凋亡素选择性诱导肿瘤细胞凋亡及其分子机制

来源于鸡贫血病毒的凋亡素能够选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,且不依赖于ｐ５３介导,对ｂｃｌ－２过表达不敏感的特点,使其成为一种非常有前景的抗肿瘤剂。该文介绍了凋亡素诱导细胞凋亡的作用特点,并对其凋亡选择性诱导研究的分子机制进行了探讨。     

HPLC法测定紫果西番莲叶中异牡荆素的含量

目的应用HPLC法,对紫果西番莲叶中异牡荆素的含量进行测定。方法首先采用硅胶柱色谱进行分离纯化;采用HPLC,Hypersil ODS C18色谱柱（4．6×250mm,5μm）;乙腈-0．1磷酸（18：82）为流动相;流速1．0ml／min;进样量：10μl,检测波长350nm。结果异牡荆素在0．012～0．120mg／ml范围内时,呈现良好线性关系（R2=0．997）;平均回收率为98．26％,RSD1．4％;紫果西番莲叶中异牡荆素的平均含量为0．0873％。结论该方法准确、可靠、重复性良好,可用于西番莲属植物中异牡荆素含量的测定。     

凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡

目的：克隆凋亡素（apoptin)的全长基因,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡,方法：从CAV病毒基因组TK5803中通过PCR技术扩增凋亡素基因,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo,序列测定证实其正确性,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体,采用脂质体转染HeLa细胞,转染3d后Honchest33258染色并于荧光显微镜下观察细胞状态,结果与讨论：核酸序列分析证实所克隆的凋亡基因与文献报道的一致,将其成功克隆至真核表达载体,pCDNA3.1/his/Topo和pCIneo,构建了真重组质粒pCIneo-apoptin和pCDNA3.1/His/Topo-apoptin,转染Hela细胞3d后可见明显的细胞凋亡,而只转染空质粒的对照组则较少,表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡,本研究为进一步研究凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制打下了基础。     

携带凋亡素的重组腺病毒激活AMPK诱导人膀胱癌EJ-1细胞S期阻滞

目的 探讨携带凋亡素(Apoptin)的重组腺病毒Ad-VT对人膀胱癌EJ-1细胞的杀伤作用及其细胞周期调节机制.方法 取对数生长期的EJ-1细胞分别给予不同感染剂量的腺病毒载体对照(Ad-T)或Ad-VT处理,通过CCK-8法和克隆形成实验检测Ad-T和Ad-VT对EJ-1细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测细胞周期分...     

存活素与辐射诱导的凋亡

存活素(survivin)是一种新发现的细胞内蛋白，属于抗细胞凋亡蛋白家族，在胚胎和各类肿瘤中均表达，但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现。阐明存活素在细胞凋亡和增生中的分子机制及其作用，在抗癌治疗和抑制对机体有害的细胞凋亡方面具有重要意义。     

血管紧张素Ⅱ诱导人胎肾系膜细胞凋亡及机制的初步研究

观察了血管紧张素Ⅱ的１型和２型受体及白细胞介素－１β转化酶在人胎肾系膜细胞表达２及其与肾小球系膜细胞凋亡的关系。采用６个月龄人胎肾培养肾小球系膜细胞,经１０＾＿８,１０＾－７,１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ诱导后,用逆转录－聚合酶链反应技术检测了胎肾系膜细胞的ＡＴ１,ＡＴ２受体和ＩＣＥ基因的ｍＲＮＡ表达情况。     

存活素与辐射诱导的凋亡

存活素(survivin)是一种新发现的细胞内蛋白,属于抗细胞凋亡蛋白家族,在胚胎和各类肿瘤中均表达,但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现。阐明存活素在细胞凋亡和增生中的分子机制及其作用,在抗癌治疗和抑制对机体有害的细胞凋亡方面具有重要意义。     

