SNaPshot微测序技术分析5-脂氧合酶激活蛋白基因与缺血性脑血管病的相关性

目的 探讨5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)基因SG13S114A/T和SG13S32A/C两位点多态性与河南汉族人群缺血性脑血管病(ICVD)的遗传易患性.方法 采用SNaPshot多重微测序技术检测246例河南汉族ICVD患者和245名健康对照者ALOX5 AP基因SG13S114和SG13S32位点的多态性,运用SPSS16.0软件进行基因型频率、等位基因频率的比较,SHEsis软件进行单倍型分析和连锁不平衡检验.结果 ICVD组SG13S114位点AA基因型频率及A等位基因频率明显高于对照组,差异有统计学意义.经性别及年龄分层分析发现,男性ICVD患者及年龄小于50岁的ICVD患者SG13S114位点的AA基因频率及A等位基因频率亦明显高于对照组,差异有统计学意义.单倍型分析发现:ICVD组A-A单倍型频率(30.4％)显著高于对照组(23.5％),差异具有统计学意义(OR=1.419,95％ CI1.068～1.885,P=0.015);T-C单倍型频率(22.0％)显著低于对照组(28.8％),差异具有统计学意义(OR=0.698,95％ CI0.523 ～0.932,P=0.014).结论 SG13S114位点可能是河南地区汉族人群ICVD的遗传风险因子,并且该位点与男性ICVD患者及年龄小于50岁ICVD患者的发病关系更为密切.A-A单倍型可能是河南汉族人群ICVD发生的风险因子,T-C单倍型可能对河南汉族人群ICVD的发生具有保护作用.     

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与环境因素在缺血性卒中发生中的交互作用

目的 探讨5-脂氧合酶激活蛋白基因(ALOX5AP基因)启动子区rs17222919位点基因多态性与环境因素在河南汉族人群缺血性卒中(IS)发病中的交互作用.方法 对河南省汉族622例IS患者和631名健康对照者进行环境危险因素调查,运用TaqMan-PCR技术对ALOX5AP基因rs17222919位点进行基因分型,探讨其与IS发生的相关性,并根据交互作用系数(Υ,Υ=βeg/βe)判断交互作用及其作用模型.结果 IS组rs17222919位点的TG(189/622,30.4％)、GG(18/622,2.9％)基因型频率及G等位基因频率(225/1244,18.1％)显著低于健康对照组(221/631,35.0％;31/631,4.9％;283/1262,22.4％),差异具有统计学意义(x2 =4.117,P=0.042;x2=4.457,P=0.035;x2 =7.294,P=0.007).TG+GG基因型与高血压、糖尿病、吸烟之间在IS发病中均存在负向交互作用(y =0.943、0.922、0.830),其作用模型均为超相乘模型.结论 IS的发生是遗传及环境因素相互作用的结果.在河南汉族人群中,rs17222919位点G等位基因可能对IS发病的环境危险因素高血压、糖尿病、吸烟暴露的效应具有减弱作用.     

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与细胞色素P450酶3A5基因多态联合交互作用显著增加脑梗死风险

目的 对中国浙江南部地区人群花生四烯酸代谢脂氧合酶通路5-脂氧合酶激活蛋白基因(ALOX5AP基因)4个单核苷酸多态性(SNPs)和细胞色素P450酶(CYP450)通路4个SNPs的多态性进行研究,探讨基因多态性、基因-基因间联合交互作用与脑梗死的患病风险的相关性.方法 采用病例对照设计,测定了292例脑梗死患者和259例对照者8个基因位点,包括ALOX5AP基因的4个位点:SG13S32(rs9551963)、SG13S42(rs4769060)、SG13 S89(rs4769874)、SG13Sl14(rs10507391),及EPHX2基因G860A(rs751141)、CYP2C9*2基因A1075C (rs1057910)、CYP2C9*3基因C430T(rs1799853)和CYP3A5基因A6986G(rs776746)位点SNPs.应用广义多因子降维法(GMDR)软件检测基因与基因之间的交互作用.结果 脑梗死组和对照组中8个候选基因位点的基因型分布在脑梗死组和对照组间比较差异无统计学意义.GMDR方法显示最优模型为SG13Sl14和A6986G两基因联合作用模型,其样本检验准确度56.32％,交叉检验一致性为10/10,符号检验P=0.011.调整年龄、高血压、糖尿病因素后SG13S114和A6986G交互变量与脑梗死患病风险正相关(OR=1.804,95％CI1.180～2.759,P=0.006).结论 SG13Sl14和A6986G基因联合交互作用显著增加脑梗死患病风险.对基因与基因间的交互作用分析,有助于更深入地研究复杂疾病的基因型和表型间的关系.     

