LRIG1抑制人脑胶质瘤细胞增殖的研究

目的探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分别构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2和胶质细胞源性生长因子（BDMF）的质粒,将它们分别转染到人脑胶质瘤细胞系U251细胞内,应用细胞计数试剂盒8法检测细胞活性的变化,蛋白印迹法检测LRIG1、Bcl2、拓扑异构酶Ⅱ（topoⅡ）、GDNF的表达变化。结果成功构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2、GDNF的质粒,并成功转入U251细胞株。过表达LRIG1显著抑制U251细胞增殖。蛋白印迹法结果显示LRIG1的表达和Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达呈显著负相关。结论LRIG1通过负性调节Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞的增殖。     

内皮抑制素在胶质瘤基因治疗中的应用

胶质瘤恶性程度高,当前多种治疗方法效果欠佳。而胶质瘤是一种富血管的实体肿瘤,适于抑制直管生成治疗。内皮抑制素是第一种进入临床试验的内源性抗血管生成因子,通过特异性的抑制血管内皮细胞增殖、移行等,抑制肿瘤内新生血管的形成,从而使肿瘤生长受抑制。内皮抑制素在体内降解快,半衰期短,且疗程长,用量大,重组内皮抑制素价格昂贵,故治疗费用高。而应用基因治疗技术,使机体体内持续产生内皮抑制素,从而抑制肿瘤生长。本文主要介绍目前内皮抑制素在胶质瘤基因治疗中研究情况,包括载体及其途径的选择。     

人脑胶质瘤中cyclin E的表达及其对细胞增殖活性的影响

目的研究人脑胶质瘤中细胞周期素E(cyclin E)表达与胶质瘤细胞恶性程度及细胞增殖活性的关系.方法采用免疫组化方法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织标本中cyclin E和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平,观察并分析各病理等级中两者表达的阳性率和标记指数.结果正常脑组织中无cyclin E或PCNA表达.随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin E的阳性率和平均标记指数均明显升高,在高、低度恶性度肿瘤之间也存在明显差异(P<0.05).双元相关性分析发现cyclin E与PCNA的平均标记指数呈明显正相关(Pearson相关系数r=0.576,P<0.01).结论人脑胶质瘤中cyclin E的表达与细胞增殖活性和病理学分级关系密切,很可能对肿瘤细胞的增殖和恶性转化产生重要的推动作用.     

五味子总木脂素对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的观察不同浓度五味子总木脂素对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞生长的影响。方法体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞,采用MTT方法,检测不同浓度五味子总木脂素作用24、48、72h时,对其生长的影响。结果五味子总木脂素浓度在25μg/ml时抑制细胞生长不明显;在24h时,药物浓度在100μg/ml(P<0.05)和200μg/ml(P<0.01)表现为抑制作用;在48h和72h时,50、100、200μg/ml抑制作用都很明显(P<0.01)。结论高浓度五味子总木脂素对体外培养C6细胞的生长起到了抑制作用,提示五味子总木脂素可能在治疗脑胶质瘤方面发挥一定作用。     

瘤内注射树突状细胞对C6胶质瘤抑制作用的实验研究

目的通过构建SD大鼠脑胶质瘤模型,成瘤后瘤内注射树突状细胞,探讨树突状细胞对C6胶质瘤的抑制和诱导凋亡作用。方法 30只SD大鼠脑内注射C6细胞,成瘤后随机分3组。A组:沿原注射部位瘤内注入10μL培养液。B组:同法注入10μL含106个未成熟DC的培养液。C组:同法注入10μL含106个成熟DC的培养液。分析3组大鼠的生存时间;取不同组大鼠的脑内肿瘤,制作冰冻病理切片,染色后镜下观察;肿瘤组织制成细胞悬液后细胞爬片,免疫组化检测Fas在C6胶质瘤细胞中的表达,计算积分光密度值。结果 (1)生存时间:C组载瘤大鼠生存时间长于A、B 2组,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)肿瘤病理结果:C组肿瘤组织大片坏死区,B组小片坏死区,A组无明显坏死区。(3)免疫组化:Fas表达,细胞积分光密度值(IOD),C组明显高于A、B组。结论成熟DC可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,途径之一可能是增强抗原提呈,提高细胞Fas的表达。     

