Vk3对宫颈癌Hela细胞mTOR信号转导蛋白基因表达的影响

目的：观察维生素K3（Vk3）对Hela细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其底物p70S6激酶(p70S6K)α1、α2、β1、β2和细胞周期素D1（cyclin D1）mRNA表达的变化及N-乙酰半胱氨酸 (NAC)对mTOR及其底物的影响,探讨mTOR信号转导蛋白在人宫颈癌的发生、发展过程中的作用。方法：实验分为对照组(Con)、Vk3处理组（Vk3）、Vk3与NAC联合作用（Vk3+NAC）组及NAC单独应用组(NAC),MTT法检测各组Hela细胞存活率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组Hela细胞中mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、 p70S6K-β2及cyclin D1 mRNA表达。结果：与Con组比较,Vk3组Hela细胞存活率显著降低（P<0.01）,mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、p70S6K-β2及cyclin D1 mRNA表达量均明显下降（P<0.05）;而与Vk3组比较,Vk3+NAC组Hela细胞存活率显著增加（P<0.01）,上述指标mRNA表达量均明显增加（P<0.05）。结论：Vk3通过其氧化应激作用抑制Hela细胞的增殖,其机制与降低mTOR信号转导蛋白及cyclin D1的基因表达有关。     

维生素K3诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤中Bcl-2和Bax表达的变化及意义

目的：探讨Bcl-2、Bax在维生素K3 (VK3)诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤过程中的变化,为研究VK3诱导肝癌细胞损伤的机制提供参考。方法：体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组和不同浓度VK3处理的实验组（20、40和60 μmol•L^-1）,MTT法检测各组SMMC-7721细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;RT-PCR检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平;Western blotting检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果：与对照组比较,20 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率、LDH释放率、Bcl-2和Bax mRNA表达量及其蛋白表达量未见明显变化;与对照组比较,40和60 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);LDH释放率增加(P<0.05或P<0.01);Bcl-2 mRNA表达率降低(P<0.05);Bax mRNA表达量率升高(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);Bax 蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论：40 μmol•L^-1剂量的VK3能够诱导SMMC-7721细胞损伤,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

内质网应激反应蛋白在氧化应激诱导人宫颈癌Hela细胞自噬中的作用

目的：探讨内质网应激反应蛋白在氧化应激诱导人宫颈癌Hela细胞自噬过程中的作用,阐明内质网应激-自噬途径调控肿瘤细胞生存的可能机制。方法：人宫颈癌Hela细胞分为对照组、VK3 (30   μmol•L^-1)组、内质网应激抑制剂牛磺熊去氧酸钠（TUDC ）(500  μmol•L^-1)组和VK3 (30   μmol•L^-1)与TUDC(500  μmol•L^-1)联合作用组。透射电镜观察Hela细胞内质网形态学变化。MTT 法检测细胞生存率。Western blotting法检测内质网应激特征性分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ）的表达水平。结果：对照组细胞形态正常,VK3组细胞浆内可见自噬泡及扩张的内质网。与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组Hela细胞生存率降低（P<0.05）。与对照组比较,VK3组GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加（P<0.05）;与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组 GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论：在氧化应激诱导Hela细胞损伤过程中,内质网应激反应蛋白可介导Hela细胞发生自噬。     