白细胞介素-1受体拮抗剂基因多态性与缺血性卒中的关系

目的探讨存中国人群中，白细胞介素-1受体拮抗剂基因内含子2的变数串联重复（VNTR）多态性与缺血性卒中的关系。方法共收集了112例缺血性卒中患者（36例短暂性脑缺血发作．76例脑梗死）和105例年龄与性别相匹配的正常人或其他住院病人作为对照，通过聚合酶链反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳来确定其基因型。结果缺血性卒中患者A2等位基因频率要低于对照组（分别为0．049和0．105，X^2=4．78，P=0．029），A1／A2＋A2／A2基因型的频率也比对照组低（分别为0．098和0．200，X^2=4．47，P=0．035）。缺血性卒中亚组间的分析发现，短暂性脑缺血发作组与对照组的基因型及等位基因频率没有差别，而脑梗死组与对照组则有显著差别。脑梗死组A2等位基因频率明显低于对照组（分别为0．026和0．105，P=0．004，OR=0．23，95％CI为0．08-0．69）。结论白细胞介素-1受体拮抗剂内含子2基因VNTR多态性与缺血性卒中有关，其A2等位基因对缺血性卒中特别是脑梗死可能有保护作用。     

赖氨酸蛋白缺乏激酶1基因多态性与维吾尔族人缺血性卒中的关联研究

目的 探索赖氨酸蛋白缺乏激酶1( with no lysine[K]1,WNK1)基因单核苷酸多态性(SNP)与中国维吾尔族缺血性卒中的关系.方法 收集295例维吾尔族缺血性卒中患者和318例其他疾病对照者,进行病例对照研究.用标签SNP( tagging-SNP,tSNP)策略选择WNK1基因10个SNP位点( rs3858703、rs11611246、rs7305065、rs1990021、rs34408667、rs12309274、rs1012729、rs956868、rs12828016、rs953361).SNPs基因分型检测采用SNaPshot平台.用t检验、卡方检验和Logistic回归分析对数据进行统计分析,用Haploview软件进行连锁不平衡分析和单倍型分析.结果 rs11611246位点T等位基因在对照组中的分布(30.0％)高于病例组(25.6％),但是差异无统计学意义.用性别进一步分层分析,发现rs11611246 T等位基因是维吾尔族女性卒中发病的保护因子.显性遗传模型显示T等位基因携带者发生缺血性卒中的风险是对照组的0.448倍(95％ CI 0.269 ～0.746,P＝0.002).调整年龄后差异仍有统计学意义,进一步调整混杂因素年龄、体质量指数、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、高脂血症后,差异仍有统计学意义.除此之外,WNK1基因其余9个SNPs位点未发现同维吾尔族人脑梗死相关.结论 我们首次发现WNK1基因第4内含子rs11611246多态影响缺血性卒中的发生,rs11611246位点T等位基因可能是维吾尔族女性发生缺血性卒中的保护因素.     

