慢性粒细胞白血病的研究进展

慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病。近年来由于积极开展恶性血液病的生物学研究 ,对ＣＭＬ的发病机制有了进一步的认识 ,对其诊断和治疗也取得显著进展。1　ＣＭＬ的发病机制ＣＭＬ最主要的细胞遗传学特点是存在特异的Ｐｈ染色体 ,即ｔ ( 9;2 2 ) ,这一易位使正常位于 9ｑ34的ｃ ａｂｌ基因与 2 2 ｑ11上的ｂｃｒ基因发生融合 ,形成ｂｃｒ/ａｂｌ融合基因是恶性克隆的基因标志 ,它表达具有高酪氨酸激酶 (ＰＴＫ)活性的ｂｃｒ/ａｂｌ融合蛋白。过去一直认为ＣＭＬ髓系扩增是由于Ｐｈ克隆的高度增殖引起 …     

用荧光原位杂交技术研究慢性粒细胞性白血病变异Ph染色体易位的形成

目的：研究慢性粒细胞性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｉｅｍｉａ,ＣＭＬ）变异Ｐｈ染色体的形成,方法：应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,以９号,１５号,２２号整条染色体ＤＮＡ探针和Ｍ－ｂｃｒ／ａｂｌ易位探针检测７例具有变异ｐｈ染色体易位ｔ（９;２２）（ｑ３４：ｑ１１）衍生而来,结论：ＦＩＳＨ技术比传统细胞遗传学方法更敏感。     

成人急性淋巴细胞白血病分子生物学改变与临床治疗及预后关系的初步研究

应用多聚酶链反应技术检测了１４例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、ＴＣＲγ基因重排及ＩｇＨ基因重排，结果发现，ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因阳性５例，阳性率３５．７％，其中４例为Ｂ－ＡＬＬ，１例ＴＣＲγ及ＩｇＨ基因重排均阴性。ｂｃｒ／ａｂｌ（＋）患者与ｂｃｒ／ａｂｌ（－）患者在临床表现方面无显著性差异，但ｂｃｒ／ａｂｌ（＋）患者治疗效果比ｂｃｒ／ａｂｌ（－）患者差。     

针对bcr-abl融合基因不同位点的三个单核酶体外切割活性的比较

目的：针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因设计并构建了３个针对不同位点的特异性单核酶体转录载体,通过体外切割试验比较其对ｂｃｒ－ａｂｌ合基因的切割效率,为慢粒基因治疗打下基础。方法：（１）首先针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点设计,合成３个相邻的锤头状核酶,将其定向克隆入改建的ｐＤＥＳ载体中,构建３个单核酶体外转录载体并进行序列测定。（２）同时通过ＰＣＲ方法扩增ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点３７６ｂｐ序列,克隆人ｐＢｌｕｅ     

用荧光原位杂交技术研究慢性粒细胞性白血病变异Ph染色体易位的形成

目的：研究慢性粒细胞性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）变异Ｐｈ 染色体的形成。方法：应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,以９ 号、１５ 号、２２ 号整条染色体ＤＮＡ探针和Ｍｂｃｒ／ａｂｌ 易位探针检测７ 例具有变异Ｐｈ 染色体的ＣＭＬ病人骨髓中期分裂相及间期细胞。结果：所有变异Ｐｈ 染色体易位至少涉及３ 条染色体,并由标准Ｐｈ 染色体易位ｔ（９ ;２２）（ｑ３４ ;ｑ１１） 衍生而来。结论：ＦＩＳＨ 技术比传统细胞遗传学方法更敏感,能准确分析变异Ｐｈ 染色体及其形成过程。     

慢性粒细胞性白血病的bcr／abl基因重排

用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测１４例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）和３例其他白血病的ｂｃｒ／ａｂｌ基因的重排，发现１４例ＣＭＬ几乎均有ｂｃｒ区域的新裂，断裂点多在２、３亚区，而对照组均未发现有ｂｃｒ区域的断裂重排，可见ｂｃｒ区域断裂点的检测对ＣＭＬ有特殊的诊断价值，若用ＰＣＲ方法检测ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，引物最好设计在２、３亚区。     

