4-羟苯基维甲酸诱导常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿衬里上皮细胞凋亡

目的：探讨4－羟苯基维甲酸（4－HPR）诱导常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用MTT法检测1，2．5，5，10μmol/L 4-HPR分别作用ADPKD囊肿衬里上皮细胞24，48，72，96h细胞的增殖情况；采用锥虫蓝染色，DNA电泳，Hoechst 33342染色检测4－HPR作用后的肝细胞生长因子（HGF）刺激的ADPKD囊肿衬里上皮细胞的存活率和凋亡率；采用免疫组化及半定量分析检测4－HPR和HGF刺激的囊肿衬上皮细胞表达HGF和c-Myc蛋白的作用。结果：与对照组比较，4－HPR抑制了ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖，且呈量效和时效关系，5μmol/L或10μmol/L 4－HPR作用96h后抑制效果最强（P＜0．01）。4－HPR降低HGF刺激的囊肿衬里上皮细胞的存活率，且诱导细胞凋亡，与对照组比较差异显著（P＜0．01）。与HGF组比较，4－HPR显著降低HPF刺激的囊肿衬上皮细胞表达HGF蛋白（P＜0．01），但不影响表达c-Myc蛋白。结论：4－HPR诱导了HGF刺激的ADPKD囊肿衬里上皮细胞凋亡，其机制可能通过降低HGF刺激的ADPKD囊肿衬里上皮细胞表达HGF蛋白，不是影响c-Myc蛋白的表达。     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。     

细胞因子HGF体外增强骨肉瘤细胞株的增殖和黏附性

【目的】研究肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)及其受体蛋白c-Met在骨肉瘤细胞株MG-63和HOS中的表达及对瘤细胞生物学行为的影响,探讨HGF/c-Met系统在骨肉瘤细胞生长侵袭过程中的作用。【方法】用流式细胞术检测HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达;外源性HGF刺激此2株细胞株后,用MTT法、黏附性检测方法研究细胞增殖速率和黏附性的变化。【结果】HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的阳性表达率均低于3%。HGF浓度达50ng/mL以上时,MG-63和HOS的增殖速率显著增高,P<0.01。当外源性HGF的浓度分别达5ng/mL和10ng/mL时,MG-63和HOS的黏附性指标即显著升高,P<0.01。外源性HGF刺激后HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达略有变化,但差异无统计学意义,P>0.05。【结论】HGF可以促进骨肉瘤细胞株MG-63和HOS的体外增殖和黏附能力。     

c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的:近年来胆管癌的发病率和病死率呈上升的趋势,5年生存期低于5%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法.探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌(CCA)QBC939细胞增殖的影响. 方法:构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人CCA QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化. 结果:c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着其浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500nmol/L c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达65%.HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100nmol/L c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达26%,且随浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500nmol/L c-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达85%.HGF刺激4h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的P13K/Akt活化,500 nmol/L c-Met siRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化.HGF显著诱导人CCAQBC939细胞ERK1/2活化,50ng/ml HGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化.HGF显著诱导人CCA QBC939细胞细胞周期素D1和A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的细胞周期素D1和A表达. 结论:针对人c-Met基因的RNA干扰可有效阻断人CCA QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断P13K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖.     

肝细胞生长因子体外活化ERK1/2途径诱导鼻咽癌细胞上皮-间叶性转换

目的 研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)体外促进鼻咽癌细胞侵袭能力和改变癌细胞形态的原因,探讨鼻咽癌细胞早期发生侵袭转移的机制.方法 采用蛋白印迹法和免疫组化染色检测侵袭转移相关因子上皮性钙黏素(E-cadherin)和β-链接素(β-catenin)以及调控因子ERK1/2和p38在此过程中的相应改变,并观察鼻咽癌细胞在HGF因子刺激作用下形态发生的转变.结果 CNE-2细胞在HGF诱导30 min后,磷酸化的ERK1/2蛋白即表达增强,诱导1 h后表达强度开始减弱,但p38蛋白始终未见明显变化.持续HGF因子诱导CNE-2细胞5 d(120 h)后,癌细胞由多边形上皮样形态转变为梭形间叶性细胞形态,细胞相互分离,经免疫组化染色显示癌细胞Met蛋白表达较未经HGF刺激的细胞明显增强,但此时细胞上皮性钙黏素和β-链接素的表达却无明显改变.结论 细胞因子HGF能够体外诱导CNE-2细胞形态发生上皮-间叶性转换,其机制与HGF/c-Met系统活化ERK1/2途径有较密切的关系,而p38 MAPK途径在此过程中并非是关键性影响因素.     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