阻断STAT3磷酸化对人脑胶质瘤体外增殖抑制的实验研究

目的 研究磷酸化STAT3抑制剂Cucurbitacin Ⅰ阻断STAT3信号转导通路对人脑胶质瘤细胞系A172增殖和凋亡的影响并探讨机制.方法 使用Cucurbitacin Ⅰ处理人脑胶质瘤细胞系A172,CCK-8方法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3磷酸化水平,RT-PCR检测STAT3下游基因C-myc、Survivin和Mcl-1的mRNA水平的改变.结果 Cucurbitacin Ⅰ作用于A172后,细胞增殖速度明显下降(P＜0.05);细胞凋亡比率显著升高;Western blot结果显示A172细胞中磷酸化STAT3(p705-STAT3)蛋白水平明显降低;C-myc、Survivin和Mcl-1在mRNA水平明显下降(P＜0.05).结论 阻断STAT3信号转导通路可抑制脑胶质瘤细胞增殖,促进其凋亡;靶向STAT3信号转导通路的治疗策略可以作为胶质瘤治疗的一种新方法.     

人脑胶质瘤中髓系衍生抑制细胞的分布及其意义

目的探讨胶质瘤患者的髓系衍生抑制细胞（MDSC）手术前后在外周血中及肿瘤组织中的分布情况及其和肿瘤分级的相关性。方法用流式分析术检测25例胶质瘤患者手术前外周血,6例肿瘤组织,5例手术1个月后未进行化疗外周血,8例正常成人外周血,6例颅脑外伤患者行内减压术所得脑组织中MDSC的分布。结果①MDSC在胶质瘤患者外周血中的分布较正常人明显增加;MDSC在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤患者外周血中分布情况较Ⅰ、Ⅱ级患者外周血中明显增加,且分布情况和肿瘤级别成线性关系;②肿瘤经手术治疗后体积的改变（镜下全切或次全切）可以影响MDSC在外周血中的分布比例;③MDSC在胶质瘤组织中的分布与正常脑组织相比无明显增高。结论人脑胶质瘤中MDSC的分布为胶质瘤免疫治疗提供了思路和基础。     

人脑胶质瘤间质内化疗研究进展

间质内化疗可避开血脑屏障 ,减少全身用药的毒副作用而大大提高肿瘤局部的药物浓度 ,达到对人脑胶质瘤良好的化疗效果。目前研究较多的是生物分解型多聚体缓释剂瘤腔内给药技术 ,其特点是其分子间有一定的空间结构 ,药物可被储存于其中 ,在体内化疗药物随多聚物的缓解而缓慢释放 ,并可通过改变多聚物的分子量或交联度来控制化疗药物的释放速度。一系列的实验和临床研究表明 ,间质内化疗对胶质瘤具有良好的疗效 ,显示出良好的应用前景。     

EGFR反义RNA抑制人脑恶性胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)反义RNA对抑制胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法:将互补于EGFR 3′端部分序列的反义cDNA转染胶质瘤细胞,检测其生长率、增殖活性、EGFR mRNA及其蛋白表达和细胞凋亡。结果:胶质瘤细胞转染EGFR反义RNA后生长率及增殖活性下降,EGFRmRNA及蛋白表达减低,出现大量细胞凋亡。结论:EGFR有可能成为胶质瘤基因治疗的候选基因。     

FRK通过抑制ERK信号通路对脑胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的研究FRK是否通过抑制ERK信号通路进而影响脑胶质瘤细胞的增殖。方法应用PolyJet~(TM)将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中,Western blot(WB)检测转染效率及P-ERK、ERK蛋白水平的变化,EDU实验观察脑胶质瘤细胞增殖能力的变化;用ERK抑制剂PD98059处理U251细胞,WB检测细胞中FRK、P-ERK、ERK的蛋白水平,EDU实验检测脑胶质瘤细胞增殖能力的变化。结果 WB检测显示FRK质粒转染成功,过表达FRK使U251细胞增殖能力降低。过表达FRK降低了P-ERK的蛋白水平,但对ERK总蛋白水平无影响。与对照组相比,ERK抑制剂PD98059组P-ERK的蛋白水平明显降低,但对FRK的蛋白水平无明显影响。ERK抑制剂PD98059处理后,脑胶质瘤U251细胞增殖能力明显降低。结论 FRK可以通过抑制ERK的活性,从而降低脑胶质瘤细胞的增殖。     