影响人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用

探讨叉头盒蛋白M1（FOXM1）对人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用。方法 将含有正义FOXM1 互补的脱氧核糖核酸（cDNA）的真核表达载体、空质粒的真核表达载体采用脂质体转染法转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为过表达组、过表达对照组;另构建干扰FOXM1基因表达的重组载体、空载载体,利用脂质体介导将其转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为沉默组、沉默对照组;并设置空白组、抑制剂组。上述每组5个复孔,均加入顺铂,抑制剂组另加入硫链丝菌肽,培养48 h。实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测各组FOXM1 信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达;倒置显微镜观察细胞形态学改变;噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪双染法检测各组细胞凋亡率;RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）、细胞分裂周期因子25B（CDC25B）、存活蛋白（Survivin）、p21 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,沉默组和抑制剂组FOXM1、Cyclin B1、CDC25B、Survivin mRNA及蛋白表达均下降（P＜0.05）,过表达组上述指标均升高（P＜0.05）;与空白组比较,沉默组和抑制剂组增殖抑制率、凋亡率、p21 mRNA及蛋白表达均升高（P＜0.05）,过表达组上述指标均下降（P＜0.05）;空白组、沉默对照组、过表达对照组细胞连接紧密、形态均匀、轮廓清楚,过表达组细胞连接致密,沉默组和抑制剂组细胞减少,轮廓不清、形态不均、大小不一,且可见细胞皱缩及细胞碎片。结论 FOXM1表达下调可增加人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性,FOXM1表达上调则可降低其化疗敏感性,推测与正反馈调节Cyclin B1、CDC25B、Survivin表达,负反馈调节p21表达有关。     

姜黄素通过miR-181a调控KLF6表达抑制骨肉瘤细胞的生长

目的：探讨姜黄素通过微小RNA-181a(miR-181a)调控锌指蛋白Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨肉瘤细胞生长的影响。方法：体外培养骨肉瘤细胞系U2OS细胞,将U2OS细胞分为对照组（不作处理）、姜黄素组（终浓度分别为5, 10, 20μmol/L姜黄素）、miR-181a阴性对照（miR-NC）组、miR-181a模拟物（miR-181a mimics）组、姜黄素（20μmol/L）+NC组、姜黄素（20μmol/L）+miR-181a mimics组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法与平板克隆形成实验检测各组U2OS细胞增殖情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-181a与KLF6 mRNA表达情况;蛋白印迹分析法检测各组U2OS细胞KLF6、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、Cyclin D1表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-181a与KLF6的靶向关系。结果：与对照组相比,随着姜黄素浓度升高,U2OS细胞存活率、细胞平板克隆形成率、Cyclin D1、Cyclin B1蛋白、miR-181a表达水平逐渐降低,KLF6表达水平逐渐升高,...     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
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sirtinol对前列腺癌DU145细胞周期的影响及其机制

目的:观察沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞生长增殖、细胞周期进程和细胞周期正性调节蛋白Cyclin D1、CDK4及pRb 表达的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能作用机制。方法：取处于对数生长期DU145细胞随机分为对照组（DMSO组）和sirtinol组（终浓度分别为10、25和50  μmol?L-1）,MTT法测定各组DU145细胞生长抑制率,RT-PCR和Western blotting法检测DU145细胞中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期进程,Western blotting法检测DU145细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4和pRb的表达水平。结果:与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞生长抑制率明显升高（P<0.01）,G1期细胞明显增多（P<0.01）,且呈浓度依赖性。与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Cyclin D1和pRb蛋白表达水平降低（P<0.01）,CDK4蛋白表达无明显变化（P>0.05）。结论：下调SIRT1表达可以抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和阻滞细胞周期进程,其机制可能与改变细胞周期蛋白CyclinD1和pRb的表达有关。     

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的：分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B（major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A and B,MICA/B）的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法：用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶（ataxia telangiectasia mutated and Rad3 related kinase,ATM/ATR）,加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯（pynolidine dithiocarbamate,PDTC）抑制核因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）,观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果：三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100 μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到（1.68±0.17）、 (2.54±0.25)、 (3.42±0.15)倍（P<0.05）;MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍（P<0.05）。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高（P<0.05）。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高（P<0.05）。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达（P<0.05）,且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、 5、 10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍（P<0.001）,MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍（P<0.05）,MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍（P<0.001）,表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC（10、50、100 μmol/L）,MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制（P<0.05）,提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论：拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白（Aβ）25-35诱导的大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法：将PC12细胞随机分为正常对照组（C组）、10   μmol•L-1Aβ25-35 处理组（Aβ组）、2%异氟醚处理组（Iso组）和2%异氟醚与10   μmol•L-1Aβ25-35联合处理组（Iso+Aβ组）。各组PC12细胞药物处理6 h后应用透射电镜观察自噬体,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和自噬信号调控基因p-mTOR、Beclin-1表达;药物处理24 h后应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达。结果：与C组比较,Aβ组PC12细胞中可见大量的自噬体,LC3-Ⅱ、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,p62、p-mTOR和Bcl-2表达量降低（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;Iso组PCI2细胞未见自噬体,LC3-Ⅱ
表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;与Aβ组比较,Iso+Aβ组PC12细胞仅见少量自噬体,LC3-Ⅱ表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）,Bcl-2表达无明显变化（P>0.05）。结论：异氟醚能够抑制Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬的活化,促进凋亡蛋白的表达,其作用机制与激活自噬信号调控基因mTOR、抑制Beclin-1的表达有关。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