肝细胞生长因子对滋养细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对胎盘滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响.方法 常规体外培养HTR-8/SVneo细胞,用不同浓度HGF(0、10、20、50、100ng/mL)处理细胞48h.设0浓度组为对照组;用HLX1 siRNA转染细胞24h后继续以20 ng/mL HGF刺激48h,分空白对照组(MC)、siRNA+HGF组、MC+HGF 3个实验组;应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法测定各组细胞中HLX1 mRNA和蛋白的表达;明胶酶谱测定上清中MMP-2的表达;Matrigel侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 ① HGF处理组细胞HLX1 mRNA表达水平与对照组比较上调了90%～475%(P<0.01),且与HGF呈剂量依赖性;20ng/mL HGF使HLX1蛋白表达水平上调(156.7±6.4)%,P<0.01;② siRNA+HGF组与MC组比较.细胞HLX1 mRNA和蛋白的表达水平分别下降(54.57±0.31)%及(68.44±2.48)%,P<0.01;③ 20ng/mL HGF处理组细胞其上清MMP-2表达水平与对照组比较上调(394.6±2.9)%,P<0.01;siRNA+HGF组与MC组比较MMP-2表达水平下降(81.5±0.6)%,P<0.01;④ 20ng/mL HGF处理的HTR-8/SVneo细胞穿过Matrigel的细胞数为(71±5)个,与对照组(50±3)个比较侵袭能力明显增强(P<0.01);siRNA+HGF组穿膜细胞数明显减少为(20±4)个,MC组为(43±3)个,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 HGF可提高HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及细胞的侵袭力,且侵袭力的增加可能与HLX1表达水平升高有关.     

急性脑梗死患者血清肝细胞生长因子及S-100β蛋白变化的意义

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清肝细胞生长因子(HGF)和S-100β蛋白水平变化的意义。方法:采用ELISA对36例脑梗死患者急性期、恢复期和30例对照组的血清HGF,S-100β蛋白水平进行动态检测,比较ACI患者在不同病情、不同梗死面积、不同神经功能缺损程度时的血清HGF,S-100β蛋白水平的变化,采用Spean-nan法对二者进行相关性分析。结果:脑梗死患者急性期血清HGF,S-100β蛋白水平显著高于对照组,在不同梗死面积、神经功能缺损程度之间比较有统计学意义。HGF与S-100β水平呈正相关。在恢复期与对照组比较无显著性差异。结论:HGF与S-100β蛋白可作为预测ACI患者病情严重程度的生化指标,二者相结合进行评价意义更大。     

肝细胞生长因子及其受体在口腔鳞癌和颈淋巴结中的表达

目的通过检测肝细胞生长因子(HGF)及其受体c—Met在口腔鳞癌中的表达水平,探讨HGF／c-Met系统对口腔鳞癌侵袭转移的影响。 方法对50例确诊的原发、复发口腔鳞癌病例标本,采用免疫组织化学(SABC)法检测口腔鳞癌组织和颈部淋巴结中HGF和c Met的表达情况。将收集的病例按病理类型及临床资料分组,并比较各组间HGF和c-Met的表达差异。 结果口腔鳞癌组织及有转移灶的淋巴结中,癌细胞HGF及c-Met蛋白的阳性表达率为100％,颈部淋巴结中HGF的阳性率为60％,淋巴细胞内均无c-Met蛋白的表达。癌细胞c-Met蛋白的表达水平和颈淋巴结内淋巴细胞HGF表达阳性与口腔鳞癌的局部淋巴结转移高度相关(P=0．0000),癌细胞中HGF的高水平表达与肿瘤的侵袭（P=0.0020）、复发相关（P=0.0139）。 结论口腔鳞癌中HGF和c-Met蛋白表达升高、颈部淋巴结中淋巴细胞HGF表达阳性可能促进肿瘤的侵袭、复发、局部淋巴结转移,提示患者预后不良。     

细胞因子HGF体外增强骨肉瘤细胞株的增殖和黏附性

【目的】研究肝细胞生长因子，离散因子（HGF／SF）及其受体蛋白c-Met在骨肉瘤细胞株MG-63和HOS中的表达及对瘤细胞生物学行为的影响，探讨HGF／c-Met系统在骨肉瘤细胞生长侵袭过程中的作用。【方法】用流式细胞术检测HGF-α、HGF-β、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达；外源性HGF刺激此2株细胞株后，用MTT法、黏附性检测方法研究细胞增殖速率和黏附性的变化。【结果】HGF-α、HGF-β、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的阳性表达率均低于3％。HGF浓度达50ng／mL以上时．MG-63和HOS的增殖速率显著增高，P〈0．01。当外源性HGF的浓度分别达5ng／mL和10ng／mL时，MG-63和HOS的黏附性指标即显著升高，P〈0．01。外源性HGF刺激后HGF-α、HGF-β、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达略有变化，但差异无统计学意义，P〉0．05。【结论】HGF可以促进骨肉瘤细胞株MG-63和HOS的体外增殖和黏附能力。     