切割bcr/abl核酶的逆转录病毒载体的构建及其对K562细胞的影响

目的进一步研究ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中作用以及探索ＣＭＬ基因治疗的可能性。方法利用ＤＮＡ重组技术将所设计、合成的针对ｂｃｒ／ａｂｌ融合转录本ｂ３ａ２断裂点“锤头型”核酶的基因用ＨＩｎｄⅢ、ｐｓｔⅠ酶切后克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ±质粒相应酶切位点获得ｐＢＲＺ重组子。测定ＲＺ基因序列与设计的一致。用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ从ｐＢＲＺ上切下ＲＺ基因，定向克隆到逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ，得到携带ＲＺ基因的重组逆转录病毒载体ＰＬＲＺＸＳＮ。通过脂质体介导的ＤＮＡ转染法，将ＰＬＲＺＸＳＮ导入慢性粒细胞白血病细胞株Ｋ５６２细胞，通过克隆分析法、ＲＴ－ＰＣＲ、流式细胞仪、ＤＮＡ电泳及电镜观察等方法检测核酶对Ｋ５６２细胞的影响。结果（１）核酶转染４８ｈ后，Ｋ５６２细胞克隆抑制率达８５％；（２）核酶转染７２ｈ后Ｋ５６２细胞Ｐ２１０ｂｃｒ—ａｂｌ蛋白表达率比未转染组低５２％；（３）核酶转染４８ｈ后，Ｋ５６２细胞ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达水平比未转染组低７３％；（４）核酶处理的Ｋ５６２细胞发生凋亡，表现为核酶转染Ｋ５６２细胞７２ｈ后，用流式细胞仪可检测到明显凋亡峰，凋亡率为３７．１％，而空载体及脂     

成人急性淋巴细胞白血病分子生物学改变与临床治疗及预后…

应用多聚酶链反应技术检测了１４例急性淋巴细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、ＴＣＲｒ基因重排及ＩｇＨ基因重排，结果发现，ｂｃｒ／ｆａｂｌ融合基因阳性５例，阳性率３５．７％，其中４例为Ｂ－ＡＬＬ，例ＴＣＲｒ及ＩｇＨ基因重排均阴性。     

筑巢式PCR检测白血病bcr—ablmRNA

应用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测了２６例慢性粒细胞性白血病及１０例急性淋巴细胞白血病患者的ｂｃｒａｂｌｍＲＮＡ，在２１例ｐｈ阳性的慢粒和２例ｐｈ阳性的急淋患者中，检出两种ｂｃｒａｂｌ融合基因ｍＲＮＡ（１６５ｂｐ或９０ｂｐ），５例ｐｈ阴性的慢粒中，４例阳性，１例阴性，经治疗后ｐｈ染色体消失，ＲＴＰＣＲ仍能检出ｂｃｒａｂｌ融合基因。本方法具有高度敏感性，可从１０６个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞。是对慢粒和部分急淋的诊断及监测的一种快速、灵敏、特异的方法     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞集落bcr/abl mRNA的表达

采用ＲＴＰＣＲ 技术对ＣＭＬ 患者骨髓细胞１４ ｄ 的细胞集落群和部分１４ ｄ 或２８ ｄ 的单个细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ ｍ ＲＮＡ 表达进行分析。结果显示：所检测的骨髓细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ 基因的表达均呈阳性,即为ＣＭＬ 集落,与细胞遗传学分析结果一致。该方法为研究ＣＭＬ 造血前体细胞基因表达及其诊断、治疗监测提供了灵敏、有效的分析手段;并可作为研究ＣＭＬ 发病、治疗及筛选抗ＣＭＬ 药物较为理想的方法。     

慢粒白血病abl癌基因表达的研究

选择分别位于ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合基因的Ｍｂｃｒｌ第二外显子和ａｂｌ的第二外显子上的两条引物，对１８例慢粒白血病及２例急淋白血病标本进行逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。结果：在１８例包括ｐｈ（＋）和ｐｈ（－）不同病期的慢粒白血病患者血中均检出ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合基因的表达，其中１４例为Ｋ－２８型表达，１例为Ｌ－６型表达，３例为Ｋ－２８型，Ｌ－６型同时表达；２例急淋白血病标本中１例为Ｋ－２８型表达。研究结果表明，１．ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合基因是慢粒白血病的一个重要分子生物学特征；２．ｐｈ（＋）和ｐｈ（－）慢粒白血病的分子生物学基础相同，即均有ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合基因；３．至少部分急淋白血病与慢粒白血病有相同的分子生物学基础；４．ｂｃｒ的断裂点位置可能有一定的临床意义，但有待进一步研究；５．同时表达Ｌ－６型和Ｋ－２８型的情况多见于急变区，此现象提示体内可能同时有两类不同嵌合的白血病细胞或白血病急变期ｂｃｒ出现新的重排。     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡时Caspase3表达及？…

用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段诱导Ｋ５６２细胞凋亡,观察Ｃａｓｐａｓｅ３表达及活性变化,以阐明Ｃａｓｐａｓｅ在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）发病机制中的作用。方法：用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段ＡＳ和对照无义片段ＮＳ自理５６２,ＳＷＩＭＸＬＥＱＵＭＦ ＹＮＶ ＥＹ display status     

自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞C－Src癌基因表达增强

自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞Ｃ－Ｓｒｃ癌基因表达增强北京医科大学第三医院中心实验室朱应葆，韩　云，傅　欣在各种正常和恶性的动物组织中都有Ｃ－Ｓｒｃ癌基因不同程度的表达。Ｓｒｃ癌基因的产物是酪氨酸蛋白激酶，已有研究表明转化细胞中的自分泌生长是由Ｓｒ...     