凋亡素2配体对射线诱导的肺腺癌H1975细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡素2配体(Apo-2L)对射线诱导的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药的肺腺癌H1975细胞凋亡作用的影响。方法 将肺腺癌H1975细胞分为空白对照组(未经任何处理)、药物组(凋亡素2配体组)、单纯照射组和药物联合照射组(凋亡素2配体+照射组),4组。同时,不同浓度的凋亡素2配体(200和228 ng/ml)作用于H1975细胞24 h后,均接受不同剂量的照射(照射剂量分别为1、1.5、2、2.5、3、3.5和4 Gy)。24 h后流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定H1975细胞的抑制率。结果 MTT结果显示腺癌H1975抑制率随凋亡素2配体浓度增加而升高(χ²=136.17,P<0.05),凋亡率随凋亡素2配体浓度及照射剂量增加而增加(不同浓度t=5.12、6.38、7.89、9.27、11.77、14.12,P<0.05;不同剂量F=5.89、6.97,P<0.05)。放射增敏作用与放射剂量和药物浓度呈正比(不同浓度t=1.37、1.45、1.67、1.90、2.34、3.72,P<0.05;不同剂量F=26.74,P<0.05)。流式细胞仪检测各组的凋亡率,结果显示药物联合照射组凋亡率明显增加,差异有统计学意义(χ²=78.02,P<0.05)。结论 凋亡素2配体对体外培养的腺癌H1975细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,且联合射线能明显提高腺癌H1975细胞的凋亡率。     

角质形成细胞凋亡的分子机制

细胞程序性死亡称为凋亡,很多学者认为角质形成细胞的分化是一种特殊形式的细胞凋亡。许多皮肤病如银屑病、扁平苔藓、湿疹等与角质形成细胞的凋亡异常密切相关,本文综述了角质形成细胞凋亡中起重要作用的基因及其调控的具体分子机制等有关方面的问题。     

蛇床子素抑制HaCaT细胞增殖及诱导凋亡的影响

目的探讨蛇床子素抑制HaCaT细胞的增殖及诱导凋亡的影响。方法将不同浓度蛇床子素溶液作用于HaCaT细胞24h、48h和72h,用MTT法和流式细胞仪检测其对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。结果蛇床子素能以时间和浓度依赖性的方式抑制HaCaT细胞增殖,且能以浓度依赖性的方式诱导HaCaT细胞凋亡。结论蛇床子素可以抑制HaCaT细胞的增殖并诱导HaCaT细胞的凋亡。     

Synchronous primary adenocarcinoma and adenosquamous carcinoma of the esophagus

Multiple malignant esophageal tumors of the same cell type are described. In the esophageal mucosa, widespread carcinomatous transformation may be observed and multicentric invasive squamous cell carcinomas may develop. The concomitance of two independent esophageal malignant neoplasms of different epithelial histogenesis is uncommon. Synchronous adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the esophagus is reported. Adenosquamous carcinoma of the esophagus is a rare tumor. Adenocarcinoma of the esophagus represents 10% of esophageal cancer. We report a case of a synchronous primary invasive adenosquamous carcinoma and adenocarcinoma of the esophagus. Both tumors were demonstrated radiographically. The peculiarity of this neoplastic association and the importance of complete radiographic esophageal evaluation in patients with one obvious obstructing tumor of the esophagus are emphasized. Electronic Publication     

白杨黄素影响两种胃癌细胞系增殖与凋亡的研究

 目的 研究白杨黄素对两种胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45是否具有抑制作用的分子生物学机制.方法 通过MTT法检测白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定经白杨黄素处理后两种细胞的细胞周期,Westen-blot测定凋亡相关因子Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达水平.结果 白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞具有增殖抑制作用,呈时间浓度依赖性;能够将细胞周期阻滞于Sub G1期;能上调Caspase-3,下调Survivin和Bcl-2的基因表达.结论 白杨黄素能够诱导SGC-7901和MKN-45细胞的凋亡并有效地抑制其增殖.其机制可能与干扰细胞周期及激活Caspase-3,抑制Survivin和Bcl-2有关.     

