阿司匹林引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药及其机制研究

目的探讨阿司匹林是否引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药及其可能机制。方法通过四氮唑蓝(MTT)和HOCHEST33258染色方法检测药物对人胰腺癌耐药株SW1990细胞的生长情况以及凋亡的影响;并应用蛋白免疫印迹方法检测细胞信号通路PI3K/AKT的变化。结果阿司匹林能明显降低吉西他滨对细胞的抑制率并提高IC50。0.4μmol/L吉西他滨干预细胞后,凋亡率达56%,明显高于吉西他滨与阿司匹林合用时细胞的凋亡率(28%,P<0.01)。磷酸化AKT和PI3K水平明显增高。PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能明显逆转阿司匹林引起的SW1990细胞耐受吉西他滨的现象。结论阿司匹林通过激活PI3K/AKT信号通路引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药。     

Sonic hedgehog信号通路在口腔颌面部的研究进展

<正>Hedgehog信号通路最早被发现于果蝇胚胎发育的研究中,而在哺乳动物中共发现了3种Hedgehog家族的成员,它们分别是Sonic hedgehog(Shh)、Desert hedgehog(Dhh)和Indian hedgehog(Ihh)。随后的研究证实Sonic hedgehog信号通路在胚胎发育、机体组织器官的形成中有着重要作用~([1-2]),该信号通路的异常可导致口腔颌面部发育的缺陷。Sonic hedgehog信号通路的持续异     

吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌临床观察

目的:观察吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌的疗效及不良反应.方法:41例晚期胰腺癌患者,采用吉西他滨1000mg/m2,静滴30分钟,d1,d8;卡培他滨1250mg/ m2,2次/日,口服d1～14.21天为1疗程,治疗2疗程后评价疗效及不良反应.结果:41例均可评价疗效,共完成周期数为126个,完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)9例,稳定(SD)13例,进展(PD)19例,总有效率(CR+PR)21.95%,疾病控制率(CR+PR+SD)53.66%,中位疾病进展时间4.1个月,中位生存期为7.3个月(1.5～19.7个月)常见不良反应为中性粒细胞减少、迟发性腹泻、恶心、呕吐和手足综合征等,多为Ⅰ～Ⅱ度.结论:吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌疗效肯定,不良反应轻,耐受性好,是晚期胰腺癌的有效治疗方案.     

吉西他滨静脉滴注治疗晚期胰腺癌疗效分析

目的　评价吉西他滨 (健择 )单药治疗胰腺癌的疗效。方法　对 16例晚期胰腺癌患者给予吉西他滨10 0 0mg/m2 ,连续 7周 ,休息 1周 ,为 1疗程。结果　 16例患者中PR 2例 ,SD 9例 ,PD 5例。疾病相关症状有较好改善 ,包括疼痛减轻 ,KPS积分提高。结论　吉西他滨静脉滴注治疗晚期胰腺癌能较好改善疾病相关症状。     

生长抑素联合吉西他滨对人胰腺癌PANC-1细胞的影响

目的 研究生长抑素(SST)、吉西他滨(Gem)单药或联合用药对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移的影响及机制.方法 (1)体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,使用不同浓度SST、Gem及联合用药干预不同时间;(2)MTT法检测各浓度药物对细胞增殖抑制的影响(细胞抑制率);(3)应用划痕实验检测各浓度药物对细胞的侵袭能力的影响(伤痕愈合面积比);(4)Western blot法检测各浓度药物对细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达.结果 (1)MTT实验:不同浓度SST、Gem对细胞增殖具有抑制作用,与浓度和时间呈正相关;联合用药组比单药组抑制作用更强;(2)划痕实验:药物浓度越高伤痕愈合指数越小,联合用药组伤痕愈合指数最小;(3)免疫印迹分析显示,E-cadherin表达与SST浓度呈正相关,而Vimentin表达与SST浓度呈负相关;联合用药效应最强.结论 SST可协同Gem抑制人胰腺癌细胞PANC-1的增殖及迁移,其机制可能与逆转上皮间质转化有关.     

吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌26例效果观察

目的:分析吉西他滨联合卡培他滨一线治疗晚期胰腺癌的效果。方法:晚期胰腺癌接受吉西他滨联合卡培他滨方案:吉西他滨1 000 mg/m2,静脉滴注30 min,第1、8天;卡培他滨1 000mg/m2,2次/天,口服,第1～14天。每3周为1个周期,观察其总生存期、无进展生存期、客观缓解率、临床获益率、糖类抗原19-9、缓解率和毒副反应等。结果:26例中部分缓解5例,疾病稳定7例,肿瘤进展14例,总客观缓解率为19.2%,临床获益率46.2%,糖类抗原19-9缓解率61.5%,中位生存期7.8个月,中位无进展生存期为6.2个月,1年期生存率为26.3%。结论:吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌的化疗方案临床获益较高,毒性可耐受,值得临床研究和应用。     

吉西他滨治疗晚期胰腺癌不良反应的护理

胰腺癌恶性程度高,预后差,5年生存率仅有0.4%-4%,发现肿瘤后的中位生存期只有6个月[1]。由于胰腺肿瘤的高生物侵袭性及早期诊断困难,多数胰腺癌发现时已属晚期,失去手术治疗的机会,化疗成为胰腺癌患者减轻疼痛、提高生活质量,延长生命的主要方法。     

RNA干扰AKT2影响人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨的敏感性

目的 探讨RNA干扰AKT2对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨敏感性的影响.方法 构建荷胰腺癌裸鼠模型,采用腹腔给药和瘤内注射方式,以吉西他滨配合AKT2 siRNA表达载体对荷瘤鼠进行联合干预治疗,对比观测裸鼠肿瘤生长情况,RT-PCR检测肿瘤细胞AKT2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肿瘤AKT2蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数. 结果化疗+AKT2-siRNA组移植瘤组织中AKT2 mRNA及AKT2蛋白表达明显低于空白对照组、化疗组、化疗+空白质粒组.化疗+AKT2-siRNA组瘤重、肿瘤体积显著低于其他各组.化疗+AKT2-siRNA组抑瘤率、凋亡指数显著高于其他各组.结论 RNA干扰AKT2明显提高人胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗的敏感性.     

吉西他滨对胰腺癌血管内皮生长因子的影响

目的 观察胰腺癌患者采用吉西他滨(GEM)化疗后血清血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化,探讨其临床意义.方法 对22例胰腺癌患者采用GEM化疗,并采用ELISA法检测患者治疗前、后VEGF的表达水平,与健康体检者进行对照.化疗6个疗程后分析疗效与VEGF表达水平的关系.结果 胰腺癌患者VEGF表达水平高于健康体检组(P＜0.01);化疗3个疗程后VEGF表达水平明显下降(P＜0.01);化疗6个疗程后,客观有效者的VEGF表达水平明显低于病程进展者(P＜0.05).结论 检测胰腺癌患者血清VEGF水平有助于对胰腺癌的诊断和GEM化疗效果的评价.     

吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的疗效观察

目的 探讨吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效.方法 选取2017年8月至2018年7月本院收治的100例晚期胰腺癌患者作为研究对象,根据治疗方案不同分为参照组与研究组,每组50例.参照组采用吉西他滨治疗,研究组在参照组基础上联合化疗治疗.比较两组治疗效果、生存率及不良反应发生率.结果 研究组治疗总有效率高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组3、6、12个月生存率均高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义.结论 采用吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌效果显著,可提高患者的生命质量,且安全性较高,值得临床推广应用.     

吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测

目的：探讨对吉西他滨( GEM )耐药的胰腺癌SW1990细胞诱导方法,以期进一步认识胰腺癌耐药的发生机制,并对诱导的GEM耐药的胰腺癌细胞与其亲本细胞的生物学特性进行比较。方法采用逐步浓度递增法诱导对GEM耐药的细胞株 SW1990-GZ。 MTT 法检测 SW1990和SW1990-GZ 的半数致死量(IC50)、耐药系数(R),并观察其生长差异。采用高效液相色谱法( HPLC)检测不同时间点SW1990和 SW1990-GZ 对 GEM 药物的摄取情况。结果SW1990和SW1990-GZ的IC50为(0．07±0．0021)、(87．50±3．2400)μg/ml,R=1250;在不同浓度GEM作用下,诱导后耐药的SW1990-GZ对GEM的敏感性明显降低。细胞生长曲线显示耐药细胞 SW1990-GZ相对于 SW1990生长缓慢。不同时间点GEM孵育后,SW1990-GZ细胞对GEM药物的摄取较SW1990细胞降低。结论成功诱导了耐GEM药物的SW1990-GZ细胞株,耐药性能稳定、明显。 SW1990-GZ细胞可能存在着一定的机制使得细胞摄取GEM降低。     

