人、牛、猪血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其某些理化性质的鉴定

为进行人、牛、猪铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)免疫学性质差异的比较研究,我们采用经典方法分别提纯了人和牛血 CuZn-SOD,并在经典方法的基础上做了适当改进,从猪血中提取了 CuZn-SOD。经聚丙烯酰胺凝胶电泳、比活性、分子量及紫外吸收光谱等理化性质的鉴定,证实3种不同种属来源的 CuZn-SOD 纯度均一,符合免疫学研究的要求。     

红细胞作为超氧化物歧化酶载体初探

为延长超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）在体内存留时间以提高血液相容性，防治缺血、缺氧过程中活性氧造成的组织损伤，以红细胞作为ＳＯＤ载体，采用透析技术将ＳＯＤ包入红细胞内，进行了体外摇床及贮存实验，结果证明ＳＯＤ可包入红细胞，同时ＳＯＤ在３７℃摇床上最初８ｈ活性保持稳定，此种细胞在４℃下活性可至少保持一周，红细胞载体在临床和特种环境医学上交有一定实际意义。     

猪肝锰-超氧化物歧化酶的纯化

本文从新鲜猪肝中提取并纯化锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD).经纯化后的Mn-SOD在聚丙烯酰胺凝胶电泳酶蛋白染色和酶活性染色中均显一条带,比活性为3760McCord-Fridovich u/mg蛋白质.猪肝Mn-SOD在紫外光区220nm和280nm处有两个最大吸收峰.     

缺铁性贫血患儿红细胞密度及红细胞超氧化物歧化酶的相应分析

采用密度梯度离心法将12例缺铁性贫血(IDA)患儿和15例正常儿童的红细胞离心分离为各1/3上、中、下三层,并采用煌焦油蓝生理盐水法。邻苯三酚自氧化抑制法分别测定其红细胞的Ret分数和E-SOD的活力,对照组和病例组的Ret上中下三层分别为0.020,0.009,0.002和0.035,0.013,0.002(P<0.01,P<0.05和P>0.05);两组的E-SOD上中下三层分别为6349,5721,5301和6850,6165,5024(P<0.05,P<0.05和P>0.05)。结果提示,上层为年轻红细胞,下层细胞逐渐衰老,IDA上层E-SOD受氧自由基影响,代偿性活力增高,IDA红细胞包含了膜LPO增加和E-SOD代偿消耗的综合病理过程。     

牛小脑γ-氨基丁酸受体的溶液化及其纯化

牛小脑突触膜GABA受体经非离子型去垢剂(Nonidet P40)溶液化和超滤分离后于4℃冰箱或0℃放置5天左右,其[~3H]-GABA特异结合活性(cpm/mg蛋白)较膜结合GABA受体提高115倍,该结合活性至少可维持20天。根据该蛋白与[~3H]-GABA特异结合的可饱和性、可逆性、高亲和部位的存在及其配基专一性等,表明它仍具备膜结合GABA受体的特征。该受体蛋白不具有[~3H]-氟硝基安定的结合活性,在7.5%聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一染色区带,等电点5.2左右,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种亚基,主要亚基为4.4万道尔顿。对该受体蛋白的理化性质及分子量大小进行了初步观察。     

抗牛CuZn-超氧化物歧化酶的抗血清与肿瘤患者血中CuZn-超氧化物歧化酶的抗原抗体反应新发现

牛与人的CuZn-超氧化物歧化酶(简称CuZn-SOD)虽为不同种属的酶,但其一级结构中150个氨基酸残基中有125个排列顺序相同,而且两者的二、三、四级结构也可能类似。如果肿瘤患者血中CuZn-SOD的结构发生些微变化,是否会改变该酶与抗牛CuZn-SOD的抗血清之间抗原抗体反应的强不相容性,至今无人研究。为了研究此问题,我们建立了某些方法与新技术如(1) 分离纯化牛CuZn-SOD。其比活性与紫外吸收、电泳图谱等理化性质完全达到纯酶标准。(2) 制备了抗牛CuZn-SOD的抗血清。用免疫双扩散法鉴定出抗血清效价为1∶32。抗血清可与有活性或无活性的牛CuZn-SOD发生强抗原抗体反应。(3) 建立了激光比浊的抗原抗体复合物定量法。该法手续简便,灵敏度较高。(4) 新建立了化学发光的抗原抗体复合物定量法,其特点是应用我们推导的动力学公式     