黄荆子乙酸乙酯提取物增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用

目的观察黄荆子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitexnegundoseed,Evn-50）和顺铂（cisplatin,DDP）在体外对人卵巢癌细胞株COC1凋亡的影响,探讨Evn-50提高COC1细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法Evn-50,DDP以及两药联合分别处理人卵巢癌COC1细胞株,台盼蓝染色计数法检测药物对细胞生长的抑制率,并用流式细胞术、AO/CB荧光双染色法测Evn-50,DDP以及两药联合对细胞凋亡的影响。结果细胞抑制率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且明显高于同剂量单用组（P〈0.01）;细胞凋亡率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且高于同剂量单用组（P〈0.01）,流式细胞仪分析结果显示Evn-50呈浓度依赖性将COC1细胞阻滞在G2/M期,而DDP将COC1细胞阻滞在G1/S期。结论Evn-50有增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用,其机制可能与二者对卵巢癌细胞株COC1周期阻滞点不同有关。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

 目的 探讨干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 选择FoxM1高表达食管癌细胞株,构建FoxM1-shRNA干扰质粒转染食管癌细胞,观察干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 成功转染后细胞中FoxM1蛋白水平表达明显降低(t=13.17, P<0.01),细胞增殖明显受抑并呈时间依赖性,72 h抑制效果最显著(68.0%±6.4%,P<0.05);干预组细胞增殖周期发生G₁期阻滞(59.14%±1.69% vs 40.51%±1.45%,t=14.23,P<0.01)、细胞凋亡增加(2.48%±0.49% vs 35.37%±0.56%,t=76.56,P<0.01)。结论 干预FoxM1表达使细胞周期发生G1期阻滞并能促进细胞凋亡,从而抑制TE1细胞增殖,FoxM1可能是食管癌基因治疗潜在的有效靶点。     

青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用及机制的研究

目的 探讨青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用。方法 应用甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测青蒿素对鼻咽癌CNE细胞的抑制效应;克隆形成实验观察青蒿素对CNE细胞的放射敏感性的影响;流式细胞术测定照射后CNE细胞周期的再分布。结果 青蒿素对CNE细胞的抑制率呈药物剂量依赖性增加。青蒿素能明显增加γ射线对CNE细胞的克隆形成抑制作用,1 μmol/L青蒿素对CNE细胞的放射增敏比(SER)为1.26。青蒿素能够去除γ射线照射后CNE细胞的G₂/M期阻滞,与单纯6 Gy照射组相比,青蒿素+照射组G₂/M期阻滞减少。结论 青蒿素通过减弱辐射诱导的G₂/M期阻滞,从而增加γ射线对CNE细胞的杀伤作用。     

食管癌经胸入路外科手术对肺功能的影响

目的：为观察食管癌患者行经胸入路不同术式外科治疗后肺功能及动脉血气变化的情况。方法：对３７例胸段食管癌患者行食管癌根治性切除、食管胃胸内吻合术，手术前后进行肺功能测定、动脉血气分析。结果：开胸手术及胸腔内胃在６周内对患者的肺功能具有不良影响，表现为肺功能减退、低氧血症。结论：认为经胸入路的食管癌外科手术在术后６周内使肺功能减退，产生低氧血症，而不同术式之间对肺功能的影响差别不大     

和厚朴酚对鼻咽癌细胞生长及其放射敏感性的影响

目的 研究和厚朴酚对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞生长和放射敏感性的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测CNE-1和CNE-2细胞生长;流式细胞术检测细胞周期变化;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;Western blot法测定相关蛋白表达水平;采用细胞克隆形成法观察和厚朴酚对细胞放射敏感性的影响。结果 和厚朴酚明显抑制CNE-1和CNE-2细胞生长,且存在着明显剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)在CNE-1和CNE-2细胞分别为2.84和2.68 μmol/L(24 h),2.50 和2.20 μmol/L(48 h)。2.5 μmol/L和厚朴酚处理24 h后,CNE-1细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞分别达到24.53%、23.05%和7.13%,与未经处理的对照组之间差异均有统计学意义(t=-41.17、-8.18、-6.08, P<0.05)。4和3 μmol/L的和厚朴酚分别使CNE-1细胞和CNE-2细胞中促凋亡蛋白Bax和凋亡效应蛋白Caspase 3的表达水平出现2.31倍和1.89倍(t=-15.92、-17.15,P<0.05)及4.43倍和1.85倍(t=-29.39、-13.47,P<0.05)的增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达降低45.05%和36.50%(t=26.94、66.14,P<0.05)。和厚朴酚24 h预处理可以明显提高CNE-1和CNE-2细胞对X射线的放射敏感性,SER分别为1.41和1.88。3 Gy X射线照射明显增加两种细胞的G₂/M期细胞数量(t=-14.96、-19.26, P<0.05),和厚朴酚降低了辐射导致的G₂/M期细胞阻滞(t=7.65、4.98,P<0.05),同时Cyclin B1蛋白表达明显增加(t=-33.07、-73.49,P<0.05)。结论 和厚朴酚诱导人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞凋亡和细胞坏死而导致细胞生长的抑制。干预X射线诱导G₂/M期细胞阻滞可能是和厚朴酚预处理提高两种鼻咽癌细胞放射敏感性的重要作用机制。     