5-脂氧合酶与缺血性脑损伤

5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢产生5-OH-6,8,11,14-廿碳四烯酸(5-HETES)和白三烯(Leukotrienes,LTs)等类花生酸产物的关键酶。近年来研究,5-脂氧合酶与缺血性脑损伤的病理生理过程有关,并且5-脂氧合酶和很多细胞因子、炎症介质相互作用。同时发现使用选择性的5-脂氧合酶抑制剂对缺血性脑损伤有保护作用。本文就近几年关于5-脂氧合酶及其抑制剂与缺血性脑损伤关系的研究进展作一综述。     

生物钟核心基因多态性与缺血性脑卒中疾病的关联性

目的 探索生物钟分子发条中核心时钟基因单核苷酸多态性ARNTL rs6486122、PER1 rs2253820与缺血性卒中发病的关联性。方法 采用SNaPshot法检测候选SNPs基因型。不同的基因型被当作分类变量,疾病组与对照组间基因型及遗传模型的比较采用Logistic回归分析,并校正年龄、性别、血脂异常、既往病史等相关危险因素,分别计算不同基因型及遗传模型的调整OR值和95%CI。结果 多因素Logistic回归分析显示,随着受试者年龄的增长脑卒中的患病风险显著增加（P<0.001,OR=6.704,95%CI 5.188～8.644）;高血压患者较非高血压患者的患缺血性脑卒中风险增加2.565倍（P<0.001,OR=2.565,95%CI 1.971～3.338）;血脂异常患者较血脂正常人群患缺血性脑卒中的风险增加1.700倍（P=0.001,OR=1.700,95%CI 1.230～2.348）;收缩压及舒张压增高,同样也会增加卒中的患病风险。对于PER1基因rs2253820位点,以野生纯合子TT基因型为参比,CT基因型,CC基因型以及显性遗传模型在增加脑卒...     

载脂蛋白D基因多态与散发性阿尔茨海默病的相关性

目的 通过检测载脂蛋白D基因(apolipoprotein D gene,ApoD)单核苷酸多态位点,探讨其与北方汉族人群散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer's disease,SAD)的相关性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)及直接测序筛查ApoD基因所有外显子及其两端内含子多态位点.选取等位基因频率大于10%的位点,利用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,采用病例-对照相关性研究方法 ,研究256例SAD患者以及294名健康人的ApoD多态位点与SAD发病的关系.同时对位点间的连锁不平衡及构建的单体型进行相关性分析.结果 ApoD第2号外显子存在T/C多态性(rs5952),第3号内含子(rs1568566)存在C/T多态性.ApoD rs5952 T/C和rs1568566 C/T等位基因频率和基因型频率在SAD组和对照组间的分布差异有统计学意义.Logistic回归分析表明携带rs5952C或rs1568566T等位基因分别增加SAD发病风险:校正后rs5952 χ2=9.282(P=0.002);rs1568566 χ2=5.072(P=0.024).进一步分析证实性别和ApoD多态性存在交互作用.rs5952-rs1568566位点间存在连锁不平衡.结论 北方汉族人ApoD基因存在第2号外显子rs5952和第3号内含子rs1568566 2个多态位点;ApoD多态可增加SAD发病风险;携带rs5952T或rs1568566C单体型可能对SAD的发病有一定的保护作用.     