胶质瘤细胞对神经干细胞增殖影响的初步研究

目的初步探讨几种胶质瘤细胞上清液对神经干细胞增殖的影响。方法取胎鼠全脑原代培养神经干细胞并行免疫荧光鉴定；复苏几种胶质瘤细胞获取上清液；上清液与干细胞培养液混合培养神经干细胞后MTT法作生长曲线并行电镜切片观察。结果原代培养获得神经干细胞；混合培养液培养后的神经干细胞增殖较对照组快，电镜观察可见核质比增高，细胞器发达。结论胶质瘤上清液对神经干细胞的增殖具有一定的促进作用。     

抑制Hedgehog信号通路对人脑胶质瘤肿瘤干细胞体外增殖的影响

目的 探讨抑制Hedgehog信号通路对人脑胶质瘤肿瘤干细胞（GSCs）体外增殖的影响。方法 收集我院手术切除的胶质母细胞瘤标本,进行分离、培养和鉴定GSCs,应用环靶明抑制Hedgehog信号通路,采用免疫组化染色检测GSCs Hedgehog信号通路相关蛋白的表达,使用CCK-8试剂盒测定GSCs的增殖活性。结果 胶质母细胞瘤标本分离出来的细胞球表达CD133及Nestin;而且表达Hedgehog信号通路关键蛋白Sonic Hedgehog和Smo。环靶明对GSCs增殖的抑制率随浓度的升高显著增高（P<0.05）,而且随作用时间延长显著增高（P<0.01）。结论 Hedeghog信号通路的特异性抑制剂环靶明能够显著抑制体外培养GSCs的增殖。     

Survivin拮抗肽对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响

目的探讨Survivin拮抗肽对人胶质瘤U251细胞体外增殖的抑制作用及细胞周期的影响。方法将U251细胞与不同浓度的Survivin拮抗肽进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的Survivin拮抗肽对U251细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪分析细胞周期与细胞凋亡。结果浓度为5、10、20ug／ml的Survivin拮抗肽均能抑制U251细胞的生长,且抑制率与Survivin拮抗肽浓度及作用时间成正比（P〈0．01）。20ug/ml Survivin拮抗肽作用U251细胞72h,抑制率达63．33％。流式细胞仪结果显示,终浓度为5、10、20ug／ml Survivin拮抗肽亦能促进U251细胞凋亡,且随作用浓度增大及作用时间延长凋亡率明显上升（P〈0．01）;20ug／ml Survivin拈抗肽作用U251细胞72h,凋亡率为31．29％。不同浓度的Survivin拮抗肽作用U251细胞72h,随作用浓度增大,G2/M期细胞构成比明显上升（P〈0．01）。结论Survivin拮抗肽对U251细胞增殖具有抑制作用和促进凋亡,其抗胶质瘤细胞增殖作用机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡,调控肿瘤细胞周期。     

microRNA-490-3p抑制胶质瘤增殖及凋亡的作用研究

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,观察miR-490-3p对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测16例胶质瘤样本、胶质瘤旁组织及4种胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达;利用人工合成miR-490-3p mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞株,qRT-PCR检测细胞中miR-490-3p的表达水平;采用MTT比色法检测胶质瘤细胞增殖情况;流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系显著降低,miR-490-3p mimic能够显著上调胶质瘤细胞株中miR-490-3p的表达水平,并显著抑制胶质瘤细胞株U251、U87细胞的增殖能力显著增加细胞凋亡数量;结论 miR-490-3p在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中呈现低表达,过表达miR-490-3p有效抑制了胶质瘤细胞株的增殖,增加凋亡,提示miR-490-3p可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

下调HOXA5表达对胶质瘤细胞增殖能力和细胞周期的影响

目的 探讨下调同源异型盒基因A5（HOXA5）表达对胶质瘤细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法 应用生信分析方法,计算机检索CGGA数据库,下载mRNAseq-693和mRNAseq-325芯片数据,获取低级别胶质瘤（WHO分级Ⅱ级）和高级别胶质瘤（WHO分级Ⅲ、Ⅳ级）HOXA5 mRNA表达及病人生存信息;以HOXA5表达水平的平均值为界限,将高级别胶质瘤分为低表达组和高表达组。体外培养人胶质瘤细胞株U87和U251,使用Lipofectamine 2000法将HOXA5 siRNAs和阴性对照siRNAs分别转染U87和U251细胞;CCK-8和平板克隆形成实验评估胶质瘤细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果 生信分析结果显示:高级别胶质瘤HOXA5表达水平均显著高于低级别胶质瘤（P<0.01）;HOXA5高表达组高级别胶质瘤病人中位生存时间较低表达组明显缩短（P<0.01）。体外细胞实验结果:敲低HOXA5表达,U87和U251细胞的增殖率和克隆集落数量显著降低（P<0.01）,U87和U251细胞G0/G1期细胞百分比显著增高（P<0.01）,U87和U251细胞CDK4蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论 胶质瘤HOXA5呈高表达,病理级别越高,表达水平越高,病人生存预后越差。敲低HOXA5表达,明显降低CDK4表达,使细胞周期停滞在G0期,明显抑制胶质瘤细胞的增殖。     