金属螯合层析介质的研制及其在纯化重组人铜锌超氧化物歧化酶中的应用

以琼脂糖Sepharose 4B为基质,经氯代环氧丙烷活化,与亚氨基二乙酸通过化学交联再与铜螯合,合成了金属铜螯合层析介质,结果显示此介质不仅具有特异性吸附能力,且有一定的刚性,对强碱和热亦有一定的耐受性.用此介质纯化人超氧化物歧化酶(rhSOD),即可得到高纯度的rhSOD产品,简化了纯化工艺,降低了生产成本.     

短跑与中跑运动员红细胞超氧化物歧化酶含量及活性初探

对短跑和中跑运动员安静时和一次运动后红细胞SOD含量及活性的变化进行了观察,并研究了运动员的最大吸氧量和无氧阈与红细胞SOD的关系。结果提示,以无氧代谢为主的运动项目可提高人体红细胞SOD的含量及活性,增强红细胞抵御超氧自由基损伤的能力。     

急性吸入四氧化二氮大鼠血浆丙二醛、红细胞超氧化物歧化酶的变化

急性吸入四氧化二氮大鼠血浆丙二醛、红细胞超氧化物歧化酶的变化叶明亮＊吴海寰＊夏亚东闻思真郭绪益袁著忻＊军事医学科学院毒物药物研究所北京１００８５０四氧化二氮（Ｎ２Ｏ４）是火箭推进剂中的主要燃料，其毒性作用主要通过呼吸道吸入引起急性肺损伤。本研究以Ｎ２...     

抗人重组Cu－Zn超氧化物歧化酶单克隆抗体的制备及其在纯化抗原中的应用

本研究利用重组质粒ｐＣＺＳ转化大肠杆菌，制备出入重组Ｃｕ－Ｚｎ超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎ－ＳＯＤ），进一步建立了３株鼠抗ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。经鉴定，它们分泌的ＭｃＡｂ分别属于ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ亚类，能特异性地识别人ＣｕＺｎＳＯＤ，与ｐＣｚＳ空载菌蛋白无交叉反应。将此ＭｃＡｂ制备了免疫亲和层析柱，从大肠杆菌的粗提液中纯化出ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ，ＳＤＳ－ｐＡＧＥ显示单一条带，纯度＞９８％，回收率５０％，酶化活达１０９７１．３Ｕ／ｍｇ蛋白。ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ－ＭｃＡｂ的制备为ＣｕＺｎＪｉＤ产品的纯化和抗辐射等应用研究提供了有效的工具。     

抗人重组铜-锌超氧化物歧化酶单克隆抗体的制备及其在纯化抗原中的应用

利用重组质粒pCZS转化大肠杆菌,制备出人重组铜-锌超氧化物歧化酶(rhCu-Zn SOD),进一步建立了3株鼠抗rhCu-Zn SOD的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株.经鉴定,它们分泌的McAb分别属于IgG_1和IgG_2a亚类,能特异性地识别人Cu-Zn SOD,与pCZS空载菌蛋白无交叉反应.将此McAb制备了免疫亲和层析柱,从大肠杆菌的粗提液中纯化出rhCu-Zn SOD,十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胶凝胺电泳(SDS-PAGE)显示单一条带,纯度>98%,回收率50%,酶比活达10 971.3 U/mg蛋白,rhCu-Zn SOD McAb的制备为Cu-Zn SOD产品的纯化、分析及作用机理研究等提供了有力的工具.     