白细胞介素-10启动子基因多态性与缺血性卒中相关性的Meta分析

目的 系统评价IL-10启动子基因（IL-10-1082A/G、IL-10-819T/C ）多态性与缺血性卒中（i s chemi c
stroke，IS）发病风险的相关性。
方法 计算机检索Pubmed、Embase、Web of Science、万方数据库及中国知网数据库发表的有关IL-10启
动子基因多态性与IS发病风险相关性的研究，检索时限为从建库至2019年2月，由2名评价者按照纳入
与排除标准选择研究、提取资料。采用RevMan 5.3软件进行荟萃分析。
结果 共纳入13篇病例对照研究，其中12篇文献研究了IL-10-1082A/G 基因多态性与I S的易感性，6
篇文献研究了IL-10-819T/C 基因多态性与I S的易感性。结果显示，在总体人群中，IL-10-1082A/G基因多
态性与I S发病风险之间存在相关性（G vs A：OR 0.71，95%CI 0.59～0.86，P＜0.001；GG vs AA：OR 0.61，
95%CI 0.49～0.76，P＜0.001；AG vs AA：OR 0.72，95%CI 0.55～0.94，P =0.020；GG+AG vs AA：OR 0.68，
95%CI 0.53～0.87，P =0.002；GG vs AG+AA：OR 0.68，95%CI 0.52～0.89，P =0.005）；而IL-10-819T/C
基因多态性与IS发病风险无明显相关性（P＞0.05）。对中国人群进行亚组分析后，Meta分析结果与总
体人群一致。
结论 IL-10-1082A/G基因的多态性与IS风险显著相关，该基因是卒中易感基因；而IL-10-819T/C基因
多态性与IS的发病风险无明显关联。     

白细胞介素-10启动子基因多态性与缺血性卒中相关性的Meta分析

目的 系统评价IL-10启动子基因（IL-10-1082A/G、IL-10-819T/C ）多态性与缺血性卒中（i s chemi c stroke,IS）发病风险的相关性。 方法 计算机检索Pubmed、Embase、Web of Science、万方数据库及中国知网数据库发表的有关IL-10启 动子基因多态性与IS发病风险相关性的研究,检索时限为从建库至2019年2月,由2名评价者按照纳入 与排除标准选择研究、提取资料。采用RevMan 5.3软件进行荟萃分析。 结果 共纳入13篇病例对照研究,其中12篇文献研究了IL-10-1082A/G 基因多态性与I S的易感性,6 篇文献研究了IL-10-819T/C 基因多态性与I S的易感性。结果显示,在总体人群中,IL-10-1082A/G基因多 态性与I S发病风险之间存在相关性（G vs A：OR 0.71,95%CI 0.59～0.86,P＜0.001;GG vs AA：OR 0.61, 95%CI 0.49～0.76,P＜0.001;AG vs AA：OR 0.72,95%CI 0.55～0.94,P =0.020;GG+AG vs AA：OR 0.68, 95%CI 0.53～0.87,P =0.002;GG vs AG+AA：OR 0.68,95%CI 0.52～0.89,P =0.005）;而IL-10-819T/C 基因多态性与IS发病风险无明显相关性（P＞0.05）。对中国人群进行亚组分析后,Meta分析结果与总 体人群一致。 结论 IL-10-1082A/G基因的多态性与IS风险显著相关,该基因是卒中易感基因;而IL-10-819T/C基因 多态性与IS的发病风险无明显关联。     

对氧磷酶1Q192R和L55M基因多态性与缺血性卒中再发的相关性研究

目的 分析对氧磷酶1 (paraoxonase 1,PON1)基因多态性与服用氯吡格雷后卒中再发之间的相关性.方法 从南京卒中注册系统中提取2008年5月至2010年4月首发缺血性卒中并长期服用氯吡格雷的患者.采用改良的多重高温连接酶检测反应技术对入选病例的PON1Q192R、PON1 L55M的单核苷酸基因多态性位点进行基因分型并随访,随访的主要终点事件包括缺血性脑血管事件、心肌梗死、血管性死亡;次要终点事件包括出血性血管事件.采用卡普兰-迈耶生存分析法探讨不同基因型患者终点事件的差异性.用单因素、多因素COX回归模型分析临床终点事件发生的相关危险因素.结果 共入组患者625例,平均随访期时间为(12.7±5.1)个月,其主要终点事件的发生率为13.6％ (85/625),其中再发卒中65例(10.4％),血管性死亡13例(2.1％),心肌梗死7例(1.1％).出血性事件发生13例(2.1％).PON1Q192R和PON 1L55M的最小等位基因频率分别为38.1％(238/625)和2.8％(17.5/625).携带QQ/QR的患者主要临床终点事件发生62例(15.7％),非携带者(RR)的主要终点事件发生23例(10.0％),组间差异有统计学意义(HR=1.68,95％ CI1.04～2.71,P=0.030).多因素COX回归模型纳入年龄、性别、体重指数、高血压、糖尿病、高脂血症、冠状动脉粥样硬化心脏病史、吸烟以及合并药物为相关危险因素,分析结果显示:PON1Q192基因型与缺血性卒中患者再发具有一定的相关性(HR =2.39,95％ CI 1.33 ～4.29,P=0.004).结论 在长期服用氯吡格雷抗血小板治疗的缺血性卒中患者中,PON1 Q192基因型携带者再发缺血性脑血管事件的风险明显增高,多因素分析提示PON1 Q192基因型与缺血性脑血管病患者再发具有一定相关性.     