Sonic hedgehog在大肠癌细胞株中表达缺失与其启动子高甲基化有关

目的:研究sonic hedgehog(SHH)在大肠癌细胞株的表达及其调控机制。方法:RT-PCR检测SHH mRNA在大肠癌细胞株HCT-8、SW1116、SW480及LOVO中的表达,去甲基化试验观察5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine)处理细胞株后对SHH mRNA表达的影响,采用亚硫酸盐修饰后测序法检测SHH启动子区甲基化状况。结果:SHH mRNA在HCT-8中仅有弱表达,在SW1116、SW480及LOVO中表达缺失,去甲基化处理后,其表达与对照组相比显著增强(P<0.001);SHH启动子在大肠癌细胞株中为高甲基化状态。结论:SHH在大肠癌细胞株中表达缺失与其启动子高甲基化有关。     

Shh信号通路在神经胶质瘤发生发展中的作用

Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是脊椎动物hedgehog信号通路家族成员之一,主要由分泌型糖蛋白Shh配体、跨膜蛋白受体Ptch和Smo以及下游转录因子Gli蛋白组成,在胚胎发育尤其是神经系统发育中起着重要的作用。近年研究发现Shh信号通路与多种肿瘤的形成有着密切的关系。神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,生长迅速且多呈浸润性,易复发,是脑肿瘤中治疗效果最差的肿瘤之一,主要原因是多种信号通路的异常激活增强了胶质瘤细胞的增殖能力。此外,神经胶质瘤是由不同属性的肿瘤细胞混合构成,胶质瘤中的肿瘤干细胞具有无限增殖能力,这一特性也对胶质瘤的发生、发展和复发起着重要作用。有研究发现Shh信号通路与神经胶质瘤的发生、增殖及胶质瘤干细胞有密切关系。本文主要就Shh信号通路的组成和其在神经胶质瘤发生及胶质瘤干细胞中的相关作用作一综述。     

下调hENT1可抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的跨膜转运

目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响。方法:将能特异性下调hENT1的pSilence-hENT14.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内。采用G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR检测hENT1mRNA表达情况。培养Sw1990细胞、pSilence-hENT1Si-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞,3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100μg/mL,温育0,15,30min,1,2,4h后收集细胞。取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度。结果:pSilence-hENT1Si-Sw1990细胞的hENT1mRNA表达水平下调50。Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30min达(55.1±10.4)μg/mL,60min达(70.2±7.8)μg/mL,120min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL。相比之下,pSilence-hENT1Si-Sw1990组细胞内质量药物浓度30min达(41.3±4.9)μg/mL,60min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P0.05)。结论:下调hENT1可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENT1是吉西他滨跨膜转运的重要通道。     

Activation of sonic hedgehog signaling pathway in S-type neuroblastoma cell lines

The effects of Sonic hedgehog(Shh) signaling pathway activation on S-type neuroblastoma(NB) cell lines and its role in NB tumorigenesis were investigated.Immunohistochemistry was used to detect the expression of Shh pathway components- Patched1(PTCH1) and Gli1 in 40 human primary NB samples.Western blotting and RT-PCR were used to examine the protein expression and mRNA levels of PTCH1 and Gli1 in three kinds of S-type NB cell lines(SK-N-AS,SK-N-SH and SHEP1),respectively.Exogenous Shh was administrated to ...     

