PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞外基质积聚的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物（AGEs）引起的大鼠肾系膜细胞细胞外基质积聚的影响。方法：体外培养正常大鼠肾系膜细胞,分别用糖化牛血清白蛋白（AGEs）及未经糖化的牛血清白蛋白（BSA）处理,检测不同浓度AGEs(0、12.5、25、50、100及200 mg·L^-1)对肾系膜细胞条件培养基纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原含量的影响及不同浓度罗格列酮(0、1.25、2.5、5及10 mmol·L^-1)对AGEs（100 mg·L^-1）引起的Ⅳ型胶原及FN积聚的影响。ELISA测定肾系膜细胞条件培养基中FN和Ⅳ型胶原蛋白含量,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测系膜细胞PPAR-γ mRNA的表达。结果：大鼠系膜细胞有PPAR-γ mRNA的表达;与相应浓度的BSA比较,AGEs（12.5～200 mg·L^-1）可不同程度地刺激系膜细胞FN和Ⅳ型胶原的产生(P<0.01);给予PPAR-γ激活剂(1.25～10 mmol·L^-1)可明显减轻AGEs(100 mg·L^-1)引起的Ⅳ型胶原含量增加(P<0.01)。结论：PPAR-γ激活可以明显减轻AGEs引起的Ⅳ型胶原积聚。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1 (IGF -1)表达的影响及其与细胞外基质（ECM）成分含量的关系。方法：体外培养正常大鼠肾系膜细胞，分别用不同浓度（0、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg•L^-1）糖基化牛血清白蛋白（AGEs）处理，相应浓度未经糖化的牛血清白蛋白（BSA）作为对照，ELISA法检测纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原及IGF-1含量。结果：与相应浓度的BSA组比较，12.5～200.0 mg•L^-1 AGEs组FN含量明显升高（P<0.01），100.0～200.0 mg•L^-1 AGEs组Ⅳ型胶原含量明显升高（P<0.01），25.0～100.0 mg•L^-1 AGEs组IGF-1蛋白含量明显升高（P<0.01），200.0 mg•L^-1 AGEs组IGF-1含量无明显变化。结论：AGEs引起的细胞外基质积聚可能在一定范围内与IGF-1上调有关。     

糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶-2活性的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)和氨基胍(AG)对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的影响.方法:正常雄性Wistar大鼠23只,随机分为4组,AGE-修饰大鼠血清蛋白(AGE-RSP)组 (n=6)每日尾静脉注射AGE-RSP,AGEs+AG组(n=6)同时腹腔注射AG,天然血清组(n=6)注射天然大鼠血清蛋白,空白对照组(n=5)不施加处理,连续注射4周后,用ELISA法测定肾皮质AGEs含量,酶谱法检测肾皮质MMP-2活性.结果:与天然血清组及空白对照组比较,注射AGE-RSP的大鼠肾皮质AGEs含量明显增加,活性形式的MMP-2活性明显降低(P<0.05),而同时注射AG的大鼠MMP-2活性明显增加(P<0.05).结论:AGEs能降低大鼠肾皮质MMP-2活性,AG可抑制AGEs对MMP-2活性的影响,提示AGEs通过降低MMP-2活性减少肾小球细胞外基质(ECM)降解,可能是导致ECM积聚的原因之一.     

糖基化终产物对人肾系膜细胞MMP-2表达的影响

目的：观察糖基化终产物（advanced glycosylation end products,AGEs）对人肾系膜细胞（human renal mesangial cell,HRMC）基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase,MMP-2）表达的影响。方法：运用糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）干预体外培养的HRMC,Western blot检测系膜细胞MMP-2蛋白表达。结果：HRMC的MMP-2蛋白表达水平随AGE—BSA浓度增加和干预时间延长而降低（P〈0．01）。结论：MMP-2可能参与AGEs所致的糖尿病肾病的发生发展。     