长链非编码RNA PVT1对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响

目的 探讨长链非编码RNA PVT1（lncRNA-PVT1）对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法 体外培养胶质瘤细胞系U251细胞,分别转染PVT1 siRNA（PVT1组）和negative control siRNA（对照组）。PCR法检测lncRNA-PVT1及C-MYC mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot检测C-MYC蛋白表达水平。结果 PVT1组lncRNA-PVT1 mRNA表达水平（0.27±0.08）较对照组（1.0±0.30）明显降低（P<0.05）;PVT1组C-MYC mRNA表达水平（0.87±0.19）与对照组（1.0±0.15）无明显差异（P>0.05）。转染siRNA后1、2、3 d,PVT1组U251细胞活力较对照组均明显降低（P<0.05）。PTV1组C-MYC蛋白表达水平（0.29±0.12）较对照组（0.85±0.27）明显降低（P<0.05）。结论 降低lncRNA-PVT1表达水平能够抑制U251细胞增殖,其机制可能与lncRNA-PVT1够影响C-MYC蛋白的表达水平有关。     

Hax-1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用

目的 探讨造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(Hax-1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 选择2018年9月至2019年6月手术切除并得到术后病理证实的胶质瘤组织35例和颅脑损伤内减压术切除的正常脑组织35例,采用qRT-PCR检测Hax-1 mRNA水平;同时检测胶质瘤细胞系(U87、A172、T98及U34...     

人类重组肝细胞生长因子对人胶质瘤U251细胞系增殖及侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子（rhHGF）对人胶质瘤U251细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养U251细胞；用10、20、30μg，L不同浓度rhHGF作用U251细胞48h，以倒置相差显微镜观察、MTT法检测rhHGF对U251细胞增殖的影响；以过河实验、粘附测定、免疫组化法及Western blot检测rhHGF对U251细胞的侵袭力和对增殖细胞核抗原（PCNA）、钙粘素（E-cadherin）表达的影响。结果rhHGF可明显增加U251细胞的增殖和生长，且随浓度提高作用增强，呈剂量效应关系。过河实验、粘附实验显示rhHGF能增强U251细胞的体外侵袭和运动能力，随浓度提高，过河时间缩短，细胞粘附力增加（P〈0．05）。Western blot及免疫组化测定显示rhHGF作用48h后，U251细胞PCNA表达上升，E-cadherin表达下降（P〈0．05）。结论rhHGF可促进人胶质瘤U251细胞的生长和增加其体外侵袭能力，推测其机制与直接增加U251细胞迁移运动，干扰U251细胞PCNA、E-cadherin蛋白表达有关。     

塞来昔布联合替莫唑胺对胶质瘤U251细胞作用研究

目的探讨环氧合酶抑制剂塞来昔布联合抗肿瘤药物替莫唑胺对神经胶质瘤细胞系U251细胞的体外抗瘤效应及其可能机制。方法分别使用塞来昔布、替莫唑胺和两者联合用药干预U251细胞;显微镜下观察细胞形态学变化;以甲基噻唑基四唑比色法检测药物对U251细胞增殖的影响;细胞划痕实验观察药物对U251细胞迁移能力的影响;采用膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶双染色通过流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞凋亡的影响;Western Blot法检测药物对U251细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。结果药物处理后,U251细胞出现明显的形态学改变,以联合用药组细胞最为显著;当塞来昔布与替莫唑胺联合应用时,显著增强替莫唑胺对U251细胞增殖的抑制效应,抑制细胞迁移,并促进其凋亡;塞来昔布和替莫唑胺联合作用后,U251细胞Bax表达增高、Bcl-2表达降低。结论塞来昔布和替莫唑胺联合应用可以协同抑制肿瘤细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡;其促进细胞凋亡的机制可能与Bax表达的上调以及Bcl-2表达的下调有关。