健身跑对中老年人红细胞超氧化物歧化酶活性和血清过氧化脂质的影响

对131名中老年男子进行观察测定,结果表明长期健身跑可阻止体内自由基水平的升高,减少自由基对组织细胞的损伤,从而起到延缓衰老的作用。     

长效重组人超氧化物歧化酶的研制及其辐射防护作用研究

选用无毒、无免疫原性的高分子化合物聚乙二醇（ＰＥＧ）为修饰剂，以活性酯法制备出ＰＥＧ－重组人超氧化物歧化酶（ＰＥＧ－ｒｈＳＯＤ）共价结合物。修饰酶的生物半衰期为１５ｈ，比修饰前延长了９０倍，对酸、硷、热的耐受力明显高于修饰前。用照射小鼠活存率评价了ＰＥＧ－ｒｈＳＯＤ的辐射防护作用。小鼠受８．５Ｇｖｒ射线照射前１ｈ腹腔注射３０万Ｕ／ｋｇＰＥＧ－ｒｈＳＯＤ，可提高活存率４２％，与未修饰的ｒｈＳＯＤ相比，活存率提高１４％。     

超氧化物歧化酶活力的测定及其电泳图谱分析

纯化超氧化物歧化酶(简称SOD)时,测定酶活力一般采用细胞色素C法,但此法需要高纯度的细胞色素C及黄嘌呤氧化酶,而硝基四氮唑兰(简称NBT)法却没有这些要求。我们改进了这个方法,监测了SOD纯化过程中酶活力变化情况,得到了与McCord-Fridovich用细胞色素C法监测相类似的结果,而且应用于生物效应研究,其结     

用三步法纯化重组人促红细胞生成素

用生物反应器培养中国仓鼠卵巢细胞促红细胞生成素（ＣＨＯＥＰＯ）Ｃ２细胞株，培养上清液中重组人促红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）表达水平达２×１０６～３×１０６Ｕ／Ｌ。培养上清液经过三步纯化：第一步为反相色谱，可将样品体积浓缩约９６．７％，其收集液经充分透析后进行第二步的ＤＥＡＥ离子交换色谱，最后进行分子筛色谱，总回收率为３０％以上。经纯化的ｒＨｕＥＰＯ比活性为１．５×１０８Ｕ／ｇ蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ为一条带，扫描测试纯度达９８％以上。     

补充维生素E对大鼠运动能力及红细胞超氧化物歧化酶活力的影响

补充维生素Ｅ对大鼠运动能力及红细胞超氧化物歧化酶活力的影响赵长峰，于红霞，蔺新英，林希蕴，徐贵发，梅行山东医科大学营养卫生教研室（济南２５００１２）维生素Ｅ是人体所需的重要营养素，具有抗氧化功能，据报道，动物和人体缺乏维生素Ｅ可以使机体的脂质过氧化反...     

力竭性游泳对小鼠红细胞腺苷脱氨酶及超氧化物歧化酶活性的影响

腺苷脱氨酶（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ,ＡＤＡ）是核酸代谢中的关键酶之一,它催化腺苷脱氨形成次黄嘌呤核苷,后者在嘌呤核苷磷酸化酶催化下经磷酸化生成次黄膘吟和１－磷酸核糖：黄嘌呤本文报道了运动引起红细胞腺苷脱氨酶活性变化,并对其变化机理作了初步探讨。１材料与方法１．１实验动物及运动方式健康雄性昆明种小鼠,由湖北医科大学实验动物中心提供。小鼠２０只,体重１８～２１克,随机分为运动实验组及安静对照组各１０只。运动实验组经适应性游泳训练后,自由游泳至力竭。水温２５℃左右,水深４５ｃｍ左右,力竭…     

立克次体的纯化及其分析

本文用斑疹伤寒群和斑点热群立克次体鸡胚培养的感染卵黄囊膜在1MKCl溶液中制成10%～20%悬液,以差速离心沉淀和乙醚处理法提取纯化立克次体.该法纯化的立克次体涂片经Giemsa、H_(33258).荧光素及免疫酶标染色,在光镜下观察,立克次体形态完整,纯度较好.其斑疹伤寒群的普氏立克次体(E株)平均蛋白回收量为0.88mg/g膜,斑点热群的西伯利亚立克次体(Barbash株)和国内分离鉴定的斑点热立克次体精河株、斑点热立克次体黑龙江株及斑点热立克次体内蒙株的平均蛋白回收量为0.34～0.40mg/g膜.纯化的立克次体在核酸提取、DNA碱基成份的测定和全立克次体蛋白组成及抗原多肽构成的分析中取得了满意结果.