异氟醚对大鼠认知功能及海马高级糖基化终末产物受体表达的影响

目的 观察异氟醚对大鼠海马高级糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)表达及认知功能的影响.方法 SD雄性老年大鼠(24月龄)45只,SD雄性成年大鼠(4月龄)45只,随机数字表法分为6组(n=15),老年对照组(C1组),成年对照组(C2组):吸入30%氧气的空氧混合气体对照;老年异氟醚单次吸入组(S1组),成年异氟醚单次吸入组(S2组):1.5%异氟醚单次吸入2h;老年异氟醚多次吸入组(R1组),成年异氟醚多次吸入组(R2组):1.5%异氟醚吸入3次,1次/d,2h/次.各组大鼠吸入处理后1d取8只行Morris水迷宫进行认知功能测试,其余大鼠处死取海马,RT-PCR方法测定RAGE mRNA水平,免疫组织化学方法测定RAGE蛋白表达.结果 各组大鼠吸入处理过程中生命体征平稳,血氧饱和度及心率均在正常范围.C1组穿越平台次数为(7.30±2.40)次,探索时间为(49.90±6.22)s,S1、R1组与C1组相比穿越平台的次数减少[穿越平台次数分别为S1(3.90±2.42),R1(3.44±2.40),F=7.448,P<0.01],探索时间缩短[探索时间分别为S1(43.33±7.08)s,R1(39.09±4.56)s,F=7.63,P<0.05],而逃避潜伏期延长(P<0.05).R2组较C2组逃逸潜伏期延长[逃逸潜伏期分别为R2(14.65±3.83)s,C2(7.84±2.51)s,F=12.773,P<0.01],探索时间缩短(均P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01).S2组与C2组比较,空间探索时间与穿越平台次数均未见显著统计学差异(P>0.05);RAGE表达:与C1组比较S1、R1组mRNA表达水平增高[mRNA表达分别为c1(0.11±0.02),S1(0.56±0.09),R1(0.73±0.14)F=169.447,P<0.01],免疫组化阳性细胞颗粒数增多(P<0.01),S1组与R1组比较蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与C2组比较,S2组mRNA水平及蛋白表达未见明显差异(P>0.05),但R2组mRNA及免疫组化阳性细胞表达增高,与C2组比较差异有显著意义(均P<0.01).结论 异氟醚导致不同月龄大鼠认知功能改变,尤其对老年大鼠影响显著,可能与海马RAGE表达上调有关.     

依贝沙坦对糖基化终产物诱导的肾系膜细胞增殖的影响

目的观察依贝沙坦对糖基化终产物（AGEs）干预的人肾小球系膜细胞（HRMC）增殖的影响。方法用4-甲基偶氮四唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法观察AGEs对HRMC的增殖作用，以及不同作用时间和不同浓度依贝沙坦对这种增殖作用的影响，并通过流式细胞仪检测细胞周期变化。结果依贝沙坦在一定范围内以时问依赖和剂量依赖关系抑制糖基化终产物诱导的肾小球系膜细胞过度增生，并使G0～G1期细胞比例增高。S期细胞数减少。结论依贝沙坦能够抑制AGEs诱导的HRMC增生。这种作用可能是通过抑制细胞分裂、复制实现的。     

糖基化终产物对人肾系膜细胞趋化因子RANTES表达的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对人肾系膜细胞(HRMC)趋化因子RANTES表达的影响.方法 常规方法制备糖基化终产物(AGEs-BSA),干预体外培养的HRMC,收集培养上清和细胞,ELISA法检测上清中RANTES浓度,实时定量RT-PCR检测RANTES mRNA表达水平,Western blot检测RANTES蛋白表达,分别设立同浓度的BSA组及空白对照组作为对照.结果 AGEs-BSA干预组HRMC RANTES mRNA和蛋白表达水平及上清中RANTES浓度明显高于对照组,并存在浓度和时间依赖效应.结论 AGEs-BSA上调HRMC RANTES表达和分泌,可能参与糖尿病肾病的发生.     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞eNOS活性和表达的影响