熊果酸对肝星状细胞内活性氧产生的影响及与细胞调亡的关系

目的：体外观察熊果酸对肝星状细胞内活性氧（ROS）的产生、细胞凋亡、NF-κB核易位及X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP ）mRNA表达的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法：取对数生长期的肝星状细胞（HSC-T6）进行分组：A组：瘦素(100 ng/ml)刺激组,B组：瘦素+熊果酸（50μM）组,C组：瘦素+ N-乙酰-L半胱氨酸（10mM）组,D组：空白对照组。检测DCF荧光强度（反映ROS水平）、细胞凋亡率、NF-κB（P65）核移位率; XIAP mRNA的表达。结果：1. A组HSC-T6细胞内DCF荧光强度明显强于D组,B组、C组细胞内ROS水平明显降低于A组（均P<0.001）。2．A组在48h的HSC-T6细胞凋亡率低于D组（P<0.05）;B组在48h的 HSC-T6凋亡率不仅明显高于A组（P<0.001）, 而且高于C、D组（均P<0.05）。3．A组细胞凋亡率显著高于D组（P<0.001）;B组、C组的NF-κB核移位率均显著低于A组（均P<0.001）;4．瘦素作用HSC-T6细24h的XIAP mRNA表达显著高于D组（P<0.01）;B组、C组在12h、24h的表达均低于A组(P<0.01 或P<0.05)。结论：熊果酸能抑制瘦素刺激HSC-T6细胞引起的ROS产生,并能诱导HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS对 NF-κB的活化,下调XIAP基因表达有关。     

fractalkine影响动脉粥样硬化信号的转导机制及卡托普利的干预作用

目的:通过鸟苷酸结合蛋白（G-蛋白）对不规则趋化因子fractalkine（FKN）诱导单个核细 胞合成核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨FKN及其受体CX3CR1 可能存在的信号转导机制及卡托普利的干预作用。方法：将抗凝血用Ficoll密度梯度离心 法分离外周血单个核细胞,随机分为空白对照组、FKN组、PTX组、RO31-8220组、PDTC组及 卡托普利组,应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,应用酶联免疫法检测各 组培养液中TNF-α的表达水平。结果：FKN组与空白组比较NF-κB 、TNF-α表达明显增多( P<0.05);G-蛋白阻断剂PTX组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达明显减少(P<0.05); PKC阻断剂RO31-8220组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达减少(P<0.05);NF-κB抑制剂PDTC组TNF-α表达较FKN组明显减少(P<0.05);卡托普利组较FKN组NF-κB 、TNF-α表达部分减少(P<0.05)。结论：FKN/CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、 TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN/CX3CR1诱导单个核细胞合成NF-κB、 TNF-α,抑制炎症反应和抗动脉粥样硬化;FKN/CX3CR1影响动脉粥样硬化的信号转导机制可能是通过以下级联反应实现的：FKN+CX3CR1→G蛋白→PKC→NF-κB→TNF-α。     