Observation of normal appearance and wall thickness of esophagus on CT images

Purpose

This study sought to observe the appearance of normal esophagus, measure and record the thickness of esophageal wall in order to offer reference for estimating esophageal wall abnormalities and delineating gross tumor target of esophageal carcinomas on CT images.

Materials and methods

From September 2006 to February 2007, 110 consecutive CT films from adult patients without esophageal diseases were collected and studied. On CT images the entire esophagus was divided into cervical, thoracic, retrocardiac and intraabdominal segments. The appearance of esophagus was described when the esophagus contracted or dilated. Thickness of esophageal wall and diameters of esophageal cavities were measured by hard-copy reading with a magnifying glass. Age, sex and the thickness of subcutaneous fat of each patient were recorded.

Results

It was observed that the esophagus presented both contracted and dilated status on CT images. In each segment there were certain portions of esophagus in complete contraction or dilatation. 47 images (42.7%) showed contracted esophagus in each segment available for measurement. The largest wall thickness when esophagus was in contraction and dilatation was 4.70 (95%CI: 4.44-4.95) mm and 2.11 (95%CI: 2.00-2.23) mm, respectively. When contracting, the intraabdominal esophagus was thicker than the cervical, thoracic and retrocardiac parts, and the average thickness was 5.68 (95%CI: 5.28-6.09) mm, 4.67 (95%CI: 4.36-4.86) mm, 4.56 (95%CI: 4.31-4.87) mm, and 4.05 (95%CI: 3.71-4.21) mm, respectively. When the esophagus was dilating, the average esophageal wall thickness was between 1.87 and 2.70 mm. The thickest part was cervical esophagus. Thickness of esophageal wall was larger in males than that of females (5.26 mm vs. 4.34 mm p < 0.001). Age and the thickness of subcutaneous fat had no significant impact on the thickness of esophageal wall (p-value was 0.056 and 0.173, respectively).

Conclusion

The Observation of normal appearance and wall thickness of esophagus helps us to identify thickened esophageal wall on CT images using new CT scan technologies. Thus it is probably helpful in judging esophageal diseases and delineating gross tumor target of esophageal carcinomas in modern radiotherapy.     

miR-141过表达增强人食管癌细胞的放射敏感性

目的 研究miR-141对食管癌细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 将miR-141 mimic或miR-对照转染到食管癌KYSE-150细胞中,分别使用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-141和增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。CCK-8,流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放射敏感性变化。结果 随放射剂量的增加,食管癌细胞中miR-141表达逐渐降低（t=2.57~8.96,P<0.05）。miR-141过表达抑制了细胞的增殖和克隆形成能力,促进了KYSE-150细胞凋亡,使得放射敏感性增高（t=3.24,P<0.05）。此外,与对照组相比,miR-141过表达显著抑制KYSE-150细胞中的Ki67和Bcl-2蛋白表达（t=6.56、8.24,P<0.01）,并促进Bax蛋白表达（t=3.24,P<0.01）,进一步证实了miR-141增强食管癌细胞的放射敏感性。结论 miR-141通过调控细胞增殖和凋亡相关蛋白表达增强食管癌细胞的放射敏感性。