脂蛋白脂酶Ser447Stop基因多态与脑梗死的相关性

目的 探讨脂蛋白脂酶(LPL)Ser447Stop基因多态与脑梗死的相关性.方法 受试者共883人,其中脑梗死组563例[包括动脉粥样硬化(AS)性脑梗死329例和腔隙性脑梗死234例],对照组320名,应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法,对LPL基因Ser447Stop位点进行基因多态性检测.结果 脑梗死组、AS性脑梗死组和腔隙性脑梗死组LPL Ser447Stop GG+CG基因型频率与对照组相比,差异无统计学意义,AS性脑梗死组G变异等位基因频率(64例,9.7%)与对照组(42例,6.6%)相比差异有统计学意义(X2=3.99,P=0.045).相对于C等位基因,G等位基因的彻值为1.510(95%C/1.012～2.261).结论 LPL Ser447Stop G变异等位基因携带者患AS性脑梗死的危险高于非携带者.G变异等位基因可能是AS性脑梗死高危险性的遗传标志之一.     

胆固醇酯转运蛋白基因多态性与阿尔茨海默病的关系

目的 探讨胆固醇酯转运蛋白（CETP）基因Taq1B、I405V和D442G3个单核苷酸多态性在散发阿尔茨海默病（sporadic Alzheimer disease，SAD）发病机制中的作用。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测了107例SAD患者和115名性别和年龄匹配的健康老年人CETP基因和载脂蛋白E（ApoE）基因多态性分布特征。结果 对照组的D442G杂合子频率显著高于SAD组（分别为9％和2％，OR=0．202，95％CI，0．043—0．958，P=0．044）；ApoE基因分层后，ApoEε4携带者的D442G杂合子在对照组的频率显著高于SAD组（分别为22％和0，P=0．042），但ApoEε4非携带者的D442G杂合子频率在两组间差异无统计学意义（分别为6％和2％，P=0．284）。结论 D442G突变可能是AD的独立保护性因素，这种保护性作用在ApoEε4携带者明显。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态与河南汉族人群缺血性脑血管病的相关性

目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)2个常见位点的突变与缺血性脑血管病发病的相关性.方法 选取病例组470例,对照组495名,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术和TaqMan-MGB探针分型方法进行基因分型.结果 病例组C677T突变的T等位基因突变频率为61.9%,对照组为45.1%,两组相比较差异有统计学意义(X~2=55.089,P＜0.01,OR=1.983,95%CI 1.653～2.378);病例组与对照组C677T多态基因型频率CC、CT、TT型分别为16.6%、43.0%、40.4%及36.6%、36.8%、26.7%,两组间比较CT型(X~2=3.882,P＜0.05,OR=1.296,95% CI 1.001～1.678),TT型(X~2=20.527,P＜0.01,OR=1.866,95%CI 1.423～2.448)分布差异均有统计学意义.病例组与对照组A1298C突变的C等位基因突变频率分别为13.1%和11.2%,基因型频率AA、AC、CC型分别为75.3%、23.2%、1.5%及78.2%、21.2%、0.6%,两组相比A1298C多态的等位基因频率和基因分型的差异均无统计学意义.结论 C677T突变与缺血性脑血管病的发生显著相关,可能是预测河南汉族人群缺血性脑血管病的风险因子,A1298C突变与河南汉族人群缺血性脑血管病无关.     