肝细胞生长因子与恶性血液病的相关研究进展

肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）是1984年日本学者Nakamura等从部分肝切除大鼠血浆中分离纯化获得一种能刺激原代培养肝细胞生长、促进肝细胞DNA合成的肝源性活性因子,Nakamura又于1989年成功地克隆了大鼠和人的肝细胞生长因子（HGF）的cDNA并进行了表达。最初认为HGF是一种刺激肝细胞增生的有丝分裂原,对肝切除或化学损伤后的肝再生起重要作用。目前已知,HGF来源于间质细胞,其受体是原癌基因c-Met（C-metprotoncogene）的产物,广泛分布于上皮细胞。HGF能刺激多种类型细胞分化、增殖、再生、运动、迁移及形态的发生,是一种多功能的细胞因子。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的 检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用.方法 用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖.结果 AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用.结论 HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用.     

六味地黄丸含药血清及梓醇对肾小管上皮细胞HK-2转化生长因子β1/Smad通路的影响

目的：观察六味地黄丸含药血清及其主要单体梓醇对肾小管上皮细胞株HK-2转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：制备大鼠六味地黄丸含药血清,采用四甲基偶氮唑盐法和乳酸脱氢酶释放实验确定药物最适作用浓度。六味地黄丸含药血清和梓醇作用于TGF-β1刺激（或不刺激）的HK-2细胞,并设肝细胞生长因子（hepatocyte growthfactor,HGF）为阳性对照,采用蛋白质印迹法观察Smad通路分子Smad2、Smad7和Ski相关活性蛋白N（Ski-related novel protein N,SnoN）蛋白表达的情况。结果：与HGF作用相似,10%浓度六味地黄丸含药血清可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad2蛋白磷酸化并促进核转录抑制因子SnoN的表达。梓醇亦可显著抑制HK-2细胞Smad2蛋白磷酸化。六味地黄丸含药血清及梓醇对HK-2细胞Smad7蛋白表达未见明显调控作用。结论：在TGF-β1刺激HK-2细胞模型中,六味地黄丸含药血清拮抗Smad通路活化的作用与HGF相似,梓醇是六味地黄丸中主要发挥作用的单体之一。     

牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶刺激牙龈成纤维细胞内钙离子浓度变化及其机制

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶（rRgpB）刺激蛋白酶激活受体（PAR）介导的人牙龈成纤维细胞（HGF）内钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的动态变化及细胞内信号转导通路。方法：流式细胞术检测 HGF 表达的 PAR 类型,CCK-8 法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌rRgpB作用于 HGF,激光共聚焦显微镜观察 HGF 内[Ca²⁺]_i的动态变化及 PAR-1 拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测 HGF 内 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、胞外信号调节激酶 1/2（ERK1/2）、p38 丝裂原激活的蛋白激酶（p38 MAPK）、p65 蛋白水平的变化。结果：HGF 表达 PAR-1 和 PAR-3,且 rRgpB 可促进 HGF 生长。细胞受到 rRgpB 作用后能激发瞬时增强的[Ca²⁺]_i荧光信号,并且这种作用能够被 PAR-1 拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,rRgpB 诱导细胞6、12?h后,JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达均显著上调（均P<0.05）,但 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平未见明显变化（P>0.05）;PAR-1 拮抗剂成功抑制了 rRgpB 诱导的 JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达的上调。结论：rRgpB 通过 PAR-1 诱导 HGF 内[Ca²⁺]_i增加,并激活细胞内 JNK、ERK1/2、核因子κB 信号通路。     

MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

目的探讨结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)、肝细胞生长因子(HGF)和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学和Western blot技术检测20例正常卵巢组织、19例卵巢良性上皮性肿瘤组织和52例卵巢上皮性癌组织中MACC1、HGF和C-met蛋白的表达情况,分析三者与卵巢癌临床病理指标的关系及三者在卵巢癌组织中表达的相关性。结果 MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌组织中的阳性率分别为73.1%、63.5%和78.8%,相对表达量分别为0.72±0.05、0.64±0.04和0.79±0.04,均显著高于正常卵巢和良性肿瘤组织(P<0.05)。在卵巢上皮性癌中,MACC1、HGF和C-met异常高表达与临床分期、组织分化和淋巴结转移相关,临床分期越晚、组织分化越差、伴随淋巴结转移的癌组织中MACC1、HGF和C-met蛋白表达越高(P<0.05)。卵巢上皮性癌中MACC1蛋白的表达与HGF和C-met蛋白的表达呈正相关(r=0.350,P=0.011;r=0.429,P=0.002),HGF蛋白与C-met蛋白表达呈正相关(r=0.487,P=0.000)。结论 MACC1具有作为晚期卵巢癌分子标志物的潜在价值,MACC1、HGF和C-met异常可能协同参与卵巢上皮性癌的恶性进展。     

HGF 蛋白与 C-M et 蛋白在胆管癌中的表达及临床意义

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）与其受体（C-Met）蛋白在血清及组织中的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测42例初治胆管癌患者及20例健康对照者血清 HGF 及 C-Met 水平;应用免疫组织化学技术观察42例胆管癌组织及正常组织 HGF 及 C-Met 的表达。结果术前1 d 胆管癌患者血清中 HGF 蛋白与 C-Met 蛋白水平均高于健康对照者（1．53±0．48）ng／mL vs ．（0．48±0．55）ng／mL ;（16．28±5．17）ng／mL vs ．（4．31±2．84）ng／mL ,差异均有统计学意义（P ＜0．05）。术后第3天胆管癌患者血清中 HGF 蛋白与 C-Met 蛋白水平较术前变化不明显,而术后第7、10天 HGF 蛋白与 C-Met 蛋白水平较术前则明显降低。另外,HGF 蛋白与 C-Met 蛋白在胆管癌组织的阳性表达率分别为76．2％、81．0％,在正常组织的表达分别为15．0％、20．0％。结论 HGF 蛋白与 C-Met 蛋白在胆管癌患者血清和组织中异常表达,可能与胆管癌的发生、发展有密切关系。     

HGF/Akt信号通路调控肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的：观察肝细胞生长因子（HGF）对人肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制。方法：用MTT法检测HGF处理后肝癌细胞增殖的变化,RIPA蛋白裂解液裂解肝癌细胞后提取总蛋白,BCA比色法测定蛋白浓度,将蛋白煮沸5 min使其变性,取等量蛋白进行Western blot分析。结果：50 ng/ml和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖。Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调。siRNA干扰Akt的表达,可显著抑制HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制。结论：本研究初步说明,HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖。     

肝细胞生长因子诱导糖尿病大鼠早期肾小球肥大

目的 :检测链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病 (DM)大鼠早期肾脏中肝细胞生长因子 (HGF)和P2 1的表达 ,探讨HGF在DM大鼠早期肾小球肥大中的作用。方法 :STZ诱导DM大鼠动物模型后第 3,7,14d ,分别用免疫组化法、ELISA法和RT PCR检测了肾脏中HGF蛋白及mRNA的表达 ,同时用免疫组化法检测了肾脏中P2 1蛋白的表达。结果 :STZ诱导的DM大鼠早期 ,HGF在肾脏中的表达主要位于肾小球内 ,HGF蛋白和mRNA均于STZ注射后的第 3d开始升高 ,并于第 7d时达到高峰 ;肾小球内P2 1蛋白的表达于STZ注射后的第 7d达到高峰 ;DM大鼠肾小球内HGF蛋白水平和P2 1蛋白积分呈正相关 (r=0 .9346 ,P <0 .0 1)。结论 :STZ诱导的DM大鼠早期肾小球内有HGF的表达 ,其表达可能与DM早期肾小球肥大有关。     

Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响

目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pcDNA3．1(his-myc-Tec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。     

肝细胞生长因子及其受体与神经纤毛蛋白1在骨肉瘤中的表达及意义

目的检测骨肉瘤组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(C-met)和神经纤毛蛋白1(NRP1)的表达特征,探讨三者的关系及临床意义。方法选择70例骨肉瘤术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择50例成熟的骨组织脱钙后的蜡块及临床资料作为对照组,应免疫组织化学技术检测2组中HGF、C-met和NRP1蛋白的表达,探讨HGF、C-met和NRP1在肿瘤患者不同临床病理特征的表达差别及其相关性。结果观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率与肿瘤的转移、脉管浸润、临床分期及Ki67的表达密切相关。观察组中HGF、C-met和NRP1之间的表达具有正相关性。结论骨肉瘤组织中HGF、C-met和NRP1高表达,三者对病变的进展具有重要作用,术后联合检测HGF、C-met和NRP1的表达可能对判断预后有一定价值。