人参多糖对K562细胞凋亡与细胞周期的影响及其机制

目的探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)诱导白血病细胞K562凋亡和周期阻滞的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108/L,空白对照组予以常规培养;GPS组加入400 mg/L GPS。流式细胞仪测定细胞的凋亡率及细胞周期分布变化;RT-PCR检测细胞ERK表达的变化。免疫组化的方法检测细胞中p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白定位及表达量的变化。Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白的变化。结果与对照组比较,K562细胞在400 mg/L GPS的作用下,体外培养24、48、72 h后,GPS组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),周期分布检测结果显示,与对照组相比,GPS组K562细胞G0/G1期细胞数量呈时间依赖性增多(P<0.05),G2+M、S期细胞数量则明显减少(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,400 mg/L GPS处理48 h组ERK mRNA的表达水平明显低于对照组(0.20vs 0.50,P<0.05)。免疫组化显示p-ERK、NF-κB、Cyclin D1主要分布在细胞核和细胞质,与对照组相比,GPS组K562细胞内p-ERK、NF-κB、Cyclin D1的表达明显减弱。Western blot检测结果显示,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),而p-ERK、NF-κB、Cyclin D1随时间变化有减少趋势,且在48 h减少明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人参多糖GPS可促使K562细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导K562细胞凋亡,且均呈时间依赖性。GPS促进K562细胞凋亡、导致其细胞周期阻滞的机制可能是通过抑制ERK/NF-κB信号通路的激活,进而下调Cyclin D1来实现的。     

食管鳞癌中NF-κB及相关因子的表达及其意义

目的:探讨核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)及周期素D1(Cyclin D1)、C-Src基因、表皮生长因子受体(EGFR)在食管鳞癌中的变化特征及其生物学意义。方法:采用免疫组化S-P法检测食管鳞癌手术标本中NF-κB、Cyclin D1、C-Src、EGFR的蛋白表达情况并分析其特征。结果:NF-κB在正常上皮无表达,在癌组织中表达升高(P<0.01),但与食管癌的分化程度、浸润深度无明显关系(P>0.05),而与淋巴结转移有一定关系(P<0.01);Cyclin D1在正常鳞状上皮中有少量表达,在癌组织中高表达(P<0.05),表达强度与组织学分级及淋巴结转移均有一定关系(P<0.01);C-Src在正常上皮中有表达,在癌组织中表达增高(P<0.05),表达强度与分化程度、浸润深度、淋巴结转移均有明显关系(P<0.01);EGFR在正常上皮中有少量表达,在癌组织中高表达(P<0.01),且表达强度与分化程度及浸润深度、淋巴结转移亦均有一定关系(P<0.05~P<0.01)。在食管鳞癌中,NF-κB和Cyclin D1、C-Src、EGFR的蛋白表达均有相关关系(P<0.01)。结论:NF-κB可能参与食管鳞癌的发生及淋巴结转移,Cyclin D1、EGFR、C-Src可能参与食管鳞癌的发生及演进过程。NF-κB促进食管鳞癌发生、发展的分子机制与Cyclin D1、C-Src、EGFR的作用有关系。     

Tristetraprolin通过NF-?B通路抑制肺腺癌细胞自噬

目的研究RNA结合蛋白tristetraprolin在肺腺癌中的表达及抑制自噬作用的分子机制。方法瞬时转染tristetraprolin过 表达质粒,分别在转染tristetraprolin 24、48 及72 h 后采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot 检测肺腺癌细胞中 tristetraprolin表达及自噬相关分子Beclin1、LC3II/LCI及p62的表达变化。瞬时转染tristetraprolin过表达质粒及加入TNF-α,将 肺腺癌细胞分为空载组、tristetraprolin 组、空载+TNF-α组及tristetraprolin+TNF-α组,应用免疫荧光和Western blot检测NF-ĸB p65、c-rel、p50分子在细胞核中表达情况。共转染tristetraprolin过表达质粒及IκBα-mut质粒,将肺腺癌细胞分为tristetraprolin 空载组、IκBα-mut 空载组、tristetraprolin 组、IκBα-mut 组及tristetraprolin+IκBα-mut 组,采用RT-qPCR 和Western blot 检测 tristetraprolin表达及自噬相关基因表达变化。结果Tristetraprolin在肺腺癌细胞中RNA及蛋白水平表达低（P<0.001）。过表达 tristetraprolin 后,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达均较空载组降低（P<0.001）。同时,过表达 tristetraprolin后,细胞核内的p65及c-rel蛋白表达较空载组及空载+TNF-α组减少（P<0.05）,但p50表达无明显变化（P>0.05）。 过表达tristetraprolin后,p65及c-rel核移位较空载组减少。共转染IκBα突变质粒及tristetraprolin过表达质粒后,NF-κB信号通 路被阻断,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达较tristetraprolin过表达组升高（P<0.05）,NF-ĸB信号 通路被阻断后tristetraprolin对自噬的抑制作用减弱。结论Tristetraprolin在肺腺癌细胞中低表达,过表达tristetraprolin可能通 过抑制NF-ĸB p65及c-rel核移位而抑制肺腺癌细胞自噬。     