目的　研究糖基化终产物 (AGEs)对内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的活性及蛋白表达的影响。方法　用糖孵育法制备糖基化修饰的牛血清白蛋白 (AGE BSA) ,用胶原酶法分离培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。将内皮细胞与不同浓度的AGE BSA在体外分别培养 3 ,6,12 ,2 4,48h ,用同位素二步色谱法检测基础状态下与组胺刺激后的eNOS活性 ,用蛋白免疫印迹法 (Western blotting)检测eNOS蛋白表达水平。结果　基础状态下 ,HUVECs的eNOS有部分激活 ,组胺刺激后eNOS活性明显增加 (P <0 .0 0 1)。AGE BSA明显抑制基础状态下的eNOS活性和组胺刺激后的eNOS活性增高(P <0 .0 0 1) ,这种抑制作用呈时间、浓度依赖性。AGE BSA与HUVECs共同孵育 2 4h后的eNOS表达水平明显降低 (P <0 .0 0 1) ,且随着孵育时间的延长 ,eNOS表达水平进一步降低 (P <0 .0 5 ,48hvs 2 4h) ,这种抑制作用与AGE BSA的浓度有关。结论　AGE BSA明显抑制eNOS基础状态和组胺刺激后的活性增高 ,AGE BSA明显抑制HUVECs的eNOS表达 ,AGE BSA对eNOS活性的抑制作用可能与降低eNOS表达有关。     

糖基化终末产物对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响,探讨AGEs与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法分别以不同浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理SH-SY5Y细胞48 h,选取AGE-BSA敏感浓度(200μg/mL)处理细胞不同时间,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,确定AGE-BSA诱导SH-SY5Y凋亡最佳浓度及时间。将细胞随机分为对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组、AGE-BSA+α-硫辛酸组、AGE-BSA+DPI(NADPH氧化酶抑制剂)组。FCM检测细胞凋亡率变化,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,Western blot测定Caspase-12的表达。结果细胞凋亡率随AGE-BSA浓度增加及作用时间延长而升高,200μg/mL AGE-BSA作用48 h细胞凋亡率从对照组的(2.23±0.08)%增加到(16.8±1.27)%(P<0.05),同时,Hoechst染核后可见典型凋亡形态改变,细胞内ROS水平显著增高,Caspase-12蛋白表达明显上调,与对照组相比差异显著(P<0.05),而分别用抗RAGE中和抗体、α-硫辛酸、DPI预处理后再加入AGE-BSA,各组与AGE-BSA组比较,凋亡率明显下降,ROS水平、Caspase-12蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论糖基化终末产物可刺激SH-SY5Y细胞产生大量ROS及活化Caspase-12介导细胞凋亡,通过阻断其与特异性受体RAGE结合或减少细胞内ROS可减轻细胞凋亡的发生。     

贝那普利对自发性高血压大鼠糖基化终末产物形成及肾脏损伤的抑制

目的 探讨自发性高血压大鼠肾脏AGEs-RAGE系统、信号转导系统及细胞因子水平的变化,并研究贝那普利对其的影响。方法 将24只SHR随机分为对照组(SHR组)和贝那普利组,12只Wistar京都大鼠为WKY组。SHR组和WKY组每天用等量蒸馏水灌胃1次;贝那普利组将贝那普利［10mg/(kg·d)］ 研成粉末,加等量蒸馏水每天灌胃1次,12周后测定肾皮质Ang II水平及24h尿蛋白,计算肾小球硬化指数;检测肾脏晚期糖基化终末产物(AGE)、VCAM-1、NF-κB 及NADPH oxidase p47phox的表达。结果 与WKY组比较,SHR组肾皮质Ang II水平及24h尿蛋白、肾小球硬化指数显著升高(P<0.01),AGE、VCAM-1、NF-κB 及NADPH oxidase p47phox的表达显著增强(P<0.01);与SHR组比较,贝那普利组肾皮质Ang II水平及24h尿蛋白、肾小球硬化指数显著降低(P<0.01),AGE、VCAM-1、NF-κB 及NADPH oxidase p47phox的表达显著减弱(P<0.01)。结论 高血压肾脏氧化应激反应增强, AGEs与RAGE结合使NF-κB活化,增加VCAM、NADPH oxidase p47phox的表达,加速肾脏损害。贝那普利通过抑制氧化应激及AGEs表达,进一步抑制NF κB及生长因子的表达,改善高血压肾脏损害。     