霍奇金病RS／H细胞bcl—2,fas和cyclin D1蛋白表达及其相关关系

该文利用免疫组化检测了４０例霍奇金病（ＨＤ）／Ｈ细胞ｂｃｌ－２,ｒａｓ、ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达,并对其相关关系进行了研究。结果显示：ｂｃｌ－２和ｆａｓ蛋白一信号在ＲＳ／Ｈ细胞中主要呈浆膜型。在ＨＤ上亚型ＬＰ,ＮＳ,ＭＣ和ＬＤ中ｂｃｌ－２阳性细胞密度逐渐增高（Ｐ〈０．０５）,而ｆａｓ阳性细胞密度依次降低（Ｐ〈０．０５）;并呈明显负相关（ｒ＝－０．５６９０）。在４０例ＨＤ中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性表达     

bcl-2与bax基因在结肠癌发生中的作用

结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一 ,其发病率呈逐年上升趋势 ,而发病机制有诸多学说 ,已知与多基因突变和细胞凋亡有关。临床上对结肠癌主要采用手术切除 ,辅以化疗、放疗或免疫治疗 ,有时疗效不明显。为了改进目前的治疗技术 ,国际上已尝试进行基因治疗的实验研究。其中调控凋亡基因ｂｃｌ 2与ｂａｘ在肿瘤的发生与指导治疗上将可能起到至关重要的作用。本文就凋亡基因ｂｃｌ 2和ｂａｘ在结肠癌发生中的作用作一综述。1　ｂｃｌ 2基因ｂｃｌ 2基因正常位于人染色体 1 8ｑ2 1 ,编码一个相对分子质量为 2 .5～ 2 .6万的蛋白。Ｂｃｌ 2蛋白…     

慢性粒细胞白血病60例分析

是一步探讨慢性粒细胞白血病（慢粒）的分期、分型和治疗,对６０例患者的临床资料进行了分析。并用Ｒ显带技术检查了４９例患者的染色体核型,用逆转录－聚合酶链反应法检查了１３例ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因。结果发现慢粒急变期Ｈｂ和ＢＰＣ明显低于慢性期;５例为Ｐｈ（一）,４４例为Ｐｈ（＋）;６６．７％的慢粒急变患者有额外染色体异常;５例行异基因骨髓移植术后转为正常核型;８例Ｐｈ（＋）患者ｂｃｒ／ａｂｌ基因亦阳性,     

化疗药物联合细胞因子对bcr—abl转基因小鼠骨髓细胞生长及？…

应用Ｈｕ或５－Ｆｕ和鼠干细胞因子及鼠白细胞介素－３培养含金属硫蛋白启动子和增强子序列、ｂ ｒ－ａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号号序列的转基因慢粒白血病小鼠骨髓细胞,观察化疗药物及细胞因子单独或联合应用对ＭＴ／ｐ２１０（ｂｒ－ａｂｌ）转基因小鼠骨骨细胞生长的影响,并采用ＲＴ－ＰＣＲ     

造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤

目的：探讨造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤的疗效、移植过程中的并发症及其预防和移植后的植活证据及微小残余病灶检测等问题。方法：２例行同胞间异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）、５例行自体外周血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ）。采用ＣｓＡ＋ＭＴＸ预防ＧＶＨＤ;ＰＧＥ１＋潘生丁预防ＨＶＯＤ;以ＡＰＯＢ、ＳＭ７和Ｄ１Ｓ８０三个位点多态性分析作为植活证据;以ｂｃｒ／ａｂｌ、ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因或ＩｇＨ基因重排     

Bcr—abl特异性系列核酶体外切割活性比较及诱导K562细胞凋亡？…

构建单、双及三单位核酶、鉴定其体外切割活性及对Ｋ５６２生物学特性的影响,探讨核酶用于基因治疗的前景。方法首先针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点设计并合成３个单核酶,耐后通过基因重组构建单、双及三核酶载体,以体外切试验鉴定并比较其活性。