determined the extravasation from brain microvessels of endogenous IgG in SAMP8 mice aged 3, 7 and 12 months and in age-matched control SAMR1 mice. Immunohistochemistry, confocal microscopy and an imaging methodology specially designed to quantify IgG extravasation have been used. The choroid plexus was analyzed as a control for positive extravasation in SAMP8 and SAMR1 mice and, as expected, in all studied ages high IgG immunoreactivity was observed in both strains. We have found significantly higher levels of IgG extravasation in the hippocampus of 12-month-old SAMP8 mice compared to SAMR1 mice, indicating an increased permeability of BBB in aged senescence-accelerated mice.