糖基化终末产物对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ mRNA表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠20只随机分为4组(每组5只)，AGEs组 (给予AGEs同时尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白)，AGEs+AG组［给予AGEs同时腹腔注射氨基胍（AG)］，天然血清组(注射天然大鼠血清蛋白)和空白对照组（不施加处理的正常大鼠)。各组大鼠每日注射1次，连续注射6周，RT-PCR 检测PPAR-γ mRNA 表达水平。结果：各组大鼠肾皮质均有PPAR-γ表达；与天然血清组及空白对照组比较，AGEs组大鼠肾皮质PPAR-γ　mRNA表达明显降低 （P＜0.01）, 而同时注射AG的大鼠PPAR-γ mRNA表达水平无明显降低。结论：大鼠肾皮质表达PPAR-γ；AGEs能降低大鼠肾皮质PPAR-γmRNA的表达水平，提示AGEs可能通过对肾脏保护性因子PPAR-γ的影响参与糖尿病肾病的发病机制。     

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素-3基因表达的影响

目的:研究糖基化终产物(AGEs)对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素-3(galectin-3)表达的影响。方法:将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)用不同浓度(50、100、200及400 mg.L-1)的AGEs干预24 h或同一浓度(200 mg.L-1)的AGEs干预0、24、48及72 h,以无血清培养基(DMEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照。用RT-PCR检测细胞中半乳糖凝集素-3的mRNA水平。结果:不同浓度AGEs组HRMC的半乳糖凝集素-3 mRNA水平与对照组相比均有显著差异(P<0.01),且随着AGEs浓度的增高,半乳糖凝集素-3 mRNA水平也逐渐增高(P<0.05);AGEs干预HRMC 24、48、72 h,半乳糖凝集素-3mRNA水平与对照组相比有显著差异(P<0.05),且随着干预时间的延长,半乳糖凝集素-3 mRNA水平也逐渐增高(P<0.01)。结论:AGEs以时间及剂量依赖的方式促进HRMC半乳糖凝集素-3 mRNA的表达。     

糖基化终产物诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达的规律

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响。 方法：在体外培养的大鼠肾系膜细胞培养基中,分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）及牛血清白蛋白（BSA）,RT-PCR法检测细胞转化生长因子β₁ (TGF-β₁)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA表达。 结果：与加入BSA组比较,AGE-BSA组TGF-β₁和CTGF mRNA表达明显增强（P<0.01）,TGF-β₁ mRNA表达增强发生时间早于CTGF。 结论：AGEs能明显诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达上调,并且具有时间和剂量依赖性。     

高级糖化终末产物及其受体的研究进展和临床意义

目的了解高级糖化终末产物(AGEs)及其受体的研究现状与疾病的关系。方法查阅近年来国内外相关文献加以综合分析。结果AGEs及其受体的研究已达到信息分子和基因水平,并与很多的疾病发生有关。结论AGEs在体内过度积累与其受体的过度表达均可引起疾病。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠肾脏晚期糖基化终产物及其受体表达的影响

目的观察厄贝沙坦对糖尿病肾病（DN）大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGEs）表达的影响,探讨其对DN的肾保护作用机制。方法应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组：DN模型对照组、厄贝沙坦组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察24h尿蛋白定量、血清和肾组织AGEs含量变化,免疫组化法检测肾组织RAGEs的表达,RT-PCR法检测肾组织RAGEs mRNA的表达,光镜观察肾脏病理改变。结果应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量、血清及肾组织AGEs含量明显减少,肾组织RAGEs含量及其mRNA表达水平明显降低,肾脏病理改变显著减轻。结论厄贝沙坦对DN的肾保护作用机制与降低血清、肾组织AGEs水平以及肾组织RAGEs含量,抑制肾组织RAGEs mRNA表达有关。