锌营养状态对哮喘小鼠气道组织IL-12、NF-κB表达的影响

目的:探讨不同锌含量饮食对哮喘小鼠气道组织IL-12,NF-κB表达的影响.方法:建立进食低锌、正常锌、高锌饲料的哮喘小鼠模型.48只BALB/c小鼠,随机分为6组,每组8只.A组为正常饲料喂养+生理盐水激发;B组为高锌饲料喂养+卵清蛋白(OVA)激发;C组为高锌饲料配对喂养+OVA激发;D组为正常饲料喂养+OVA激发...     

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨Cyclin D1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义.方法用免疫组化SP法分别检测Cyclin D1和Cyclin B1在58例鼻咽癌组织标本中的表达.结果Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);Cyclin D1和Cyclin B1 阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌组织中Cyclin D1和Cyclin B1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关.结论Cyclin D1和Cyclin B1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义.     

非特异性角膜炎症反应中PDTC对LPS诱导LFA-1 mRNA表达的影响

目的：探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的mRNA表达与非特异性角膜炎症反应的相关性及核因子NF-κB抑制剂对LFA-1 mRNA表达的阻断作用。方法：建立BALB/C鼠角膜缝线及联合结膜下药物注射的动物模型,通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）,对单纯缝线组、缝线联合脂多糖（LPS）组和缝线联合LPS及吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组术后1、3、7和14 d不同时相点角膜LFA-1 mRNA的转录水平进行检测。结果：术后第1、3、7 d时,角膜缝线联合LPS处理组LFA-1 mRNA的表达明显高于单纯缝线组(P<0.05);14 d时,角膜缝线联合LPS处理组与单纯缝线组比较差异无显著性（P>0.05）。而1和7 d时缝线联合LPS和PDTC组LFA-1mRNA的表达明显高于缝线联合LPS组;3和14 d时缝线联合LPS和PDTCLFA-1 mRNA的表达明显低于缝线联合LPS组(P<0.05)。结论：联合结膜下注射LPS可在术后诱导LFA-1 mRNA的高水平表达,而核因子NF-κB抑制剂PDTC可抑制角膜LFA-1 mRNA的表达,表明PDTC对LFA-1 mRNA表达具有阻断调控作用。     

N-乙酰半胱氨酸(NAC)对体外LPS刺激下小鼠巨噬细胞HIF-1α表达的影响

目的:探讨NF-κB抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞内HIF-1表达的影响及意义。方法:取健康Balb/c小鼠,分离腹腔巨噬细胞并将其分为正常对照组、LPS刺激组、不同剂量NAC加LPS组。采用RT-PCR检测各组HIF-1α、TNF-αmRNA表达,细胞免疫化学检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达。结果:与LPS刺激组比较,NAC+LPS组HIF-1αmRNA表达无明显差异、TNF-αmRNA明显减少,HIF-1α、VEGF蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:NAC可降低LPS刺激下小鼠巨噬细胞TNF-αmRNA表达,TNF-α的降低可能通过HIF-1α转录后途径下调该蛋白的表达,进而下调VEGF表达。提示在急性炎性反应中,NF-κB可能通过增加TNF-α在转录后水平影响HIF-1α的表达。