纤维蛋白原Bβ-455G/A、-854G/A、-1420G/A单核苷酸多态性与缺血性脑卒中的关系

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ启动子区-455G/A、-854G/A、-1420G/A3个单核苷酸多态性(SNP)与缺血性脑卒中(IS)的关系。方法应用病例对照分析和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对160例IS患者与130名健康对照组的FgBβ-455G/A、-854G/A、-1420G/A等位基因频率和基因型频率与IS之间的关系进行分析。结果IS组的FgBβ-455G/A SNP A位点的等位基因频率为0·3688,与对照组的A位点的等位基因频率0·2538差异有统计学意义(P<0·01),IS组-455位点的基因型频率(GG:33·8%,GA:58·8%,AA:7·5%)与对照组的基因型频率(GG:55·4%,GA:38·5%,AA:6·2%)差异有统计学意义(P=0·01),IS组中-455位点的GA AA基因型频率(66·3%)高于对照组的GA AA频率(44·6%,P=0·001);在高血压分层分析后-455位点的A等位基因频率和GA AA基因型频率在病例组和对照组之间差异有统计学意义,在两组间-854G/A、-1420G/A的基因型和等位基因频率的差异无统计学意义。结论FgBβ-455G/A位点与IS有关联,可能是IS的独立危险因素,-854G/A、-1420G/A与IS无关联。     

对氧磷酶1基因多态性与缺血性脑卒中的关联研究

目的探讨对氧磷酶1(PON1)基因的rs2299262标签位点(tag SNP)多态性与缺血性脑卒中的相关性。方法本研究共纳入705例缺血性脑卒中患者和406例对照组人群,按TOAST分型标准,分为动脉粥样硬化性脑梗死406例、腔隙性脑梗死299例。以位于PON1基因的rs2299262位点为遗传标记,采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测PON1基因的多态性。结果缺血性脑卒中组、动脉粥样硬化性脑梗死组、腔隙性脑梗死组和对照组的PON1基因型及等位基因频率与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。经性别分层后也未见显著差异。结论PON1基因与缺血性脑卒中的发病可能无关。     

Association of E-selectin gene polymorphisms with ischemic stroke in a Chinese Han population

The E-selectin gene, a member of the selectin superfamily of adhesion molecules, plays an important role in the pathogenesis of thrombovascular diseases. The present study was designed to investigate the potential relationship between E-selectin gene polymorphisms and ischemic stroke in a Chinese Han population. Three hundred fourteen ischemic stroke patients and 389 unrelated healthy controls were recruited for the study. Three single-nucleotide polymorphisms (SNPs)-rs1805193(G98T), rs5361(A561C), and rs5355(C1839T)-in the exon region of the E-selectin gene, were genotyped using a Multiplex SNaPshot sequencing assay. The data showed that the genotype and allele frequencies of G98T and C1839T SNP were similar in both ischemic stroke patients and the controls. In contrast, the frequency of both the AC genotype and the C allele of A561C was significantly higher in ischemic stroke patients than in healthy controls (P = 0.001, P < 0.001, respectively). After adjusting for other risk factors (such as hypertension, diabetes, tobacco smoking, and alcohol consumption), the E-selectin gene AC genotype and C allele of A561C were still associated with a risk of ischemic stroke (odds ratio [OR] = 2.73, 95% confidence interval (CI): 1.29-5.76, P = 0.008; OR = 2.80, 95% CI: 1.58-4.94, P < 0.001, respectively). Our current study demonstrates that the E-selectin SNP A561C is associated with increased risk for the development of ischemic stroke in this subset of the Han Chinese population.