NEDD4促进非小细胞肺癌继发厄洛替尼耐药

目的 探讨NEDD4(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)继发厄洛替尼耐药中的作用.方法 以HCC827细胞及耐厄洛替尼的HCC827 (HCC827/ER)细胞为工具,CCK-8法检测HCC827/ER细胞的耐药指数;实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)及Western blot检测厄洛替尼处理48 h后,NEDD4mRNA和蛋白在两种细胞中的表达及PI3 K/AKT信号通路活化情况.NEDD4小干扰RNA(siNEDD4)转染HCC827/ER细胞,比较处理前后HCC827/ER细胞的厄洛替尼IC50变化以及PI3K/AKT信号通路活化情况.裸鼠成瘤实验在活体水平上进一步验证NEDD4在NSCLC继发厄洛替尼耐药中的作用.结果 HCC827/ER细胞的耐药指数为(118.23 ±23.77);HCC827/ER细胞NEDD4mRNA和蛋白以及PI3K/AKT信号通路活化水平均高于HCC827细胞;HCC827/ER细胞成功转染siNEDD4后,转染组的PI3K/AKT信号通路活化水平降低,且厄洛替尼IC50值明显低于对照组(P＜0.05).裸鼠成瘤实验中转染组肿瘤对厄洛替尼的敏感性明显增加,与阴性对照组比较,药物处理组肿瘤生长受到明显的抑制.结论 NEDD4通过激活PI3 K/AKT信号通路促进NSCLC继发厄洛替尼耐药.     

Notch1在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用

目的探讨Notch1在小细胞肺癌多药耐药中的作用。方法首先通过QRT-PCR和Western-blot从基因和蛋白水平检测小细胞肺癌敏感细胞株(H69)和耐药细胞株(H69AR)中Notch1的差异表达;应用siRNA抑制耐药细胞株H69AR中的Notch1的表达,通过CCK8检测细胞对各种化疗(ADM,DDP,VP-16)的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果 Notch1在H69AR中的表达明显高于H69,抑制耐药细胞株中Notch1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞的凋亡。结论 Notch1可能参与了调节小细胞肺癌对多药耐药性。     

中国唇腭裂患者Sonic hedgehog信号通路相关单核苷酸多态性的分析

目的 探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路相关的单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism, SNP)与非综合征型唇腭裂(non-syndromic cleft lip and/or palate, NSCL/P) 之间的关联,并对唇腭裂疾病的致病风险因素进行探索。方法 收集197例个体的外周血(NSCL/P患者100例,健康对照97例),基于国际人类基因组单体型图计划中中国北京汉族人口数据,使用Haploview软件进行单倍体型分析和标签SNP选择。针对Shh 信号通路中的4个候选基因SHH、PTCH1、SMO和GLI2共选择了27个SNP。使用Sequenom质谱技术检测27个SNP在4个Shh信号通路中候选基因的基因型,并进行分析。结果 所选择的SNP基本涵盖了候选基因的潜在功能性SNP,其最小等位基因频率(minor allele frequency,MAF)>0.05:GLI2 73.5%, PTCH1 91.0%, SMO 100.0%, SHH 75.0%。发现位于SMO基因的SNP(rs12674259)和位于PTCH1基因的SNP(rs2066836)的基因型频率在NSCL/P病例组和对照组之间的差异有统计学意义。同时在4个候选基因所在的3条染色体(第2、7、9号染色体)中均发现了连锁不平衡,但在连锁不平衡单倍体型分析中,病例组和对照组之间的差异无统计学意义。结论 提示Shh信号通路参与NSCL/P的发生,其信号通路中关键基因的某些特殊SNP位点与唇腭裂相关,为NSCL/P的病因研究提供了新的探索方向,可能为NSCL/P的早期筛查与风险预测提供帮助。     

耐吉西他滨胰腺癌细胞株SW1990/GZ上皮间质转化现象的研究

目的:观察耐吉西他滨胰腺癌细胞株(SW1990/GZ)上皮间质转化的现象?方法:倒置显微镜下观察亲代SW1990细胞与SW1990/GZ细胞的形态差别;流式细胞仪检测细胞周期;免疫印迹法(Western blot)检测上皮间质转化相关蛋白表达;Transwell小室测定细胞侵袭迁移能力;通过表面特异抗原(CD44+?CD24+和CD133+)标记流式细胞仪检测肿瘤干细胞比例?结果:在形态学上,SW1990/GZ表现出明显的间质细胞特征,与亲代SW1990相比处于G1期的细胞无明显差异;SW1990/GZ细胞低表达上皮细胞标志物E-cadherin,而高表达间质细胞的标记物Vimentin;SW1990/GZ细胞侵袭和迁移能力明显增强(P < 0.01);与亲代细胞SW1990相比,SW1990/GZ细胞中CD44+CD24+细胞比例以及CD133+细胞比例分别提高了2倍和4倍以上(P < 0.01)?结论:SW1990耐吉西他滨细胞株(SW1990/GZ)发生了明显的上皮间质转化过程,肿瘤干细胞比例明显增多?